基因功能的驗證課件

第十三章基因功能的驗證

一是通過增強其表達，取得表達產(chǎn)物進行研究，增強其表達因為不能反映基因產(chǎn)物的真實表達情況，而逐漸被拋棄

二是減弱或者終止其表達，觀察整體功能的變化，進而推測相應(yīng)的基因功能1RNA干擾技術(shù)它是指外源性與內(nèi)源性雙鏈RNA觸發(fā)編碼區(qū)同源mRNA特異性的降解，而導(dǎo)致基因表達沉默的現(xiàn)象，這種現(xiàn)象發(fā)生在轉(zhuǎn)錄后水平，又稱為轉(zhuǎn)錄后基因沉默(post-transcriptional

gene

silencing)。當(dāng)dsRNA導(dǎo)入細胞后，被一種dsRNA特異的核酸內(nèi)切酶識別，切割成21-23核苷酸長的小片段，這些片段可與該核酸酶的dsRNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合，并且作為模板識別目的mRNA。

RNAi技術(shù)的應(yīng)用

在功能基因組研究中，需要對特定基因進行功能喪失或降低突變，以確定其功能。由于RNAi具有高度的序列專一性，可以特異地使特定基因沉默，獲得功能喪失或降低突變，因此RNAi可以作為一種強有力的研究工具，用于功能基因組的研究。在功能基因組中的應(yīng)用

構(gòu)建重組載體重組DNA轉(zhuǎn)入受體細胞核內(nèi)篩選目的細胞轉(zhuǎn)基因動物模型的建立DNA-BindingDomainBaitProteinPreyProteinTranscriptionActivatingRegionReporterGeneDNA-BindingSite酵母雙雜交技術(shù)反式作用因子中的兩個功能結(jié)構(gòu)域DNA結(jié)合域轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域鑒定新的蛋白與蛋白相互作用鑒定蛋白級聯(lián)底物鑒定突變對蛋白與蛋白結(jié)合的影響在已知的相互作用中鑒定干擾蛋白質(zhì)(反向雙雜交系統(tǒng))酵母雙雜交系統(tǒng)應(yīng)用是一種在體外研究兩種或多種蛋白質(zhì)之間物理相互作用的方法拉下實驗基因組是指一個細胞單倍型所含的全部遺傳信息，即DNA或RNA編碼的遺傳信息蛋白質(zhì)組則是指一個細胞一生中表達的蛋白質(zhì)總和蛋白組學(xué)研究蛋白質(zhì)組學(xué)是研究蛋白質(zhì)組的一個新的領(lǐng)域，主要研究蛋白質(zhì)的特性，包括蛋白質(zhì)表達水平、氨基酸序列、翻譯后加工和蛋白質(zhì)相互作用，在蛋白質(zhì)水平上了解細胞的各項功能、各種生理生化過程及疾病的病理過程等第一相電泳根據(jù)蛋白質(zhì)的不同等電點分離各種蛋白質(zhì)，即等電聚焦法(isoelectriefocusingIEF)第二向電泳根據(jù)蛋白質(zhì)的不同分子量進一步分離等電點相同的蛋白質(zhì)，即SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS)雙向凝膠電泳技術(shù)是目前蛋白質(zhì)組研究的主要技術(shù)之一,雙向電泳根據(jù)等電點和分子量可一次性分離數(shù)千種蛋白質(zhì)，經(jīng)染色后蛋白質(zhì)再PAGE上可形成密度不同、分布不均的復(fù)雜點圖譜。如何有效的對雙向凝膠電泳圖像分析，如