新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求專家講座

新藥研發(fā)中藥理毒理

研究內(nèi)容與要求西安萬隆制藥股份有限企業(yè)王震-3-26新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第1頁

第一章新藥評價內(nèi)容(一)藥學研究與評價(二)臨床前藥理研究(三)臨床前毒理學研究(四）臨床研究與評價新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第2頁(一)藥學研究與評價名稱結(jié)構(gòu)或組份理化性質(zhì)原料藥生產(chǎn)工藝制劑處方及工藝定性判別含量測定雜質(zhì)檢驗原料藥和制劑穩(wěn)定性質(zhì)量標準草案和起草說明包裝材料和容器選擇依據(jù)及質(zhì)量標準新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第3頁(二)藥理研究主要藥效學二種模型量效關系指標客觀陽性對照空白對照時效關系臨床給藥路徑二種動物體外試驗最少重復3次作用機理(全新藥)新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第4頁(三)毒理學研究普通藥理三個劑量臨床路徑時效改變神經(jīng)系統(tǒng)心血管系統(tǒng)呼吸系統(tǒng)藥代動力學三個劑量二種動物臨床路徑8～12個采樣點藥動學基本參數(shù)方法學考證分布排泄急性毒性毒性癥狀LD50，二種動物二種路徑長久毒性三個劑量臨床路徑空白對照，動態(tài)觀察中毒癥狀中毒劑量動物選擇指標測定二種動物靶器官安全劑量毒性性質(zhì)病理描述病理照片統(tǒng)計處理毒代動力學三個劑量6-8點主要毒代參數(shù)AUCCmaxTmax特殊毒性遺傳生殖致癌性局部毒性過敏刺激光毒溶血免疫毒性

(生物制品)依賴性作用于CNS藥品新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第5頁第二章、毒理學研究

一、毒理學研究意義二、毒理學研究內(nèi)容及方法三、急性毒性研究四、長久毒性研究五、其它毒性研究六、特殊毒性研究七、毒代動力學研究新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第6頁一、毒理學研究意義1、毒理學研究介紹2、創(chuàng)新藥品基本要求3、20世紀重大藥害事件4、已審批藥品副作用與從市場撤出舉例5、安全性原因?qū)λ幤费邪l(fā)影響新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第7頁

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致癌性遺傳毒性

生殖毒性

局部耐受性、過敏、依賴性、免疫毒性光敏和其它試驗等

了解毒性反應劑量、時間、強度、癥狀、靶器官及可逆性等，為臨床方案提供參考、預測出現(xiàn)毒性反應，制訂臨床防護辦法、確保受試者用藥安全

毒理學研究局部用藥毒性全身用藥毒性發(fā)覺毒理學普通毒性特殊毒性目標新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第8頁2.創(chuàng)新藥品基本要求

質(zhì)控安全有效

藥品基本屬性（安全性、有效性、穩(wěn)定性、可控性），在一定意義上，由藥品化學結(jié)構(gòu)所決定藥品分子設計是實現(xiàn)新藥創(chuàng)制主要路徑和伎倆穩(wěn)定新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第9頁3、20世紀重大藥害事件甘汞：

汞中毒死亡585人醋酸鉈：

鉈中毒死亡1萬人氨基比林：

粒細胞缺乏癥死亡2082人磺胺酏：

肝腎損害死亡107人非那西?。?/p>

腎損害、溶血死亡500人碘二乙基錫：神經(jīng)毒性、腦炎、失明死亡110人反應停：

海豹樣畸形兒10000多死亡5000人異丙腎氣霧劑：嚴重心律失常、心衰，死亡3500人氯碘喹啉：

骨髓變性、失明、受害7856人，死亡5%心得寧：

眼-皮膚-粘膜綜合征，受害2257人新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第10頁4、已審批藥品副作用與從市場撤出舉例（1990-）年份藥品適應癥/分類副作用1991Enkald恩卡尼上市４年抗心律失常藥品作用于心血管，突然死亡1992Temafloxacin替馬沙星抗菌類藥腎損傷1998Poslcor(mibefradll)

Duract(bronfenacsodium)降血壓藥/鈣通道抑制劑止痛藥致死性相互作用（抑制肝酶）肝損傷1999Tronan嚴格限制使用RaxarHismanal息斯敏Rotashield抗生素喹諾酮抗生素抗組胺藥輪狀病毒疫苗肝/腎損傷QT間期延長（致死）藥品相互作用腸梗阻RenzulinPropulsidLotonex治療Ⅱ型糖尿病藥燒心過敏性胃腸綜合癥肝損傷心律不齊/致死缺血性結(jié)腸炎Phenylpropanolaminebaychlor調(diào)整血脂藥降低膽固醇出血性休克橫紋肌溶解/致死新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第11頁5、安全性原因?qū)λ幤费邪l(fā)影響藥品撤出市場原因總撤出百分率人體藥代試驗不恰當39臨床缺乏療效30動物毒性試驗11人體副作用10經(jīng)濟原因5其它5新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第12頁二、毒理學研究內(nèi)容及方法1、GLP－國際上安全性研究試驗室共同遵照規(guī)范2、臨床前藥品安全性評價主要內(nèi)容3、新藥臨床前安全性評價利弊權衡4、新藥臨床安全性再評價目標5、新藥臨床試驗安全性評價不足6、年10大藥品不良反應事件回顧7、藥品臨床安全性再評價主要內(nèi)容8、新藥臨床階段安全性評價利弊權衡9、藥品上市后再評價目標10、藥品上市后風險主要起源11、藥品毒副作用與從市場撤出舉例新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第13頁1、GLP－國際上安全性研究試驗室共同遵照規(guī)范

提升藥品非臨床研究質(zhì)量；確保試驗資料真實性、完整性和可靠性；提升科學數(shù)據(jù)質(zhì)量和有效性，促進試驗數(shù)據(jù)國家間相互認可；確保人民用藥安全，為人類健康服務。新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第14頁2、臨床前藥品安全性評價主要內(nèi)容單次給藥毒性試驗（急性毒性試驗）重復給藥毒性試驗（長久毒性試驗）遺傳毒性試驗生殖毒性試驗安全性藥理學試驗（普通藥理學）致癌性試驗藥品依賴性試驗特殊毒性試驗（過敏性、局部刺激性、溶血性）等免疫原性試驗毒代動力學試驗新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第15頁臨床前研究結(jié)果評定：利－是指藥效或療效，弊－是指毒性或毒副作用毒性特點：（主要癥狀、毒性大小、靶器官、可逆性）安全范圍：（LD50/ED50、LOAEL、NOAEL）LOAEL(lowest-observed-adverse-effect-level)出現(xiàn)副反應最小劑量NOAEL（NoObservedAdverseEffectLevel）無可見有害作用水平同類藥比較：了解程度及優(yōu)勢（有效性和安全性）適應癥背景：治療譜、毒性大?。ò踩秶?、性質(zhì)和早期可預測性人體相關性：注意量化（毒代暴露量）利弊權衡－是一個綜合性評價過程（系統(tǒng)工程）3、新藥臨床前安全性評價利弊權衡新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第16頁4、新藥臨床安全性再評價目標臨床前研究結(jié)果并不能完全推測臨床研究結(jié)果，動物模型也不能完全復制出人體發(fā)生疾病。臨床中存在聯(lián)適用藥產(chǎn)生藥品相互作用問題。藥品在臨床使用中發(fā)覺毒副作用，需進行毒性機制研究尋找解毒藥品。部分試驗能夠在藥品進行臨床研究中才開始進行。臨床研究中有時會出現(xiàn)藥品引發(fā)特異質(zhì)毒性反應。特需藥品免做臨床前安全性評價研究藥品。新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第17頁藥品上市前動物毒性研究不足藥品上市前人體臨床試驗倫理范圍不足藥品上市前人體臨床試驗科學性研究不足統(tǒng)計發(fā)覺，在全部藥品臨床試驗與應用中，不良反應種類出現(xiàn)概率是：在普通動物毒性試驗中只占３５％左右；在Ⅰ期人體耐受試驗中只有２０％；在Ⅱ、Ⅲ期臨床試驗出現(xiàn)率是３５％；在Ⅳ期臨床試驗時出現(xiàn)７０％；到市場銷售時全部副作用才陸續(xù)出現(xiàn)。

5、新藥臨床試驗安全性評價不足

新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第18頁6、年10大藥品不良反應事件回顧頭孢曲松鈉安全使用問題（與鈣使用，嬰兒死亡）靜脈輸注人免疫球蛋白引發(fā)丙肝抗體陽性率增加甲磺酸培高利特撤市（心臟瓣膜?。?/p>

馬來酸替加色羅撤市(心肌梗死、腦卒中）含釓造影劑安全問題（腎源性纖維化?。┝_格列酮安全性受質(zhì)疑（心梗和心源性死亡）注射用甲氨蝶呤、阿糖胞苷中混入長春新堿（N受損）感冒藥禁用于2歲或以下兒童（死亡）哺乳婦女服用可待因可能造成嬰兒發(fā)生嚴重不良反應硫酸普羅寧與胸腺肽注射劑可引發(fā)嚴重不良反應

新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第19頁7、藥品臨床安全性再評價主要內(nèi)容藥品毒性作用靶器官、藥品毒性作用模型研究處理因為模型不適當而發(fā)生不良反應，重新設計動物模型評價藥品毒性作用藥品毒性作用機制

處理小概率毒性作用藥品不良反應，評價沒有動物模型不良反應藥品毒性作用聯(lián)適用藥作用機制篩選研究處理臨床上因為聯(lián)適用藥而發(fā)生不良反應依據(jù)新藥特點，可在臨床階段提供新藥安全性資料

致突變試驗、致癌性試驗和III段生殖試驗，普通可以在申報NDA時提供其研究資料

新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第20頁8、新藥臨床階段安全性評價利弊權衡評定臨床已出現(xiàn)毒性，和毒性特點以及監(jiān)測、防治辦法。確定深入臨床和劑量選擇方案提供主要信息。綜合相關信息進行利弊權衡，判斷能否向臨床推進。依據(jù)毒理結(jié)果調(diào)整臨床適應癥范圍、適應人群或給藥方案綜合比較新藥與已上市藥品之間毒副作用與安全性之間關系，分析與判斷該新藥上市可能性。新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第21頁9、藥品上市后再評價目標新藥上市前安全性評價不足病例太少、研究時間太短、試驗對象年紀范圍太窄、用藥對象條件控制太嚴藥品副反應與安全性關系

副作用、變態(tài)反應、特異質(zhì)反應、藥品依賴性、致癌、致突變、致畸作用老藥毒、副作用研發(fā)成新藥可能性

反應停、長春新堿、阿托品、阿斯匹林、雌激素藥品再評價與藥品命運關系

限制與撤出使用、醫(yī)療事故判斷依據(jù)新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第22頁10.藥品上市后風險主要起源已知風險可防止無法防止藥品缺點仿冒制品可預防AEs損傷或死亡其它不確定原因潛在、未知風險缺失信息，如人種、年紀、性別、藥品與藥品之間、藥品與疾病之間相互作用等。不一樣問題，應給予對應處理方法－上市后監(jiān)測與安全性再評價用藥錯誤新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第23頁11.藥品毒副作用與從市場撤出舉例（1990-）年份藥物適應癥/分類副作用1991Enkald恩卡尼上市４年抗心律失常藥品作用于心血管，突然死亡1992Temafloxacin替馬沙星抗菌類藥腎損傷1998Poslcor(mibefradll)

Duract(bronfenacsodium)

降血壓藥/鈣通道抑制劑止痛藥致死性相互作用（抑制肝酶）肝損傷1999Tronan嚴格限制使用Raxar格帕沙星(Grepafloxacin)

Hismanal息斯敏Rotashield輪狀病毒疫苗

抗生素喹諾酮抗生素抗組胺藥輪狀病毒疫苗肝/腎損傷QT間期延長（致死）藥品相互作用腸梗阻RenzulinPropulsidLotonex治療Ⅱ型糖尿病藥燒心過敏性胃腸綜合癥肝損傷心律不齊/致死缺血性結(jié)腸炎Phenylpropanolaminebaychlor調(diào)整血脂藥降低膽固醇出血性休克橫紋肌溶解/致死新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第24頁12.非臨床安全性評價基本標準

把握藥理毒理評價系統(tǒng)性充分暴露毒性詳細問題詳細分析執(zhí)行GLP（藥品非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范）新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第25頁13.非臨床安全性評價全過程

質(zhì)量管理GRP-GoodReviewingPracticeGSP-GoodSupplyPracticeGUP-GoodUsingPracticeGSSP-GoodStorageAndShippingPracticeGMP-GoodManufacturingPracticeGLP-GoodLaborataryPracticeGCP-GoodClinicalPractice藥品相關GXP管理GCP/GLP藥品研制藥品生產(chǎn)GMPGSP藥品流通GUP藥品使用藥品審評GRP藥品儲存GSSP新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第26頁14、藥品安全性評價最終目標－為臨床服務初步目標–

毒理試驗本身（試驗評價）1.毒性反應（定性和定量）劑量、時間、程度、癥狀、性質(zhì)、靶器官以及損傷可逆性2.安全劑量及安全范圍最終目標—向臨床過渡（綜合評價）申報臨床：1.預測人臨床用藥時可能毒性，以制訂監(jiān)測、防治辦法2.推算臨床研究安全參考劑量和安全范圍，進行利弊權衡申報生產(chǎn)：3.為說明書提供信息--尤其是那些無法在人體試驗動物結(jié)果，限制用藥人群，幫助利弊權衡。新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第27頁21/24/26號:過敏性（局部、全身和光敏毒性）、／溶血性和局部（血管、皮膚、粘膜、肌肉等）刺激性等主要與局部、全身給藥相關特殊安全性試驗研究和文件資料22//27號:復方制劑中各種成/組份藥效、毒性、藥代動力學相互影響試驗資料及文件資料23/25/22號:致突變試驗資料及文件資料24/26/23號:生殖毒性試驗資料及文件資料25/27/24號:致癌試驗資料及文件資料26//28號:依賴性試驗資料及文件資料27/28/21號:動物藥代動力學試驗資料及文件資料15、各類新藥申報資料普通要求新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第28頁16、《藥品注冊管理方法》藥品注冊藥理毒理申報資料藥理毒理研究資料綜述主要藥效學試驗資料及文件資料普通藥理學試驗資料及文件資料－（ＧＬＰ）急性毒性試驗資料及文件資料－（ＧＬＰ）長久毒性試驗資料及文件資料－（ＧＬＰ）過敏性（局部、全身、和光敏毒性）、溶血性和局部（血管、皮膚、粘膜、肌肉等）刺激性等特殊安全性試驗資料和文件資料－（ＧＬＰ）復方制劑中各種成份藥效、毒性、藥代動力學相互影響試驗資料和文件資料致突變試驗資料及文件資料－（ＧＬＰ）生殖毒性試驗資料及文件資料－（ＧＬＰ）致癌試驗資料及文件資料－（ＧＬＰ）依賴性試驗資料及文件資料－（ＧＬＰ）非臨床藥代動力學試驗資料及文件資料－（ＧＬＰ）新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第29頁

17.臨床前安全性評價

與臨床差異

研究方案/種屬動物人體個體數(shù)量大量個體個體年紀青年各個年紀段個體健康情況健康不定個體遺傳背景同源異源給藥劑量從治療量到中毒量治療量給藥時間通常每日一次依據(jù)治療需要居住條件統(tǒng)一，最正確不定營養(yǎng)統(tǒng)一，最正確不定輔助治療無經(jīng)常語言交流無廣泛病理組織學全方面特例新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第30頁

18、長久毒性試驗給藥期限藥品臨床療程長久毒性試驗給藥期限能夠支持臨床研究階段嚙齒類動物非嚙齒類動物單次給藥2周2周Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期≤2周1個月1個月Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期>2周*1個月1個月Ⅰ期≤1個月1個月1個月Ⅱ期3個月3個月Ⅲ期≤3個月3個月3個月Ⅱ期6個月6個月Ⅲ期≤6個月6個月6個月Ⅱ期6個月9個月Ⅲ期>6個月6個月9個月Ⅱ期6個月9個月Ⅲ期新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第31頁19.安評資料審評中主要問題

（一）受試物（二）試驗動物（三）給藥路徑（四）給藥頻率（五）給藥期限（六）給藥劑量（七）觀察指標（八）觀察指標時間和次數(shù)（九）結(jié)果及分析（十）綜合評價新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第32頁

急性（單次給藥）毒性長久（重復給藥）毒性致突變（遺傳毒性）生殖毒性致癌性免疫原性依賴性毒代動力學其它毒性（過敏性、溶血性、光毒性、免疫毒性、藥品依賴性等試驗）20、藥品安全性評價研究范圍新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第33頁

受試藥品化學藥品：原料、制劑生物制品：制劑中藥：原料、制劑、浸膏試驗動物

動物同藥效試驗嚙齒類和非嚙齒類兩種，如大鼠、犬或猴等。理由充分，一個相關動物21.藥品非臨床研究-共性問題新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第34頁22.臨床前毒理學評價總要求找出毒性劑量Toxicdosage確定安全劑量范圍

Safetymargin

毒性反應Toxicreaction:性質(zhì)、程度、量毒關系、產(chǎn)生時間，達峰時間,連續(xù)時間及重復產(chǎn)生毒性反應時間、遲發(fā)性、蓄積性、耐受性

尋找毒性反應靶器官TargetOrgan

毒性反應是否可逆Reversibility確保臨床用藥安全新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第35頁（一）試驗要求（二）目標意義（三）基本內(nèi)容和要求（四）急性毒性LD50慣用計算方法（五）相關問題三、急性毒性試驗新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第36頁（一）試驗要求試驗動物嚙齒類----小鼠或大鼠非嚙齒類----犬或其它一類藥最少必須用二種動物(嚙齒類及非嚙齒類各一個,其中非嚙齒類宜用Beagle犬);其它類酌情用二種動物小鼠18-22g,同次體重相差不超出4g;大鼠120-150g,同次體重不超出20g;犬用成年犬♀♂各半

新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第37頁（二）急性毒性試驗目標意義1、了解新藥急性毒性強度2、計算新藥相對毒性參數(shù)3、為臨床毒副反應監(jiān)護提供參考依據(jù)4、為長久毒性、蓄積性毒性提供依據(jù)5、為特殊毒性試驗選擇劑量提供依據(jù)6、其它方面新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第38頁1、新藥急性毒性強度

表.化學物質(zhì)急性毒性分級標準(WHO,1977)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━毒性分級ig大、小鼠LD50吸入大、小鼠LC50涂皮兔LD50人口服可能

(mg/kg)(ppm)(mg/kg)致死量(g)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━極毒<1<10<50.06劇毒1-5010-1005-444中等毒51-500101-100045-35030低毒501-50001001-10000351-2180250實際無毒>5000>10000>2180>1200━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━*吸入毒性LC50指中毒欄中濃度,一次中毒2-4小時,觀察24天

新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第39頁新藥急性毒性強度

表.歐共體對化學物毒性分級━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━動物及給藥路徑劇毒毒有害━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━大鼠LD50ig(mg/kg)≤2525-200200-大鼠或兔經(jīng)皮LD50(mg/kg)≤5050-400400-大鼠LC50(mg/L/4h≤0.50.2-22-20━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━

新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第40頁2、相對毒性參數(shù)治療指數(shù)TI=LD50/ED50安全系數(shù)SF=LD5/ED95可靠或確實安全系數(shù)CSF=LD1/ED99安全范圍SM=(LD1/ED99-1)X100%SED50/ED50,越大越安全LD5基本無害量ED95基本有效量LD1必定無害量

ED99必定有效量新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第41頁3.為臨床毒副反應監(jiān)護提供參考中毒癥狀起始時間連續(xù)時間恢復時間反抗試驗為臨床搶救提供依據(jù)新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第42頁急性毒性試驗觀察動物反應指標中毒部位毒性癥狀表現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)呆滯:對刺激反應遲緩、減弱、消失；不安：對刺激反應過敏、興奮；強直：行動姿勢改變、叫聲異常、震顫、共濟失調(diào)植物神經(jīng)系統(tǒng)瞳孔縮小、放大;分泌增多，如流涎、流淚呼吸系統(tǒng)鼻孔流鼻涕、呼吸遲緩、困難、潮式呼吸、速率加緊等心血管系統(tǒng)心動過速、遲緩、心律不齊、心跳過強、微弱胃腸系統(tǒng)脹、腹瀉、便秘、糞便不成形、糞便黑色生殖系統(tǒng)乳腺膨脹、會陰部污濁、陰囊下垂等皮膚、毛皮膚發(fā)紅、松弛、皮疹、毛豎起粘膜口腔流粘液、充血、潰瘍、出血性紫紺眼睛上瞼下垂、眼球突出混濁其他直腸溫度升高、降低；消瘦；拒食等新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第43頁4、為長毒、蓄毒試驗

選擇劑量提供依據(jù)長久毒性劑量設計LD50法(1/10,1/50,1/100)MTD法(1,1/3,1/10)蓄積性毒性劑量設計1/10LD50,然后按等比級數(shù)1.5倍逐步遞增新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第44頁5、為特殊毒性試驗選擇劑量提供依據(jù)生殖毒性試驗高劑量為母鼠MTD致突變試驗嚙齒類動物微核試驗高劑量為1/2LD50果蠅伴性隱性致死試驗高、低劑量分別為1/2LD50和1/4LD50精原細胞染色體畸變試驗高劑量應為1/2LD50

動物短期致癌試驗高劑量應是MTD主要藥效學劑量程度、普通藥理學和藥動學劑量設計也要參考急性毒性LD50新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第45頁6、其它方面系列化合物合格率分析(除理化性質(zhì)為主外)也參考LD50復方中藥品相互作用,有時也經(jīng)過拆方及適用LD50來判別相互作用性質(zhì)新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第46頁四、長久毒性試驗（一）目標意義（二）基本內(nèi)容和要求

1、LD50試驗

2、最大耐受量試驗

3、最大給藥量試驗

4、限量試驗（三）長久毒性研究目標（四）試驗方案設計

1-基本標準

2-試驗動物

3-給藥方案新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第47頁（一）目標意義毒性劑量Toxicdosage安全范圍Safetymargin毒性反應Toxicreaction:性質(zhì)、程度、量毒關系、產(chǎn)生時間，達峰時間,連續(xù)時間及重復產(chǎn)生毒性反應時間、遲發(fā)性、蓄積性、耐受性

毒性反應靶器官Targetorgan

毒性反應是否可逆Reversibility新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第48頁1-LD50試驗指動物單次給藥后引發(fā)50％動物死亡劑量。LD50值意義是：LD50越小表示藥品急性毒性越大。動物：小鼠、大鼠等動物與分組：普通5組；每組10只雌、雄各半。試驗前禁食給藥路徑：臨床給藥路徑觀察14天，進行大致解剖觀察，如有改變-病理檢驗（二）基本內(nèi)容和要求新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第49頁2-最大耐受量試驗

（MTD--Maximum-ToleratedDose

）指動物單次大劑量給藥或在24小時內(nèi)接收屢次大劑量受試藥品后，動物在短期內(nèi)出現(xiàn)與藥品相關毒性反應，不過又不引發(fā)動物死亡最大劑量動物：小鼠、大鼠、犬等動物數(shù)：小動物20只；大動物4只雌、雄各半。試驗前動物應注意禁食給藥路徑：臨床給藥路徑觀察14天，進行大致解剖觀察，如有改變-病理檢驗（二）基本內(nèi)容和要求新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第50頁

該試驗多用于中藥和毒性較小其它藥品研究指藥品以最高濃度和最大容積給藥，劑量可能并未到達最大耐受劑量，所以該劑量被稱為最大給藥量。詳細要求可參考最大耐受量試驗。

低毒藥品，口服給藥：5g（或ml）/kg

動物數(shù)普通≥5只，大鼠禁食一夜，小鼠禁食4－6小時，觀察14天，如無死亡，則無必要進行更高劑量如動物在5g/kg出現(xiàn)死亡，可選擇較低劑量3、最大給藥量試驗4、限量試驗（二）基本內(nèi)容和要求新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第51頁觀察動物在給予超出臨床劑量（數(shù)倍或數(shù)十倍）和用藥周期（3-4倍以上）情況下所出現(xiàn)毒性反應設法發(fā)覺引發(fā)毒性反應劑量、劑量與毒性之間關系、中毒表現(xiàn)和程度、主要毒性靶器官或組織及可逆程度等預測臨床研究階段可能安全范圍和毒性，預先制訂防治辦法或防止一些有特殊疾病患者使用，降低臨床可能風險為臨床試驗初始劑量和指標選擇等提供主要參數(shù)（三）長久毒性研究目標新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第52頁通常長毒始于主要藥效、安全藥理、單次給藥毒性、初步藥代動力學（假如已經(jīng)可取得）等試驗之后有些藥品側(cè)重比較毒理學研究，如新劑型、改變酸根或堿基、改變給藥路徑等。（四）試驗方案設計-基本標準新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第53頁l

動物種類

常用大鼠和犬或敏感動物。創(chuàng)新藥普通2種以上，雌雄各半。生物制品多用大鼠和猴（種屬特異性可特殊）

動物年紀與數(shù)量

大鼠試驗3月內(nèi)：6-8周齡；>3月：5-6周齡犬：普通選取性成熟，6-10月；猴：3.5-4.5年依據(jù)試驗周期長短確定每組動物數(shù)。標準：試驗結(jié)束時小動物每組動物數(shù)應滿足統(tǒng)計學要求；大動物數(shù)應滿足毒理學評價要求；普通大鼠為10-30只，雌雄各半；犬、猴最少雌、雄各3只；毒性大、周期長數(shù)量應增加，考慮恢復期數(shù)量。（四）試驗方案設計—試驗動物新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第54頁給藥時間臨床給藥周期3-4倍。重復、長久或植入藥，按最長給藥時間，即嚙齒-6月；非嚙齒-9月周期短-天天給藥；>1個月-6天/周

-天天給藥時間應一致

-確保動物攝入量準確性中藥如給藥體積大，可將藥品分成2次/日

-不提倡采取摻食給藥，除非有穩(wěn)定性、均一性（四）試驗方案設計—給藥方案新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第55頁給藥劑量普通3個給藥劑量組高劑量-動物應出現(xiàn)毒性和個別死亡（<20%）低劑量-等于或略高于有效劑量，無毒性中劑量-介于以上二者之間，輕微毒性或者按急毒結(jié)果：

LD50法(1/10,1/50,1/100)MTD法(1,1/3,1/10)（四）試驗方案設計—給藥方案新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第56頁對照組設置

-通常給藥組和對照組動物數(shù)應基本相等

-對照組可依據(jù)試驗方案詳細要求和研究目標設置陰性對照組、溶媒對照組觀察指標全方面、針對特點普通體征、飲食、體重改變；血尿常規(guī)、血液及血液生化指標、心電圖，臟器/體重系數(shù)、主要組織器官肉眼和病理組織學觀察、死亡情況。應統(tǒng)計毒性癥狀出現(xiàn)、減輕或消失時間。體重和進食量每七天測1-2次。周期>3月，1/3動物檢驗中期主要指標；如發(fā)覺異?？蛇m當增加檢驗次數(shù)。（四）試驗方案設計—給藥方案新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第57頁五、其它毒性研究1、致突變性試驗2、生殖毒性試驗3、致癌性試驗4、皮膚給藥急性毒性試驗5、皮膚給藥長久毒性試驗6、皮膚刺激試驗7、皮膚過敏試驗8、光敏試驗9、眼刺激試驗10、滴鼻劑和吸入劑急性毒性試驗11、直腸、陰道用藥急毒試驗12、直腸、陰道用藥刺激試驗13、身體依賴性試驗-自然戒斷試驗14、身體依賴性試驗--替換試驗15、身體依賴性試驗--催促試驗16、身體依賴性試驗--誘導試驗17、精神依賴性試驗新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第58頁

當前建立遺傳毒性試驗是研究機體遺傳物質(zhì)受外源性化學物質(zhì)或其它環(huán)境原因作用時對有機體產(chǎn)生遺傳毒性作用。遺傳毒性試驗包含體外和體內(nèi)檢測系統(tǒng)。二者應結(jié)合進行研究。體外檢測系統(tǒng)包含細菌回復突變、微核試驗、哺乳動物細胞染色體畸變等；體內(nèi)試驗包含骨髓微核試驗、顯性致死試驗等。一類藥需要提供試驗資料1、致突變性試驗（遺傳毒性）新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第59頁

概念評價藥品對哺乳動物生殖影響，推測對人可能生殖毒性研究分為三段

I段（普通生殖毒性）：是評價對成年動物生育力和早期胚胎發(fā)育影響，評價藥品對配子成熟，交配行為、受孕、胚胎著床前和著床影響

II段（致畸敏感期毒性）：即妊娠動物在胚胎器官形成期給藥，評價藥品對親體、胚胎、胎仔發(fā)育影響

III段（圍產(chǎn)期毒性）：在妊娠動物分娩前后給藥，評價胎仔出生前后發(fā)育和孕鼠從妊娠后期至斷奶期間給藥對妊娠、分娩、哺乳、胚胎、胎仔發(fā)育影響。依據(jù)臨床用藥次數(shù)、適應證和擬用人群決定是否進行該試驗創(chuàng)新藥，普通可在申報臨床研究前先提供II段試驗對于可能只給一次或終生一次（如診療或外科手術）藥，重復給藥研究可能是無須要。在較高劑量下，縮短處理期似乎更適當。2、生殖毒性試驗新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第60頁致癌試驗檢測受試藥品對動物潛在致瘤性藥品是否進行該試驗應在取得一定相關信息后才能確定人群最長用藥時間及遺傳毒理學、重復給藥毒性等相關結(jié)果重復給藥毒性試驗可能顯示受試藥品含有免疫抑制特征、激素活性或考慮對人類是一個危險因子時，都應慎重考慮進行相關致癌試驗。如：-藥品擬用于非腫瘤病人輔助治療或非癌癥疾病重復給藥使用

-臨床連續(xù)給藥時間大于6個月應進行該試驗

-治療慢性和復發(fā)性疾病而經(jīng)常間斷使用藥品

-有明確遺傳毒性化合物；

-其構(gòu)效關系提醒有潛在致癌性藥品

-在連續(xù)重復給藥毒性試驗中有癌前期病變證據(jù)

-重復給藥滯留母體化合物或其代謝產(chǎn)物造成局部組織或病生理改變

-較長時間接觸藥品，如遲緩釋放藥品也應考慮進行該試驗

-內(nèi)源性肽類、蛋白質(zhì)是否需要進行該研究需作特殊考慮-超生理水平3-1、致癌性試驗新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第61頁

以下情況進行致癌試驗尤為主要：1）產(chǎn)生生物學作用與天然產(chǎn)物顯著不一樣；2）因為修飾造成產(chǎn)品結(jié)構(gòu)與天然產(chǎn)物相比有顯著不一樣；3）在人體局部或全身濃度（即藥理學水平）顯著增加。對于抗腫瘤藥品是否進行該試驗，可考慮以下原因：

-假如用藥人群生存期較短（2－3年），則不要求

-如用于晚期全身治療抗腫瘤藥品普通不需要進行，但當該藥品療效很好，能顯著延長生命時，應考慮相關繼發(fā)性腫瘤問題，應進行致癌性研究3-2、致癌性試驗新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第62頁目標:觀察短期接觸受試物后皮膚毒性反應動物:家兔、豚鼠或大鼠，♀♂各半，家兔體重２kg,豚鼠300g,大鼠200g左右,給藥前24h將動物背部脊柱兩側(cè)毛脫掉,去毛范圍約相當于體表面積10%左右,(家兔約150cm2左右,豚鼠、大鼠約40cm2左右）藥品：膏劑、液體或粉末。粉末需用賦形劑（如羊毛脂、凡士林等）混勻，以確保受試物與皮膚有良好接觸劑量：3個，組距0.65－0.85。家兔每組４只，豚鼠或大鼠每組10只并設賦形劑或空白對照組方法：將受試物均勻涂敷于脫毛區(qū)，破損皮膚則在脫毛區(qū)劃破皮膚后再涂敷受試物。24h后去除，每日觀察，連續(xù)7-14天。觀察動物體重、皮膚、毛發(fā)、眼睛和粘膜改變，呼吸、循環(huán)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動等改變。若有死亡則進行尸檢，當有肉眼可見病變，則需進行病檢判斷：試驗結(jié)果與對照組比較判斷4、皮膚給藥急性毒性試驗

新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第63頁5.皮膚給藥長久毒性試驗目標：觀察經(jīng)皮滲透產(chǎn)生異常反應和可逆程度，找到靶器官動物：家兔(2kg,6只/組)，豚鼠(300g，10只/組)或大鼠(200g，10只/組)，♀♂各半。給藥前24h動物背部脊柱兩側(cè)脫毛，面積同急毒受試物：同急性毒性試驗劑量：３個，要求同大鼠口服長毒試驗，并設賦形劑或空白對照組，若用受試物劑量超出有效濃度20倍以上，仍未見動物有不良反應或死亡時，則只須設一個高劑量組方法：受試物均勻涂敷,每次最少接觸６h，臨床用藥療程３倍以上時間連續(xù)給藥。部分動物應于停藥后繼續(xù)觀察１-２周，檢測指標：除每日觀察皮膚、臨床改變及皮膚病理學檢驗外，其血液學、血液生化指標和病理學檢驗項目同大鼠長久毒性試驗要求判斷：試驗結(jié)果應寫明安全劑量、中毒劑量、中毒表現(xiàn)、中毒靶器官及中毒可逆程度等新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第64頁6、皮膚刺激試驗目標：觀察刺激反應情況動物：首選家兔(2kg左右)，其次為豚鼠(300g左右)。藥前24h脫毛，家兔每側(cè)脫約50cm2，豚鼠每側(cè)脫約20cm2受試物：同急性毒性試驗方法：≥３只家兔或５只豚鼠，在受試物區(qū)、對照區(qū)和破損皮膚區(qū)（脫毛后），一次或?qū)掖螌⑹茉囄铮眒l或1g涂于受試物區(qū)，賦形劑則涂于對照區(qū)。24h后去除。觀察1、24、48和72h涂抹部位有沒有紅斑和水腫等，改變恢復情況和時間屢次給藥則每日涂抹一次，連續(xù)一周，其余均與一次給受試物方法和要求一致結(jié)果評價：每只動物試驗結(jié)果進行刺激反應評分，計算出平均分值進行刺激強度評價新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第65頁皮膚刺激反應評分━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━

刺激反應分值━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━紅斑:

無紅斑0

勉強可見1

中度紅斑2

嚴重紅斑3

紫紅色紅斑并有焦痂形成4水腫:

無水腫0

勉強可見1

皮膚隆起輪廓清楚2

水腫隆起約1mm并范圍擴大4━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第66頁皮膚刺激強度評價━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━

強度分值━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━無刺激性<0.5

輕度刺激性<2.0

中度刺激性<6.0

強度刺激性>6.0━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第67頁7、皮膚過敏試驗目標:觀察免疫系統(tǒng)反應在皮膚上表現(xiàn)動物：豚鼠♀♂各半(250-300g)。給藥前24h背部兩側(cè)脫毛，脫毛區(qū)每側(cè)約3x3cm2受試物：若受試物是膏劑或液體，直接試驗。若為固體粉末，則用水或賦形劑（如羊毛脂、凡士林、橄欖油等）混勻陽性致敏物：2,4-二硝基氯代苯配成1%致敏濃度和0.1%激發(fā)濃度方法：分受試物組，空白對照組，陽性對照組，每組10只（♀♂各半）1.致敏接觸：將受試物0.1-0.2ml(ｇ)涂在左側(cè)脫毛區(qū)，連續(xù)6h。第７天和第14天，同法各重復一次2.激發(fā)接觸：末次致敏后14天，將受試物0.1-0.2ml(ｇ)涂于右側(cè)脫毛區(qū)，陽性對照用0.1%2,4—二硝基氯代苯，６h后去除，即刻觀察，然后于24、48、72h再次觀察過敏反應情況結(jié)果評價：結(jié)果按皮膚反應評分標準評分，依據(jù)試驗組與對照組豚鼠皮膚反應差異，判斷受試物對皮膚過敏反應性質(zhì)可用致敏率(紅斑或水腫動物例數(shù)/受試動物總數(shù))判斷致敏強度新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第68頁皮膚過敏反應評分標準

皮膚反應分值紅斑形成：無紅斑０輕度紅斑１中度紅斑２重度紅斑３水腫性紅斑４水腫形成：無水腫０輕度水腫１中度水腫２重度水腫３新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第69頁致敏率分類━━━━━━━━━━━━━━━━━

致敏率（%）反應強度━━━━━━━━━━━━━━━━━０－10弱致敏性性

20－30輕度致敏性

40－60中度致敏性

70－80高度致敏性

90－100極度致敏性━━━━━━━━━━━━━━新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第70頁8、光敏試驗有些受試物皮膚涂抹后遇光照可引發(fā)光敏反應若其化學結(jié)構(gòu)或一些組成（包含藥品和賦形劑）文件報導有光敏作用者應作光敏試驗其化學結(jié)構(gòu)和已知光敏劑相同者也應做光敏試驗新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第71頁皮膚給藥毒性試驗相關問題設置賦形劑對照組，賦形劑各種指標、規(guī)格等均應符合藥用規(guī)格受損皮膚用藥，急毒、長毒等毒性試驗也宜以模擬破損皮膚進行高劑量符合制劑工藝要求，以劑型允許配制濃度和允許給藥容量給藥。不能將外用藥厚厚地涂在皮膚上新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第72頁9眼刺激試驗目標：觀察眼睛接觸受試物后產(chǎn)生刺激反應動物：家兔≥４只，體重2－3kg受試物：液體或膏劑均可直接滴入或涂敷劑量：用原液或原膏劑，無須稀釋，每只眼睛滴入0.1ml或涂敷0.1g以內(nèi)方法：滴入或涂敷于動物一側(cè)眼結(jié)膜囊內(nèi)，另一側(cè)作為空白（或賦形劑）對照。給藥后使眼睛被動閉合5－10分。統(tǒng)計給藥后6、24、48、72h至7天眼局部反應情況臨床用藥超出一周受試物要進行屢次給藥刺激試驗，連續(xù)給藥一周以上結(jié)果評價：將每只動物眼角膜、虹膜和結(jié)膜刺激反應分值相加，即是一只受試動物眼刺激反應總積分。把每個受試動物刺激反應積分總和除以動物數(shù)，就是該受試物對眼刺激性最終分值，以此判定受試物刺激程度新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第73頁9眼刺激試驗

眼刺激試驗--角膜評分無混濁０散在或彌漫性混濁，虹膜清楚可見1

半透明區(qū)易分辨，虹膜含糊不清2

出現(xiàn)灰白色半透明區(qū)，虹膜細節(jié)不清，瞳孔大小勉強看清3

角膜不透明，因為混濁，虹膜無法識別4眼刺激試驗--虹膜評分正常０皺褶顯著加深，充血，腫脹，角膜周圍輕度充血，瞳孔對光仍有反應１出血，肉眼可見壞死，對光無反應（或出現(xiàn)其中一個反應）２新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第74頁眼刺激試驗--結(jié)膜評分Ａ.充血（指瞼結(jié)膜、球結(jié)膜部位）血管正常０血管充血呈鮮紅色１血管充血呈深紅色，血管不易分辨彌漫性充血呈紫紅色３Ｂ.水腫無水腫０輕微水腫（包含瞬膜）１顯著水腫，伴有部分眼瞼外翻水腫至眼瞼近半閉合３水腫至眼瞼超半閉合４Ｃ.分泌物無分泌物０少許分泌物１分泌物使眼瞼和睫毛潮濕或粘著２分泌物使整個眼區(qū)潮濕或粘著３新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第75頁眼刺激試驗--結(jié)膜評分眼刺激性評━━━━━━━━━━━━━━━━刺激程度積分━━━━━━━━━━━━━━━━無刺激性０～３輕度刺激性４～８中度刺激性９～１２強度刺激性１３～１６━━━━━━━━━━━━━━━新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第76頁10.滴鼻劑和吸入劑急性毒性試驗目標：觀察一次滴入或吸入后所產(chǎn)生毒性反應和死亡情況動物：大鼠、豚鼠或家兔?！狻岣靼?，大鼠、豚鼠體重在250-300g、家兔在2.5kg左右受試物：液體或粉末劑劑量：３個劑量，組距0.65-0.85為宜。設賦形劑或空白對照組。若大劑量組（超出臨床預計用量50倍以上）未出現(xiàn)死亡情況時，則只須設一個高劑量組方法：大鼠或豚鼠每組10只，家兔每組４只，♀♂各半。滴入或吸入藥后，最少接觸４小時，給藥后即刻觀察及7-14天觀察動物全身情況、體重、呼吸、循環(huán)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動等改變，若出現(xiàn)死亡則病檢結(jié)果判斷：試驗結(jié)果與對照組比較。如能測出LD50值則按急性毒性試驗要求計算新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第77頁11.直腸、陰道用藥急毒試驗目標：觀察直腸或陰道一次接觸受試物后，由吸敷所產(chǎn)生毒性反應和死亡情況受試物：栓劑、液體或膏劑。劑量：３個，組距0.65-0.85，須設賦形劑或空白對照組方法：家兔每組４只，大鼠每組10只。將受試物置入≥４h。即刻觀察7-14天，觀察全身情況，體重、呼吸、循環(huán)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動等改變。若出現(xiàn)死亡時應做病檢結(jié)果判斷：與對照組比較判斷。必要時算LD50目標：觀察直腸、陰道刺激反應動物：同上述急性毒性試驗受試物：栓劑、液體或膏劑分組：給藥組、賦形劑組和空白對照組。每組家兔４只，大鼠６只方法：受試物置入≥４h，24h后處死動物。取出局部直腸或陰道組織。觀察有沒有充血、紅腫等現(xiàn)象，若有改變需進行病檢新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第78頁12.直腸、陰道用藥刺激試驗目標：觀察直腸、陰道刺激反應動物：同上述急性毒性試驗受試物：栓劑、液體或膏劑分組：給藥組、賦形劑組和空白對照組。每組家兔４只，大鼠６只方法：受試物置入≥４h，24h后處死動物。取出局部直腸或陰道組織。觀察有沒有充血、紅腫等現(xiàn)象，若有改變需進行病檢屢次給受試物則普通每日一次，連續(xù)７天，于末次給藥后24h處死動物并觀察結(jié)果判斷：試驗結(jié)果與對照組比較判斷腔道用藥毒性試驗要尤其注意既要符合劑型要求，又要考慮腔道可給容量新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第79頁13.身體依賴性試驗-自然戒斷試驗------連續(xù)給藥后突然停藥，觀察戒斷癥狀，與同類代表藥作對比，判斷受試藥依賴性潛力-----動物：小、大鼠和猴。小鼠體重20-24g，每組≥20只，大鼠體重180-220g，每組≥10只,猴體重3-5kg，每組3～5只，♂♀各半------劑量：2～3，須設賦形劑對照和陽性藥對照(嗎啡，苯巴比妥或巴比妥)。低劑量用ACD；高劑量組依賴性潛力低藥品應選取靠近毒性反應劑量，毒性低藥品選取MTD。藥品可采取恒量或劑量遞增方式給予-------連續(xù)給藥后突然停藥，觀察戒斷癥狀，與同類代表藥作對比，判斷受試藥依賴性潛力------動物：小、大鼠和猴。小鼠體重20-24g，每組≥20只，大鼠體重180-220g，每組≥10只,猴體重3-5kg，每組3～5只，♂♀各半------劑量：2～3，須設賦形劑對照和陽性藥對照(嗎啡，苯巴比妥或巴比妥)。低劑量用ACD；高劑量組依賴性潛力低藥品應選取靠近毒性反應劑量，毒性低藥品選取MTD。藥品可采取恒量或劑量遞增方式給予新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第80頁13.身體依賴性試驗-自然戒斷試驗------連續(xù)給藥后突然停藥，觀察戒斷癥狀，與同類代表藥作對比，判斷受試藥依賴性潛力-----動物：小、大鼠和猴。小鼠體重20-24g，每組≥20只，大鼠體重180-220g，每組≥10只,猴體重3-5kg，每組3～5只，♂♀各半------劑量：2～3，須設賦形劑對照和陽性藥對照(嗎啡，苯巴比妥或巴比妥)。低劑量用ACD；高劑量組依賴性潛力低藥品應選取靠近毒性反應劑量，毒性低藥品選取MTD。藥品可采取恒量或劑量遞增方式給予------觀察指標：鎮(zhèn)痛藥在停藥前24h及停藥后48h內(nèi)每隔4h觀察統(tǒng)計外觀體征和行為活動、植物神經(jīng)系統(tǒng)機能改變，并稱重。鎮(zhèn)靜催眠藥在停藥前一天及停藥后1至2周內(nèi)天天觀察動物外觀體征和行為活動及自發(fā)驚厥發(fā)生率-------外觀體征和行為活動包含：應激性、神情過敏(猴)、飲食、睡眠、自發(fā)運動活動、攻擊性、警覺程度、神經(jīng)反射、豎尾、震顫、驚厥、呼吸、體溫、體重------植物神經(jīng)系統(tǒng)機能改變：腹瀉、流涎、流淚、惡心、嘔吐、瞳孔大小------資料統(tǒng)計及整理：①動物應寫明種屬、性別、生產(chǎn)合格證號、統(tǒng)計體重、試驗室溫度及濕度②受試物應寫明生產(chǎn)批號、配制方法③戒斷癥狀用記分法統(tǒng)計，對檢測指標和體重、驚厥發(fā)生率等應設計合理圖表顯示。試驗結(jié)果進行統(tǒng)計處理新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第81頁14.身體依賴性試驗--替換試驗-----給予動物代表藥(如嗎啡、巴比妥或苯巴比妥)產(chǎn)生身體依賴性后，停頓給藥，替之以受試藥，觀察統(tǒng)計動物是否發(fā)生戒斷癥狀及發(fā)作程度----動物：參考“自然戒斷試驗”----劑量：參考“自然戒斷試驗”----給藥路徑：腹腔注射、灌胃或“藥摻食”(drugadmixedfood,DAF)法給予代表藥使產(chǎn)生身體依賴性，然后停頓給代表藥，以一樣給藥方式給予不一樣劑量受試藥,觀察及統(tǒng)計替換期間動物戒斷行為和體重改變-----鎮(zhèn)痛藥觀察期為停頓嗎啡前24h和停藥后48h內(nèi)，每4h觀察一次；鎮(zhèn)靜催眠藥觀察為停頓代表藥前一天和停藥后1～2周內(nèi)，天天觀察一次-----采取1～2種給藥路徑，必須有一個與臨床用藥路徑相同-----觀察指標：參考“自然戒斷試驗”-----資料統(tǒng)計與整理：參考“自然戒斷試驗”新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第82頁15.身體依賴性試驗--催促試驗---概念：短時期內(nèi)給予動物大劑量受試藥，然后注射受體反抗劑，觀察和統(tǒng)計是否出現(xiàn)戒斷癥狀及其程度。此法只適合用于有竟爭性受體反抗劑阿片類藥品----動物：參考“自然戒斷試驗”----劑量：除低劑量組普通采取臨床劑量1至2倍外，余同“自然戒斷試驗”---給藥路徑：猴試驗應采取與臨床給藥路徑相同；大、小鼠試驗選取二種給藥路徑，其中必須有一個與臨床用藥路徑相同---給藥期限：猴連續(xù)給藥30～60天，上、下午各一次，大、小鼠連續(xù)給藥3～5天----停藥后給予阿片受體反抗劑，慣用納洛酮，亦可用環(huán)丙羥丙嗎啡。觀察給受體反抗劑后1～2h內(nèi)動物出現(xiàn)戒斷癥狀及體重改變---觀察指標：參考“自然戒斷試驗”。小鼠適應觀察統(tǒng)計跳躍次數(shù)----資料統(tǒng)計及整理：參考“自然戒斷試驗”新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第83頁16.身體依賴性試驗--誘導試驗---概念：應用各種誘發(fā)驚厥方法如聽源性發(fā)作和戊四唑驚厥，對鎮(zhèn)靜催眠藥產(chǎn)生身體依賴性動物，在斷藥期間閾下刺激強度就可出現(xiàn)反跳性興奮，誘發(fā)驚厥---動物：大、小鼠。應預先挑選對各種閾下刺激無驚厥反應鼠---劑量：參考“自然戒斷試驗”，陽性代表藥為苯巴比妥或巴比妥----給藥路徑：二種，有一個同臨床路徑----給藥期限：30天，天天二次，上、下午各一次----觀察指標：聽源性發(fā)作試驗在停藥后一周內(nèi)天天統(tǒng)計發(fā)作率和體重；戊四唑試驗在停藥24h后統(tǒng)計一次發(fā)作率和體重----資料統(tǒng)計及整理：參考“自然戒斷試驗”新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第84頁17.精神依賴性試驗---采取”本身給藥“測定iv藥品對動物強化效應---動物：200～250g健康大鼠，♂♀各半----劑量：1～2個劑量組，加上一個陽性藥對照組(阿片類--鹽酸嗎啡，鎮(zhèn)靜催眠--苯巴比妥鈉或戊巴比妥鈉)，每組10只動物。---方法：戊巴比妥鈉麻醉下行頸外靜脈插管術，將插管一端固定于血管內(nèi)，另一端與恒速泵及藥液輸入系統(tǒng)相連。術后第二天開始對大鼠進行本身給藥訓練，直至動物建立本身給藥(踏板)行為---觀察指標：包含形成本身給藥行為潛伏期、每個試驗期內(nèi)大鼠本身給藥次數(shù)、行為改變、本身給藥行為隨藥品濃度變動改變程度、消退反應、與其它藥品相互替換等----資料統(tǒng)計及整理：參考“自然戒斷試驗”

新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第85頁六、特殊毒性試驗1、目標意義2、定性差異3、定量差異4、致突變試驗5、生殖毒性(致畸)試驗6、致癌試驗新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第86頁1、目標意義研究對遺傳物質(zhì)是否有損傷，是否會引發(fā)腫瘤、衰老及畸胎等特殊毒性試驗存在著種屬差異性定性差異定量差異新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第87頁2、定性差異反應停對家兔和７種靈長類動物致畸，但最少對10種品系大鼠、15種品系小鼠、2種家狗、３種田鼠和８種靈長類動物不致畸可松對兔子和小鼠強力致畸，但對大鼠不致畸硫唑嘌呤對大鼠不致畸，但對兔子強致畸氨磺丁脲引發(fā)大鼠、小鼠眼畸形，但對兔子卻引發(fā)臉和內(nèi)臟畸形

新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第88頁3、定量差異致畸劑量在人與動物、動物與動物間差異顯著

表人類與動物致畸劑量比較藥品最低致畸劑量（/kg/d)人與動物比值人動物反應停0.5-1.0mg兔2.5mg

5-2.5

氨基喋呤50μg大鼠100μg2

氨甲喋呤42μg大鼠200μg4.8

乙烯雌酚20-80μg恒河猴200μg10-2.5

苯妥英鈉2mg小鼠50mg25新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第89頁4、致突變試驗微生物回復試驗(Ames試驗）+哺乳動物培養(yǎng)細胞基因突變試驗+果蠅伴性隱性致死試驗染色體畸變試驗+嚙齒動物顯性致死試驗+精原細胞染色體畸變試驗動物微核試驗

+程序外DNA合成(UDS)試驗+SOS顯色試驗新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第90頁微生物回復試驗菌株:組胺酸缺點型鼠傷寒沙門氏菌(S.Typhimurium),采取TA98、100、97、102,檢定符合要求,-80℃或液氮凍存?zhèn)溆脛┝浚河伤幤穼毦拘院腿芙舛葲Q定

最高劑量：

a.普通5mg／皿

b.最高溶解度

c.依據(jù)殺菌情況確定最大濃度最低劑量：普通1μg／皿或0.1μg／皿。劑量級：5個以上新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第91頁微生物回復試驗代謝活化：加肝臟微粒體酶(S9)和不加S9平行條件下測試對照：陰性、陽性對照和S9對照方法：標準平板法或預培養(yǎng)法，48h觀察結(jié)果，如菌落太小，可繼續(xù)培養(yǎng)并延長到72h觀察結(jié)果。每一濃度最少三皿，試驗最少重復一次結(jié)果判定：①受試物所誘發(fā)回變菌落數(shù)(ｘ±ｓ)增加，超出對照2倍，量--效關系；②某測試點超出對照2倍以上，展現(xiàn)可重復并有統(tǒng)計學意義增加。符合上述任何一條即可判為陽性新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第92頁微生物回復試驗如一些藥品有顯著殺菌作用，可改用哺乳動物細胞基因突變試驗如一些陽性或可疑陽性時，可選擇哺乳動物培養(yǎng)細胞基因突變試驗或果蠅伴性隱性致死試驗新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第93頁哺乳動物培養(yǎng)細胞染色體畸變試驗細胞:提議首選中國倉鼠肺細胞(CHL),需定時檢驗核型和有沒有支原體等污染。-80℃或液氮凍存劑量：高劑量以50％細胞生長抑制濃度為基準，最高不要超出10mM分子量。溶解受限時可采取飽和濃度。中低劑量用倍量稀釋法。最少３個劑量代謝活化：應用誘導劑處理后哺乳動物肝微粒體酶（S9）進行體外代謝活化試驗新藥研發(fā)中藥理毒理研究內(nèi)容和要求第94頁哺乳動物培養(yǎng)細胞染色體畸變試驗藥品作用時間:藥品和細胞接觸非活化組作用24h和48h收獲細胞,代謝活化組作用6小時以上標本制作