HIV抗體檢測(cè)技術(shù)規(guī)程

HIV抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)規(guī)程天津市CDCHIV確證中心實(shí)驗(yàn)室鄭敏娜2013.6.25現(xiàn)在是1頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一

HIV病毒感染人體過(guò)程及免疫學(xué)機(jī)制現(xiàn)在是2頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一明確HIV感染者（診斷）控制傳播及早醫(yī)學(xué)干預(yù)血液篩查流行病學(xué)調(diào)查、高危人群監(jiān)測(cè)開展VCT的基礎(chǔ)職業(yè)保護(hù)HIV抗體檢測(cè)在艾滋病防治中的作用現(xiàn)在是3頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一主要內(nèi)容HIV抗體檢測(cè)的相關(guān)規(guī)范性文件HIV抗體檢測(cè)的方法和注意事項(xiàng)HIV抗體確證實(shí)驗(yàn)的相關(guān)規(guī)程和結(jié)果解釋目前我市HIV篩查實(shí)驗(yàn)室中存在的問(wèn)題現(xiàn)在是4頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一HIV抗體檢測(cè)的相關(guān)規(guī)范性文件《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》衛(wèi)醫(yī)發(fā)〔2006〕73號(hào)《全國(guó)艾滋病檢測(cè)工作管理辦法》衛(wèi)疾控發(fā)〔2006〕218號(hào)《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范(2009年版)》現(xiàn)在是5頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一HIV抗體檢測(cè)的相關(guān)規(guī)范性文件《全國(guó)艾滋病檢測(cè)工作管理辦法》衛(wèi)疾控發(fā)〔2006〕218號(hào)檢測(cè)工作要求

第十二條艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)在規(guī)定的職能范圍內(nèi)開展檢測(cè)工作，遵守國(guó)家法律、法規(guī)和有關(guān)規(guī)范。檢測(cè)技術(shù)及程序應(yīng)符合《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》的要求?，F(xiàn)在是6頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一HIV抗體檢測(cè)的方法和注意事項(xiàng)HIV抗體檢測(cè)的主要方法——金標(biāo)準(zhǔn)包括初篩實(shí)驗(yàn)和確證實(shí)驗(yàn)

現(xiàn)在是7頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一初篩實(shí)驗(yàn):試劑必須經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)，在有效期內(nèi)的，批批檢合格敏感性和特異性好：方法包括：ELISA，化學(xué)發(fā)光法和快速檢測(cè)法（免疫層析，顆粒凝集等方法）樣本：血清、血漿；干血斑；唾液；尿液

HIV抗體檢測(cè)的方法和注意事項(xiàng)快速免疫層析明膠顆粒凝集法（PA）HIVELISA現(xiàn)在是8頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一試劑質(zhì)量評(píng)估：/n16/n1193/n4073/719991.html現(xiàn)在是9頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一現(xiàn)在是10頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一嚴(yán)格遵照試劑說(shuō)明書進(jìn)行試驗(yàn)檢測(cè)正確使用儀器設(shè)備正確判讀試驗(yàn)結(jié)果作好實(shí)驗(yàn)記錄試驗(yàn)操作注意事項(xiàng)

現(xiàn)在是11頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一HIV抗體檢測(cè)技術(shù)要求建立標(biāo)準(zhǔn)操作程序禁止肉眼判讀！保證酶標(biāo)儀，洗板機(jī)正常運(yùn)轉(zhuǎn)保證加樣器準(zhǔn)確選擇高質(zhì)量的與加樣器配套的TIP頭使用有效期內(nèi)的試劑保證樣品質(zhì)量現(xiàn)在是12頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一影響ELISA測(cè)定的因素試劑盒的因素：妥善保存試劑在有效期內(nèi)使用試驗(yàn)操作

形成良好的操作習(xí)慣：加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。

嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書操作:空白孔不加樣品和酶標(biāo)試劑

操作過(guò)程中集中精力：避免加樣錯(cuò)誤現(xiàn)在是13頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一注意事項(xiàng)保證實(shí)驗(yàn)室溫度，室溫過(guò)低有可能造成吸光度值偏低。ELISA試驗(yàn)的敏感性很高，如果操作不當(dāng)很容易出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。在操作過(guò)程中，尤其應(yīng)注意洗滌過(guò)程。洗滌徹底可減少假陽(yáng)性的機(jī)會(huì)。進(jìn)行ELISA試驗(yàn)時(shí)，必須用酶標(biāo)儀進(jìn)行測(cè)定，不得目測(cè)結(jié)果。使用酶標(biāo)儀時(shí)，要避免酶標(biāo)孔內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響判讀結(jié)果?，F(xiàn)在是14頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一ELISA操作中的注意事項(xiàng)試劑準(zhǔn)備加樣溫育洗板顯色比色操作示范請(qǐng)看教學(xué)片現(xiàn)在是15頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一ELISA試驗(yàn)假陽(yáng)性產(chǎn)生原因？樣品加錯(cuò)位置，標(biāo)本搞錯(cuò)洗板機(jī)設(shè)置不當(dāng)，洗板時(shí)洗滌液溢出，污染其它孔洗板機(jī)內(nèi)部管道有真菌生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)中，實(shí)際孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，溫度過(guò)高待測(cè)標(biāo)本溶血或含有血細(xì)胞。待測(cè)標(biāo)本長(zhǎng)菌或其它原因混濁。其它原因：〔與試驗(yàn)操作無(wú)關(guān)〕．現(xiàn)在是16頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一HIV抗體篩查和復(fù)檢的流程與2004版檢測(cè)規(guī)范的不同報(bào)告HIV抗體檢測(cè)陰性現(xiàn)在是17頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一HIV感染產(chǎn)婦所生嬰幼兒的抗體檢測(cè)現(xiàn)在是18頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一HIV抗體確證實(shí)驗(yàn)的相關(guān)規(guī)程和結(jié)果解釋復(fù)檢陽(yáng)性或一陰一陽(yáng)的樣本確認(rèn)實(shí)驗(yàn)送確認(rèn)前，應(yīng)核對(duì)身份，補(bǔ)充個(gè)人信息（姓名，身份證號(hào)等）填寫”HIV抗體復(fù)檢檢測(cè)單”樣本“三級(jí)包裝”第一層：帶蓋的試管第二層：防水，防漏第三層：包裝箱（內(nèi)附緩沖材料）現(xiàn)在是19頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一HIV抗體確認(rèn)實(shí)驗(yàn)包括：

免疫印跡實(shí)驗(yàn)(WB)條帶免疫試驗(yàn)(LIA)免疫熒光試驗(yàn)(IFA)放射免疫沉淀試驗(yàn)(RIPA)現(xiàn)在是20頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一HIV抗體確認(rèn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果a強(qiáng)陽(yáng)性對(duì)照（HIV-1和HIV-2）b弱陽(yáng)性對(duì)照（HIV-1）c陰性對(duì)照d典型的HIV-2血清陽(yáng)性反應(yīng)abcdgp160gp120p66p55p51gp41p39p31P24p17血清對(duì)照HIV-2特異帶現(xiàn)在是21頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一HIV抗體確認(rèn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果現(xiàn)在是22頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一HIV抗體確證實(shí)驗(yàn)的流程現(xiàn)在是23頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一HIV抗體檢測(cè)的樣本保存用于抗體和抗原檢測(cè)的血清和血漿樣本：1周內(nèi)2-8℃保存>1周-20℃保存篩查陽(yáng)性樣本：送確證篩查陰性樣本：根據(jù)具體情況，至少1-2個(gè)月確證樣品：保存10年以上現(xiàn)在是24頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一目前我市HIV篩查實(shí)驗(yàn)室中存在的問(wèn)題實(shí)驗(yàn)室布局不合理，沒(méi)有嚴(yán)格分區(qū)；沒(méi)有標(biāo)識(shí)

應(yīng)設(shè)嚴(yán)格分區(qū)（污染區(qū)、半污染區(qū)和潔凈區(qū)）；生物安全標(biāo)識(shí)個(gè)別實(shí)驗(yàn)室設(shè)備不全，沒(méi)有安全柜儀器沒(méi)有定期校準(zhǔn)

酶標(biāo)儀/洗板機(jī)、加樣器，溫度計(jì)，高壓滅菌器，生物安全柜每年校準(zhǔn)，每季度期間核查沒(méi)有HIV實(shí)驗(yàn)室生物安全管理制度和SOP

實(shí)驗(yàn)活動(dòng)的基本依據(jù)，必須建立，每年應(yīng)進(jìn)行檢查修訂，并有記錄現(xiàn)在是25頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一目前我市HIV篩查實(shí)驗(yàn)室中存在的問(wèn)題沒(méi)有質(zhì)控記錄：很多實(shí)驗(yàn)室都有人員流動(dòng)性大，經(jīng)培訓(xùn)的專業(yè)技術(shù)人員嚴(yán)重不足，部分人員未經(jīng)專業(yè)技術(shù)培訓(xùn)就上崗

保證實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人和主要技術(shù)人員的穩(wěn)定，兩年一培訓(xùn)，考核合格，持證上崗實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員生物安全意識(shí)淡薄

增強(qiáng)安全意識(shí)，做好防護(hù)，保護(hù)自身安全實(shí)驗(yàn)室原始記錄不規(guī)范，缺乏可溯源性

應(yīng)體現(xiàn)加樣步驟和位置；試劑廠家、批號(hào)、效期，檢測(cè)人和復(fù)核人現(xiàn)在是26頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期一目前我市HIV篩查實(shí)驗(yàn)室中存在的問(wèn)題復(fù)檢陽(yáng)性結(jié)果的報(bào)告問(wèn)題篩查實(shí)驗(yàn)陰性直接出報(bào)告；復(fù)檢后為陽(yáng)性或一陰一陽(yáng)的樣本報(bào)告為“HIV抗體代確證”，用“HIV抗體復(fù)檢檢測(cè)單”進(jìn)行報(bào)告送錯(cuò)樣本認(rèn)真核對(duì)樣本，補(bǔ)充個(gè)人信息，必要時(shí)采集第二份血質(zhì)控品的使用時(shí)限-20℃有效期內(nèi)均可使用；解凍后的1周內(nèi)用完送檢樣本包裝不合格，沒(méi)有送檢單（HIV復(fù)檢檢測(cè)單）陰性樣本的保存問(wèn)題