耐藥結(jié)核病診斷新技術(shù)演示文稿

耐藥結(jié)核病診斷新技術(shù)演示文稿現(xiàn)在是1頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日（優(yōu)選）耐藥結(jié)核病診斷新技術(shù)現(xiàn)在是2頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日全球范圍內(nèi)結(jié)核病疫情嚴(yán)重

患病率高：新發(fā)患者1040萬(wàn)/年，其中有120萬(wàn)（11%）HIV患者；

死亡率高：每年死亡人數(shù)達(dá)140萬(wàn)（13.46%），HIV/TB:死亡人數(shù)40萬(wàn)（33.33%）；

耐藥率高：48萬(wàn)新發(fā)的MDR-TB病例和10萬(wàn)耐利福平結(jié)核?。≧R-TB）病例；

接受MDR檢測(cè)、報(bào)告和治療的MDR-TB不足1/3，接受治療的MDR-TB治愈成功率只有50%

2016年全球結(jié)核病報(bào)告現(xiàn)在是3頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日現(xiàn)在是4頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日2015年全球估計(jì)MDR-TB患者數(shù)現(xiàn)在是5頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日結(jié)核病快速及時(shí)診斷是結(jié)核病防控

重要因素現(xiàn)在是6頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日靈敏準(zhǔn)確操作簡(jiǎn)便檢測(cè)時(shí)間短閉管檢測(cè)檢測(cè)位點(diǎn)全面對(duì)新型耐藥檢測(cè)技術(shù)的要求現(xiàn)在是7頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日現(xiàn)在是8頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日基因芯片技術(shù)現(xiàn)在是9頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日結(jié)核病耐藥與基因64-68%

rpsL基因突變70%embB基因突變70%65%耐藥基因93%95%95%

rpoB基因突變利福平異煙肼50-70%

katG基因突變5-10%

inhA基因突變6-13%

ahpC基因啟動(dòng)子區(qū)域突變鏈霉素乙胺丁醇

多數(shù)研究報(bào)告提示：耐藥的發(fā)生與結(jié)核桿菌的基因突變有關(guān)?？傮w上是基因一個(gè)或幾個(gè)核苷酸突變（表現(xiàn)增加、缺失、替代），造成核苷酸編碼錯(cuò)誤致氨基酸錯(cuò)位排列，影響藥物與靶位酶結(jié)合產(chǎn)生耐藥現(xiàn)在是10頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日現(xiàn)在是11頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日基因芯片（原理）激光共焦掃描儀軟件判讀樣品制備儀雜交儀

基因芯片方法是基于結(jié)核桿菌的利福平和異煙肼耐藥性相關(guān)的rpoB/katG/inhA的基因位點(diǎn)發(fā)生突變，通過(guò)PCR擴(kuò)增、和固定于尼龍膜上的寡核苷酸探針進(jìn)行雜交、掃描，檢測(cè)熒光信號(hào)的有無(wú)，判斷特定位點(diǎn)的突變情況和結(jié)核菌耐藥性?；蛐酒瑑x和試劑獲國(guó)家SFDA和歐盟CE認(rèn)證12現(xiàn)在是12頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日基因芯片法現(xiàn)在是13頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日現(xiàn)在是14頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日利福平的耐藥位點(diǎn)現(xiàn)在是15頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日MSM恥垢分枝桿菌MTC結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群MTR次要分枝桿菌MIN胞內(nèi)分枝桿菌MAV鳥(niǎo)分枝桿菌MGA胃分枝桿菌MKA堪薩斯分枝桿菌MSC瘰癘分枝桿菌MUA母牛分枝桿菌MCH龜分枝桿菌龜亞種MAB龜分枝桿菌膿腫亞種MSZ蘇爾加分枝桿菌MMA海/潰瘍分枝桿菌MXE蟾蜍分枝桿菌MDI迪氏分枝桿菌MFO偶發(fā)/豬分枝桿菌MGI淺黃分枝桿菌MSI猿猴分枝桿菌MTE土分枝桿菌MPH草分枝桿菌CC質(zhì)控點(diǎn)MNO不產(chǎn)色分枝桿菌MGO戈登分枝桿菌同時(shí)鑒定MTC與21種NTM現(xiàn)在是16頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日非結(jié)核分枝桿菌現(xiàn)在是17頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日在國(guó)內(nèi)4個(gè)省的4個(gè)地市級(jí)CDC進(jìn)行了評(píng)估?，F(xiàn)在是18頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日結(jié)核病和非結(jié)核的診斷現(xiàn)在是19頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日特點(diǎn)標(biāo)本：菌株、涂陽(yáng)痰標(biāo)本時(shí)間：約8小時(shí)優(yōu)點(diǎn)：高通量靈敏度、特異度高現(xiàn)在是20頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日國(guó)家結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室推薦建議基因芯片可以用于:

可疑耐藥結(jié)核病患者篩查,它有望代替利福平和異煙肼的傳統(tǒng)藥敏試驗(yàn)推薦理由:在我國(guó)獲得注冊(cè)證書(shū)；國(guó)內(nèi)研究顯示其敏感性和特異性較好；民族品牌數(shù)據(jù)顯示在我國(guó)具有可行性,符合成本效果；可能使用層級(jí):

地市和省級(jí)（醫(yī)療機(jī)構(gòu)和疾病預(yù)防機(jī)構(gòu)）現(xiàn)在是21頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日探針熔解曲線技術(shù)現(xiàn)在是22頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日工作原理

在一定環(huán)境下，DNA雙鏈在其長(zhǎng)度和序列一定時(shí)，Tm值也一定，當(dāng)發(fā)生錯(cuò)配時(shí)，Tm值下降，下降的幅度與發(fā)生錯(cuò)配的堿基數(shù)目、類型和位置有關(guān)。ΔTm現(xiàn)在是23頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日96%利福平耐藥突變發(fā)生在rpoB507-533共81bp區(qū)域內(nèi)利福平耐藥突變檢測(cè)體系示意圖根據(jù)靶序列熔點(diǎn)的變化，檢測(cè)rpoB基因

是否含有突變，獲得利福平耐藥信息現(xiàn)在是24頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日根據(jù)不同的ΔTm值可以判斷出ropB可能不同的堿基發(fā)生突變現(xiàn)在是25頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日現(xiàn)在是26頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日根據(jù)不同的ΔTm值可以判斷出ropB可能不同的堿基發(fā)生突變現(xiàn)在是27頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日異煙肼耐藥突變檢測(cè)體系示意圖通過(guò)檢測(cè)katG315、inhA啟動(dòng)子和、ahpC啟動(dòng)子區(qū)、inhA94、密碼子的突變與否確定樣品對(duì)異煙肼的耐藥性?，F(xiàn)在是28頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日根據(jù)不同的ΔTm值可以判斷出異煙肼不同的堿基序列發(fā)生突變現(xiàn)在是29頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日根據(jù)不同的ΔTm值可以判斷出異煙肼不同的堿基序列發(fā)生突變現(xiàn)在是30頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日乙胺丁醇鏈霉素氟喹諾酮每個(gè)突變都表現(xiàn)出特有的譜線對(duì)應(yīng)獨(dú)特的熔點(diǎn),軟件可以自動(dòng)地給出突變類型,即使發(fā)生不均一突變的情況,也可以分辨出來(lái).現(xiàn)在是31頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日步驟二加入1-96個(gè)提取樣本到檢測(cè)管中步驟三集成多重PCR和結(jié)果自動(dòng)報(bào)告步驟一自動(dòng)提取1-24份樣本操作流程總耗時(shí)約3小時(shí)，手工操作時(shí)間約15分鐘現(xiàn)在是32頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日（一）DNA提取～40min高質(zhì)量的樣本DNA樣本類型：痰液、灌洗液、培養(yǎng)菌株……快速高效，1小時(shí)內(nèi)完成24份樣本提?。混`活可控，單次運(yùn)行可處理1～24份樣本；高度均一，整個(gè)提取過(guò)程均由儀器自動(dòng)完成，保證了提取樣本的均一性。現(xiàn)在是33頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日（二）加入PCR反應(yīng)管現(xiàn)在是34頁(yè)\一共有35頁(yè)\編輯于星期日（三）PCR過(guò)程和自動(dòng)判讀菌種Tm/℃FAMHEXROXCy5恥垢分枝桿菌83.0/73.0,80.0/牛分枝桿菌62.5,75.5/73.0,80.0/瘰疬分枝桿菌69.5/73.0,80.0/結(jié)核分枝桿菌62.5/73.0,80.0/龜分枝桿菌55.5/73.0,80.0/猿猴分枝桿菌/81.073.0,80.0/嗜血分枝桿菌/76.073.0,80.0/戈登分枝桿菌/71.073.0,80.0/堪薩斯分枝桿菌/66.573.0,80.0/膿腫分枝桿菌/58.073.0,80.0/偶然分枝桿菌//65.5,73.0,80.0/海/潰瘍分枝桿菌//59.5,73.0,80.0/土地分枝桿菌//55.5,73.0,80.0/不產(chǎn)色分枝桿菌//50.5,73.0,80.0/蘇加分枝桿菌/