CA19－9在羅氏cobas e 602和美國雅培I2000的比對(duì)分析

CA19-9在羅氏cobase602和美國雅培I2000的比對(duì)分析目錄中文摘要…………………Ⅰ英文摘要…………………Ⅱ論文正文…………………Ⅲ1研究背景………………62材料和方法……………62.1標(biāo)本來源……………62.2檢測系統(tǒng)……………62.2.1羅氏cobase602…………………62.2.2美國雅培I-2000…………………62.3實(shí)驗(yàn)的方法與操作…………………62.4分析與結(jié)果…………72.4.1顯著離群點(diǎn)的去除………………72.4.2比對(duì)分析…………72.4.3偏倚評(píng)價(jià)…………72.4.4計(jì)算加權(quán)回歸方程………………72.4.5臨床可接受性能判斷……………73結(jié)果……………………74討論……………………85參考文獻(xiàn)………………96致謝……………………10CA19－9在羅氏cobase602和美國雅培I2000的比對(duì)分析摘要目的根據(jù)ISO15189要求，如果實(shí)驗(yàn)室用兩套以上檢測系統(tǒng)檢測同一項(xiàng)目時(shí)，應(yīng)有比對(duì)數(shù)據(jù)表明其結(jié)果的檢測結(jié)果一致性[1]。通過2種不同儀器的檢測系統(tǒng)進(jìn)行檢測CA19-9,探討其在不同檢測系統(tǒng)間的差異。方法收集2018年9月-2018年12月本院（南部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院）的160份門急診及住院患者兩個(gè)免疫監(jiān)測系統(tǒng)實(shí)際測量CA19-9的數(shù)據(jù)不同濃度血清濃度樣本，依據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)的EP9-A2文件,對(duì)160份標(biāo)本進(jìn)行糖類抗原19-9的測定,并記錄結(jié)果.對(duì)2臺(tái)檢測儀器的結(jié)果采用回歸和相關(guān)分析,求其相關(guān)系數(shù)R及回歸方程Y=aX+b,并對(duì)2種儀器的CA19-9檢測結(jié)果進(jìn)行比對(duì)分析。結(jié)果2個(gè)檢測儀器在低濃度時(shí),各儀器間保持較好的離散度,當(dāng)濃度較高時(shí),各系統(tǒng)間的離散度明顯增大,根據(jù)《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(第4版)》[2]所提供的CA19-9參考值為27kU/L時(shí),對(duì)應(yīng)各檢測系統(tǒng)間的結(jié)果和偏倚分別為羅氏cobase602（-6.41%）,美國雅培I2000（-5.07%）。結(jié)論在研究檢測系統(tǒng)差異時(shí),在較低濃度CAl9-9的結(jié)果在2個(gè)檢測系統(tǒng)間差異不大,但在高濃度時(shí),檢測系統(tǒng)間的差異明顯增大,風(fēng)險(xiǎn)較高,而且個(gè)別病人差異較大。關(guān)鍵詞：羅氏cobase602；美國雅培I2000；CA19-9AbstractObjectiveAccordingtoISO15189requirements,ifthelaboratoryusesmorethantwosetsoftestingsystemstotestthesameitem,thereshouldbecomparisondatatoshowtheconsistencyofthetestresults.CA19-9wasdetectedbytwodifferentinstruments,anditsdifferencesamongdifferentdetectionsystemswerediscussed.MethodsThedataofCA19-9measuredbytwoimmunemonitoringsystemsof160emergencyandinpatientsinourhospitalwerecollected.Serumconcentrationsamplesofdifferentconcentrationswerecollected.AccordingtoEP9-A2documentofAmericanAssociationforClinicalLaboratoryStandardization(CLSI),carbohydrateantigenCA19-9wasdeterminedin160samples,andtheresultswererecorded.ThecorrelationcoefficientRandregressionequationY=AX+Bwereobtainedbyregressionandcorrelationanalysisoftheresultsofthetwoinstruments.TheCA19-9testresultsofthetwoinstrumentswerecomparedandanalyzed.ResultsWhentheconcentrationofthetwodetectioninstrumentswaslow,thedispersionbetweeneachinstrumentwasmaintainedgood,andwhentheconcentrationwashigh,thedispersionbetweeneachsystemwassignificantlyincreased.AccordingtothereferencevalueofCA19-9providedbytheNationalClinicalLaboratoryOperatingProcedures(4thEdition)was27kU/L[1],theresultsandbiasofthecorrespondingdetectionsystemswererespectivelyRochecobasE602(-6.41%),AbbottI2000(-5.07%)ConclusionWhenstudyingthedifferenceofdetectionsystems,theresultsofCAL9-9atalowerconcentrationshowedlittledifferencebetweenthetwodetectionsystems,butatahigherconcentration,thedifferencebetweenthetwodetectionsystemsincreasedsignificantly,withhigherrisksandgreatdifferencesamongindividualpatients.KeywordsRochecobasE602;AmericanAbbottI2000;CA19-9 研究背景 糖類抗原19-9是一種由Koprowski在1979年首先從大腸癌組織分離中檢測出來的一種低聚糖腫瘤相關(guān)抗原，在血清中以黏蛋白的形式存在，分子量大于5000KD；在健康支氣管上皮細(xì)胞、胰腺導(dǎo)管、腺泡中心細(xì)胞、膽及子宮內(nèi)膜均有少量CA19-9的分布和表達(dá)，其血清濃度多在37KU/L；是胰腺癌、胃癌、結(jié)腸癌、直腸癌、膽囊癌的相關(guān)標(biāo)志物，是臨床上目前應(yīng)用最多、最有價(jià)值的腫瘤相關(guān)抗原之一[3]；大量研究證明CA19-9的濃度與這些腫瘤大小有關(guān)，在消化道惡性腫瘤發(fā)生時(shí)，尤其是胰腺癌，血清CA19-9濃度可呈現(xiàn)顯著升高，為最具有價(jià)值診斷胰腺癌的腫瘤標(biāo)志物；胰腺癌患者85%～95%為陽性，CA19-9測定有助于胰腺癌的鑒別診斷和病情監(jiān)測，當(dāng)血清中的CA19-9水平高于10000U／ml時(shí)，幾乎均存在外周轉(zhuǎn)移。當(dāng)CA19-9的濃度小于1000U/ml時(shí)，有一定的手術(shù)意義，腫瘤切除后CA19-9的濃度會(huì)下降，如果再持續(xù)的上升則可能表示復(fù)發(fā)。如果這個(gè)數(shù)值明顯高于正常，就需要高度懷疑體內(nèi)有惡性腫瘤。但CA19-9的檢測也易受很多良性疾病的影響而升高，在臨床檢測過程中發(fā)現(xiàn)，患有良性肝膽胰腺疾病的患者，如肝炎、肝硬化、膽結(jié)石、膽囊炎、胰腺炎、膽管阻塞等等，也會(huì)出現(xiàn)CA19-9陽性的情況，概率高達(dá)20%－60%[4]。血清CA19-9呈2倍升高所需的時(shí)間與胰腺癌患者腫瘤體積和生存期所需時(shí)間有較大的正相關(guān)，CA19-9濃度上升的越快，腫瘤體積增長的越高。本文比較兩種檢測系統(tǒng)測定CA19-9的方法所得到檢測結(jié)果進(jìn)行分析比較。材料和方法一、標(biāo)本來源收集本院（南部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院）的160份2018年9月至2018年12月的標(biāo)本在兩種免疫檢測系統(tǒng)的實(shí)際測量CA19-9的數(shù)據(jù)二、檢測系統(tǒng)廣東省中國人民解放軍南部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院檢驗(yàn)科擁有的德國羅氏cobase602全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)及美國雅培I-2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測系統(tǒng)。（一）羅氏cobase602德國羅氏cobase602全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光儀[5]，由兩個(gè)e602模塊組成，使用先進(jìn)的鏈霉親和素-生物素包被，以三聯(lián)吡啶釕作為發(fā)光物質(zhì)的電化學(xué)發(fā)光，有檢測結(jié)果敏感性高、特異性強(qiáng)，樣本隨到隨做的優(yōu)點(diǎn)美國雅培I-2000美國雅培I-2000[6]全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（CLIA）是目前醫(yī)療系統(tǒng)運(yùn)用廣泛的一臺(tái)快速免疫定量分析先進(jìn)設(shè)備，該儀器采用以吖啶酯為發(fā)光物質(zhì)的免疫分析系統(tǒng)[7]，智能分布沖洗，使用磷酸鹽緩沖液和表面活性劑，徹底消除實(shí)驗(yàn)攜帶問題，提高了測試結(jié)果的可信度[8]。通過壓力檢測的凝塊檢測技術(shù)可確保樣本的前處理質(zhì)量。實(shí)驗(yàn)的方法與操作所有樣本均采集于門急診和住院病人早晨空腹的標(biāo)本，使用低速離心機(jī)3000r/min的轉(zhuǎn)速離心五分鐘分離血清，離心完的血清收集起來置于-80度的低溫冰箱保存，待標(biāo)本收集完成統(tǒng)一上機(jī)進(jìn)行檢測，兩臺(tái)儀器的整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作過程均嚴(yán)格按照儀器的操作規(guī)程和《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第四版進(jìn)行操作，保證儀器的試劑，試劑的定標(biāo)，質(zhì)控均在在控范圍，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。四、分析與結(jié)果（一）2組檢測結(jié)果顯著離群點(diǎn)的去除:根據(jù)CLSIC28-A2文件指導(dǎo)要求,采用“D/R>1/3”規(guī)則去除2組檢測結(jié)果顯著的離群值。D:觀測極值(最大值)和下一個(gè)最大觀測值之間的差異。R:所有觀測,包括極值。D/R>1/3。刪除該值,并在保留數(shù)據(jù)上重復(fù)該規(guī)則,直到D/R<1/3為止[9]。（二）比對(duì)分析：兩種檢測系統(tǒng)的檢測均值應(yīng)用散點(diǎn)圖,計(jì)算相關(guān)系數(shù)(R)。將兩個(gè)檢測系統(tǒng)進(jìn)行比較，當(dāng)存在強(qiáng)影響點(diǎn)或相關(guān)系數(shù)R<0.975時(shí),使用加權(quán)回歸方程為Y=aX+b。（三）偏倚評(píng)價(jià)[10]:根據(jù)中國合格評(píng)定國家認(rèn)可委員會(huì)(CNAS)在ISO15189中提出的生化定量(部分免疫定量)比對(duì)要求:允許偏倚<1/2總誤差(TEa)。分別采用以下3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的TEa作為質(zhì)量要求對(duì)偏倚進(jìn)行評(píng)判:（1）澳大利亞皇家病理學(xué)會(huì)(RCPA)腫瘤標(biāo)志物室間質(zhì)量的允許偏差,可接受性能界限為±3kU/L(≤10kU/L)或±15%(>10kU/L);(2)NCCL腫瘤標(biāo)記物室間質(zhì)評(píng)允許偏差,TEa為±25%;(3)基于生物學(xué)變異的適當(dāng)要求的總偏差,TEa為CA19-9<44.3%。[11](四)計(jì)算加權(quán)回歸方程:為研究兩種CA19-9檢測方法的差異性,分別對(duì)各個(gè)檢測系統(tǒng)結(jié)果均值間進(jìn)行加權(quán)回歸,獲得加權(quán)回歸方程。[12](五)臨床可接受性能判斷:分別將CA19-9的醫(yī)學(xué)決定水平(Xc)代入回歸方程,計(jì)算實(shí)驗(yàn)方法與比較方法之間的系統(tǒng)誤差(SE)[預(yù)期偏差(Bc)],SE=(b-1)Xc+aSE(%)=SE/Xc×100%,以Xc處的系統(tǒng)誤差判斷檢測系統(tǒng)間誤差是否可接受。結(jié)果兩個(gè)檢測系統(tǒng)的CA19-9均值應(yīng)用散點(diǎn)圖，在低濃度時(shí),各系統(tǒng)間保持較好的離散度,差異不大,當(dāng)濃度高時(shí),個(gè)別標(biāo)本間差異較大,見圖1.表1.圖1兩個(gè)檢測系統(tǒng)的CA19-9均值兩兩散點(diǎn)圖表1兩組檢測結(jié)果差異較大的樣本檢測系統(tǒng)羅氏cobase602美國雅培I20001165.5208.792157.2467.613360.1914.044530.7700.56兩個(gè)檢測系統(tǒng)的CA19-9均值做加權(quán)回歸方程檢測系統(tǒng)間的結(jié)果偏倚,見表2.根據(jù)《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(第4版)》[2]提供的CA19-9參考值為27kU/L時(shí)對(duì)應(yīng)檢測系統(tǒng)間的結(jié)果和偏倚分別為羅氏cobase602（-6.41%）,美國雅培I2000（-5.07%）。按照RCPA總誤差的1/2作為評(píng)判標(biāo)準(zhǔn),偏倚在允許范圍之內(nèi);按照全國EQA總誤差的1/2作為評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)和生物學(xué)變異質(zhì)量要求總誤差的1/2作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),偏倚在允許范圍之內(nèi)。表2兩種檢測系統(tǒng)的CA19-9均值間的加權(quán)回歸比對(duì)系統(tǒng)ba加權(quán)回歸方程R羅氏-雅培1.010-2.940雅培=-2.94+1.01羅氏0.856討論醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)ISO15189指出[2]，當(dāng)同樣的檢驗(yàn)應(yīng)用不同程序或設(shè)備，應(yīng)有確切的機(jī)制驗(yàn)證在整個(gè)臨床使用區(qū)間內(nèi)檢驗(yàn)結(jié)果的可比性。所以，不同檢測儀器測定相同的檢測項(xiàng)目時(shí)，其檢測結(jié)果是否具有可比性是非常重要的，它直接影響到臨床的診斷和治療工作。本院使用的羅氏cobase602和美國雅培I2000所使用的免疫分析系統(tǒng)均是最優(yōu)秀的儀器檢測系統(tǒng)之一。為了對(duì)兩臺(tái)儀器的檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性進(jìn)行了初次的比對(duì)分析，對(duì)此我們選擇了兩種檢測系統(tǒng)進(jìn)行測定CA19-9所得到檢測結(jié)果進(jìn)行分析比較。本研究表明：兩種不同檢測方法間具有良好的相關(guān)性。但因樣本濃度分布不均,殘差方差不齊,用普通的最小二乘法來計(jì)算回歸曲線時(shí),少量濃度較大的點(diǎn)占有較大的權(quán)重,成為了“強(qiáng)影響點(diǎn)”,影響了整條線的走向,而大量低濃度點(diǎn)的權(quán)重較低,常被忽略[9]。所以,采用加權(quán)最小二乘回歸方法,得出每個(gè)點(diǎn)相對(duì)應(yīng)的權(quán)重,從而來得到一個(gè)更加可靠的回歸方程。這樣,當(dāng)相關(guān)系數(shù)R較好時(shí),可以最大程度地展現(xiàn)各點(diǎn)的回歸情況,即當(dāng)R<0.975時(shí)。特別是當(dāng)散點(diǎn)圖分散在高濃度范圍內(nèi)時(shí),加權(quán)回歸基本保證了低濃度樣品對(duì)中等濃度樣品的回歸,避免高值樣本數(shù)據(jù)對(duì)整個(gè)回歸方程趨勢的影響,代表檢測系統(tǒng)從低濃度到中高濃度的差異。由于使用的檢測儀器不同,配套試劑的抗體所識(shí)別的被測抗原表位不同,導(dǎo)致檢測系統(tǒng)間的測定結(jié)果存在差異。當(dāng)把顯著離群值剔除后，將兩個(gè)檢測系統(tǒng)的CA19-9均值做加權(quán)回歸方程。檢測系統(tǒng)間的結(jié)果偏倚，按照EP9-A文件要求從相關(guān)性、預(yù)期偏倚評(píng)估及與臨床化學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量指標(biāo)（WS/T403-2012）要求允許總誤差的1/2比較等方面綜合分析，發(fā)現(xiàn)血液中被測物質(zhì)濃度較低時(shí)即在低濃度醫(yī)學(xué)決定水平處,兩種不同檢測系統(tǒng)間CA19-9濃度的差異不大,預(yù)期偏倚較小，可被多種質(zhì)量要求所接受。隨著被測物質(zhì)濃度較高時(shí),離散增大,兩種檢測系統(tǒng)間的比例偏倚隨之增大,且個(gè)別樣本間差異較大，超出允許范圍，不具備可比性。由此可見，CA19-9增高的結(jié)果在不同測定系統(tǒng)可能會(huì)有較大的差異,同一個(gè)標(biāo)本,一個(gè)測定系統(tǒng)的結(jié)果明顯增高,而另一個(gè)系統(tǒng)卻在正常范圍。綜上所述，在對(duì)臨床未確診為腫瘤的異常結(jié)果要進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測。在較低濃度CAl9-9的結(jié)果在2個(gè)檢測系統(tǒng)間差異不大,對(duì)于高濃度的CA19-9患者,仍建議在同一醫(yī)院的實(shí)驗(yàn)室或使用相同類型的檢測系統(tǒng)對(duì)CAl9-9進(jìn)行持續(xù)的監(jiān)測，來確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。參考文獻(xiàn)[1]胡亞遠(yuǎn),張春秀.羅氏Cobase602電化學(xué)發(fā)光分析儀檢測CA19-9方法學(xué)評(píng)價(jià)[J].中國醫(yī)藥科學(xué),2015(23):132-134.[2]尚紅,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].人民衛(wèi)生出版社,2015.[3]王福淇,王泳鑫,黃耀章.腫瘤相關(guān)抗原CA_(19-9)的測定方法及其臨床應(yīng)用[J].腫瘤,1989(02):70-71.[4]陳微微,周思思,嚴(yán)蘇.血清CA19-9CA242聯(lián)合檢測診斷膽管癌的價(jià)值[J].浙江臨床醫(yī)學(xué),2014(3):368-369.[5]黃雪珍,隋洪,尹志軍.電化學(xué)發(fā)光腫瘤標(biāo)志物CEA、CA19-9、CA12-5的生物參考區(qū)間適用性驗(yàn)證[J][6]張保平,董莉,馮新平,等.雅培ARCHITECTi2000化學(xué)發(fā)光儀測定6種腫瘤標(biāo)記物項(xiàng)目的方法學(xué)性能評(píng)價(jià)[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011(4):488-490.[