DB11∕T 1806-2020 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 寄生蟲檢測(cè)

ICS

65.020.30CCS

B

44DB11 DB11/

T

1806—2020代替

828.2—2011，DB11/T

1053.2—2013，DB11/T

—，

1460.2—2017，1460.3—，DB

1460.4—，

—2018實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

寄生蟲檢測(cè)Laboratory

animal—Parasitological

testing

發(fā)布

實(shí)施北京市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)

布DB11/T

— 前言.................................................................................

II1

...............................................................................

12

規(guī)范性引用文件.....................................................................

13

術(shù)語(yǔ)和定義.........................................................................

14

...........................................................................

25

...........................................................................

26

...........................................................................

77

...........................................................................

88

..........................................................................

119

..........................................................................

1210

結(jié)論與報(bào)告.......................................................................

12附錄

A（規(guī)范性） 實(shí)驗(yàn)雞的組織滴蟲檢測(cè)

...............................................

13附錄

B（規(guī)范性） 實(shí)驗(yàn)鵝的毛滴蟲檢測(cè)

.................................................

14附錄

C（規(guī)范性） 實(shí)驗(yàn)鴿的瘧原蟲檢測(cè)

.................................................

15附錄

D（規(guī)范性） 實(shí)驗(yàn)魚的寄生蟲檢測(cè)

.................................................

16參考文獻(xiàn).............................................................................

17DB11/T

—

寄生蟲檢測(cè)1 范圍本文件規(guī)定了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的寄生蟲學(xué)等級(jí)分類、檢測(cè)要求、檢測(cè)程序、檢測(cè)方法、檢測(cè)規(guī)則、結(jié)果判定、結(jié)論與報(bào)告。本文件適用于實(shí)驗(yàn)小型豬、實(shí)驗(yàn)豬、實(shí)驗(yàn)牛、實(shí)驗(yàn)羊、實(shí)驗(yàn)狨猴、實(shí)驗(yàn)長(zhǎng)爪沙鼠、實(shí)驗(yàn)雪貂驗(yàn)貓、實(shí)驗(yàn)雞、實(shí)驗(yàn)鴨、實(shí)驗(yàn)鵝、實(shí)驗(yàn)鴿、實(shí)驗(yàn)魚（斑馬魚和劍尾魚）的寄生蟲檢測(cè)。2 規(guī)范性引用文件下列中的文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件的條款。其中，注日期件，的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版包括所有的修改單）適用于GB/T

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 體外寄生蟲檢測(cè)方法GB/T

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 弓形蟲檢測(cè)方法GB/T

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 兔腦原蟲檢測(cè)方法GB/T

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物卡氏肺孢子蟲檢測(cè)方法GB/T

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 蠕蟲檢測(cè)方法GB/T

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 瘧原蟲檢測(cè)方法GB/T

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 腸道溶內(nèi)阿米巴GB/T

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 腸道鞭毛蟲和纖GB/T

18642 豬旋病診斷技術(shù)GB/T

18644 豬囊尾蚴病診斷技術(shù)GB/T

18647 球蟲病診斷技術(shù)GB/T

23239 伊氏錐蟲病診斷技術(shù)NY/T

獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與技術(shù)規(guī)范NY/T

棘球蚴病診斷技術(shù)NY/T

子蟲檢測(cè)技術(shù)改良抗酸染色法SN/T

蟲病診斷 顯微鏡檢查法SN/T

魚華支睪吸蟲囊蚴鑒定方法SN/T

牛焦蟲病檢術(shù)規(guī)范SN/T

子蟲病檢疫技術(shù)規(guī)范3 術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 laboratory

經(jīng)人工飼育，對(duì)其攜帶的微生物和寄生蟲實(shí)遺傳背景明確或者來源清楚，用于科學(xué)、教學(xué)、生產(chǎn)和檢定以及其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物。DB11/T

—[來源:

GB

14925—2010,

3.1]3.2普通級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

(CV)

laboratory

animal不攜帶所規(guī)定的人獸共患病病烈性傳染原和對(duì)科學(xué)實(shí)驗(yàn)有重大干擾的病物。3.2.1無特定抗原抗體普通級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

&

antibody-free

laboratory

animal普通級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中疫特定的疫苗，且經(jīng)不攜帶排除的特定病原微生物抗原的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，稱為定抗原普通3.3無特定病原體級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 specific

pathogen

(SPF)

laboratory

除普通級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)排除的病原外，不主要潛在感染或條件致病和對(duì)科學(xué)實(shí)驗(yàn)干擾大的病原的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。3.4無菌級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

laboratory

無可檢出的一切生命體的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。4 等級(jí)分類根據(jù)的程度，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為普通定病原體無菌級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物三個(gè)等級(jí)。5 檢測(cè)要求5.1外觀檢查對(duì)待、行為、被天然孔分泌物進(jìn)觀檢查。5.2 寄生蟲檢測(cè)項(xiàng)目5.2.1 實(shí)驗(yàn)豬和實(shí)驗(yàn)小型豬各等級(jí)寄生蟲檢測(cè)表

1

的規(guī)定執(zhí)行。EctoparasitesToxoplasmaTrichinellaCysticercusEctoparasites●Toxoplasma●Trichinella●Cysticercus●Coccidia●Balantidium●Giardia●Amoeba●Cryptosporidium●Helminths●●表示性。EctoparasitesEchinococcusToxoplasmaEctoparasitesEchinococcusToxoplasmaCoccidiaNeosporaPiroplasmaGiardiaTrypanosomeHelminthsCryptosporidium表示DB11/T

—表1實(shí)驗(yàn)豬和實(shí)驗(yàn)小型豬各等級(jí)寄生蟲檢測(cè)項(xiàng)目5.2.2實(shí)驗(yàn)牛和實(shí)驗(yàn)羊各等級(jí)寄生蟲檢測(cè)按照表

2表1實(shí)驗(yàn)豬和實(shí)驗(yàn)小型豬各等級(jí)寄生蟲檢測(cè)項(xiàng)目表2表2 實(shí)驗(yàn)牛和實(shí)驗(yàn)羊各等級(jí)寄生蟲檢測(cè)項(xiàng)目Ectoparasites●Toxoplasma●Ectoparasites●Toxoplasma●Flagellates●Helminths●Coccidia●Plasmodium●●表示Ectoparasites●Toxoplasma●Ectoparasites●Toxoplasma●Ciliates●Flagellates●Helminths●Pneumocystis

carinii●Encephalitozoon

cuniculi●●表示性。DB11/T

—5.2.3實(shí)驗(yàn)狨猴各等級(jí)寄生蟲檢測(cè)項(xiàng)目按照表

3

的規(guī)定執(zhí)行。表3 實(shí)驗(yàn)狨猴各等級(jí)寄生蟲檢測(cè)項(xiàng)目5.2.4 實(shí)驗(yàn)長(zhǎng)爪各等級(jí)寄生蟲檢測(cè)項(xiàng)目按照表

4

的規(guī)定執(zhí)行。表4 實(shí)驗(yàn)長(zhǎng)爪沙鼠各等級(jí)寄生蟲檢測(cè)項(xiàng)目5.2.5實(shí)驗(yàn)各等級(jí)寄生蟲檢測(cè)項(xiàng)目按照表

5

的規(guī)定執(zhí)行。EctoparasitesToxoplasmaClonorchis

sinensisEctoparasitesToxoplasmaClonorchis

sinensisCiliatesFlagellatesHelminthsEncephalitozoon

cuniculiCoccidia表示性。Ectoparasites●Toxoplasma●Ectoparasites●Toxoplasma●Helminths●Coccidia●Flagellates●表示性。Ectoparasites●●●●Helminths●●●●Toxoplasma●●●●DB11/T

—表5實(shí)驗(yàn)雪貂各等級(jí)寄生蟲檢測(cè)項(xiàng)目5.2.6實(shí)驗(yàn)貓各等級(jí)寄生蟲檢測(cè)項(xiàng)目表

6

的規(guī)定執(zhí)行。表6 實(shí)驗(yàn)貓各等級(jí)寄生蟲檢測(cè)項(xiàng)目5.2.7 實(shí)驗(yàn)雞、實(shí)驗(yàn)鴨、實(shí)驗(yàn)鵝和實(shí)驗(yàn)鴿各等級(jí)寄生蟲檢測(cè)項(xiàng)目按照表

7

的規(guī)定執(zhí)行。表7 實(shí)驗(yàn)雞、實(shí)驗(yàn)鴨、實(shí)驗(yàn)鵝和實(shí)驗(yàn)鴿各等級(jí)寄生蟲檢測(cè)項(xiàng)目Pseudoloma

neurophilia●Piscinoodinium

pillulare●Ichthyophthirius

●Bothriocephalidae●Pseudoloma

neurophilia●Piscinoodinium

pillulare●Ichthyophthirius

●Bothriocephalidae●Chilodonella●Trichodina●Apiosoma●Myxozoan●Dactylogyrus●Pseudocapillaria

●Gyrodactylus●Camallanidae●Lernaea●●表示性。Ectoparasites●●●●Helminths●●●●Toxoplasma●●●●Leucocytozoon●○●○Ameba●○○○Cryptosporidium●●○○Histomonas●○○○Coccidia●●●●Trichomonas○○●○Plasmodium○○○●●●●●表示DB11/T

—表

7實(shí)驗(yàn)雞、實(shí)驗(yàn)鴨、實(shí)驗(yàn)鵝和實(shí)驗(yàn)鴿各等級(jí)寄生蟲檢測(cè)項(xiàng)目（續(xù)）5.2.8 實(shí)驗(yàn)魚各等級(jí)寄生蟲檢測(cè)項(xiàng)目表

8

的規(guī)定執(zhí)行。表8 實(shí)驗(yàn)魚各等級(jí)寄生蟲檢測(cè)項(xiàng)目DB11/T

—6 檢測(cè)程序6.1實(shí)驗(yàn)鴨、實(shí)驗(yàn)鵝和實(shí)驗(yàn)鴿?rùn)z測(cè)程序6.1.1貓雞、實(shí)驗(yàn)鴨、實(shí)驗(yàn)鵝和實(shí)驗(yàn)鴿?rùn)z測(cè)程序按照?qǐng)D

1

的規(guī)定執(zhí)行。編號(hào)外觀檢查麻醉毛發(fā)、羽毛或

血液

新鮮糞便檢測(cè)結(jié)果判定判定結(jié)論圖1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物寄生蟲檢測(cè)程序6.1.2 麻醉應(yīng)根據(jù)不同動(dòng)物種部位決定是否需要麻醉。需要麻醉時(shí)，應(yīng)考慮不同種類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的，可采用吸入性麻醉或注射麻醉，過程中應(yīng)隨時(shí)注意實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的反應(yīng)。實(shí)施人員應(yīng)經(jīng)過相應(yīng)并具備相應(yīng)的能力。6.1.3 釆血以及毛發(fā)、羽毛或皮屑、新鮮糞便的采樣方法參照

541

進(jìn)行。6.1.4 檢測(cè)結(jié)果存疑，需要進(jìn)一步確診時(shí)，應(yīng)結(jié)狀和前期，動(dòng)物組織或特定樣本進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)。6.2 實(shí)驗(yàn)魚檢測(cè)程序DB11/T

—實(shí)驗(yàn)魚檢測(cè)程序按照?qǐng)D2的規(guī)定執(zhí)行麻醉應(yīng)方便于檢查、采動(dòng)物福利倫理的要求。編號(hào)外觀檢查麻醉體表查和剖檢及體內(nèi)寄生蟲檢查和取材解剖鏡和顯微鏡檢查結(jié)果判定判定結(jié)論圖

2

實(shí)驗(yàn)魚寄生蟲學(xué)檢測(cè)程序7 檢測(cè)方法7.1 實(shí)驗(yàn)豬和實(shí)驗(yàn)小型豬寄生蟲學(xué)檢測(cè)方法按照表

9

的規(guī)定執(zhí)行。GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

18448.10GB/T

18448.10GB/T

NY/T

1949GB/T

GB/T

NY/T

1466GB/T

NY/T

1949GB/T

SN/T

3485SN/T

3499GB/T

18448.10GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

18448.10GB/T

DB11/T

—表9實(shí)驗(yàn)豬和實(shí)驗(yàn)小型豬寄生蟲學(xué)檢測(cè)方法7.2實(shí)驗(yàn)牛和實(shí)驗(yàn)羊寄生蟲學(xué)檢測(cè)方法按照表

10表9實(shí)驗(yàn)豬和實(shí)驗(yàn)小型豬寄生蟲學(xué)檢測(cè)方法表10 實(shí)驗(yàn)牛和實(shí)驗(yàn)羊寄生蟲學(xué)檢測(cè)方法7.3 實(shí)驗(yàn)狨猴寄生蟲學(xué)檢測(cè)方法按照表

表10 實(shí)驗(yàn)牛和實(shí)驗(yàn)羊寄生蟲學(xué)檢測(cè)方法表11 實(shí)驗(yàn)狨猴寄生蟲學(xué)檢測(cè)方法GB/T

SN/T

2975GB/T

GB/T

18448.10GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

18448.10GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

DB11/T

—7.4 實(shí)驗(yàn)長(zhǎng)爪寄生蟲學(xué)檢測(cè)方法按照表

的規(guī)定執(zhí)行。表12實(shí)驗(yàn)長(zhǎng)爪沙鼠寄生蟲學(xué)檢測(cè)方法7.5 實(shí)驗(yàn)寄生蟲學(xué)檢測(cè)方法按照表

的規(guī)定執(zhí)行。表13 實(shí)驗(yàn)雪貂寄生蟲學(xué)檢測(cè)方法 GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

18448.10 GB/T

7.6 實(shí)驗(yàn)貓寄生蟲學(xué)檢測(cè)方法按照表

14

的規(guī)定執(zhí)行。表14 實(shí)驗(yàn)貓寄生蟲學(xué)檢測(cè)方法7.7 實(shí)驗(yàn)雞、實(shí)驗(yàn)鴨、實(shí)驗(yàn)鵝和實(shí)驗(yàn)鴿寄生蟲檢測(cè)方法按照表

15表14 實(shí)驗(yàn)貓寄生蟲學(xué)檢測(cè)方法表15表15 實(shí)驗(yàn)雞、實(shí)驗(yàn)鴨、實(shí)驗(yàn)鵝和實(shí)驗(yàn)鴿寄生蟲檢測(cè)方法

GB/T

GB/T

NY/T

1949SN/T

1225

DB11/T

—表

15實(shí)驗(yàn)雞、實(shí)驗(yàn)鴨、實(shí)驗(yàn)鵝和實(shí)驗(yàn)鴿寄生蟲檢測(cè)方法（續(xù)）7.8表

15實(shí)驗(yàn)雞、實(shí)驗(yàn)鴨、實(shí)驗(yàn)鵝和實(shí)驗(yàn)鴿寄生蟲檢測(cè)方法（續(xù)）8 檢測(cè)規(guī)則8.1檢測(cè)每3個(gè)月應(yīng)至少檢測(cè)1次。8.2 抽樣8.2.1 抽樣按寄生蟲和微聯(lián)合抽樣。抽樣表16的要求。表16 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物表16 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物抽樣

的規(guī)定執(zhí)行。111001001050015DB11/T

—8.2.3抽樣數(shù)量實(shí)驗(yàn)魚抽樣數(shù)量：同一水環(huán)境實(shí)驗(yàn)魚數(shù)量少于100尾，則抽樣5尾；大于等于尾，則按比例抽取，最大抽樣量為30尾。其他抽樣表的要求。表17 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物8.3送檢要求樣品和送檢單一同檢測(cè)能力的實(shí)驗(yàn)送檢單應(yīng)寫明檢品名稱、品系、等級(jí)、數(shù)量測(cè)項(xiàng)目等。9 結(jié)果判定9.1 抗體檢測(cè)血清樣品經(jīng)間接血凝實(shí)驗(yàn)（

Hemagglutination

Assay，IHA）、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（

Immunosorbent

Assay，）或間接免疫熒光（

Fluorescence

Assay，）檢測(cè)，血清抗體陰為合格。9.2 蟲體和蟲卵檢查經(jīng)檢測(cè)，未檢出蟲體、蟲卵，判為。9.3 病原體核酸

（Polymerase

Chain

）檢測(cè)經(jīng)檢測(cè)，未見陽(yáng)性結(jié)果判為合格。10 結(jié)論與報(bào)告10.1 結(jié)論按照檢測(cè)規(guī)則，檢測(cè)指標(biāo)均合格，依據(jù)表1表8，判為相應(yīng)等級(jí)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。按照檢測(cè)規(guī)則，若檢測(cè)指標(biāo)有1項(xiàng)（含）以上不合格，依據(jù)表1表8，判為不符合相應(yīng)等級(jí)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。10.2 報(bào)告根據(jù)出具檢測(cè)報(bào)告。12DB11/T

—A

A附

錄 A（規(guī)范性）實(shí)驗(yàn)雞的組織滴蟲檢測(cè)A.1 儀器設(shè)備和材料顯微鏡，PCR儀，凝膠電泳儀，成像儀，測(cè)序儀，載玻片，蓋玻片，生理鹽15%的甲醛固定液，，二甲苯，蘇木素，鹽酸，伊紅，中性樹脂，，姬姆薩染液，組提取試劑盒，DNA聚，，聚緩沖液，等。A.2 檢查A.

2.1

從精神狀態(tài)、行為、被天然孔分泌物對(duì)實(shí)驗(yàn)雞進(jìn)行外觀檢查。A.

2.2

剖檢和病理檢查剖檢實(shí)驗(yàn)雞，進(jìn)行病理學(xué)大體觀察。觀察肝臟是否腫大，表面是否有黃褐色壞死灶；觀察盲腸是否腫脹，腸腔內(nèi)是否有干酪樣A.

2.3

宜采用以下三種方法：——檢的實(shí)驗(yàn)雞盲腸，除去內(nèi)容物后取盲腸粘膜表面的刮取物于，滴加40℃理鹽水，顯微鏡下觀察是否有活動(dòng)的組織滴蟲蟲體存在。——肝組織涂片進(jìn)行姬氏染色，顯微鏡下觀察是否有組織滴蟲蟲體存在。——取剖檢的實(shí)驗(yàn)雞的和盲腸組織制作組織切片并進(jìn)行H.E.染色，顯微鏡下觀察是否有滴蟲蟲體存在。A．2.4

核酸檢測(cè)取剖檢的實(shí)驗(yàn)雞肝臟或盲腸組織樣品，提取組DNA，用針對(duì)火18SrRNA基因序列（GenBank:

HG008098.1）的特異性引物對(duì)（

GGCGAAAGCATCTATCAAGTGG

5'-CTCGTCGGCATAGTTTAAGGTAGG-3’）進(jìn)行PCR檢測(cè)，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳并測(cè)序分析。A.3 檢測(cè)若有火雞組織滴蟲感染，典型病理變化為肝臟腫呈深紫褐色，表面有大小不一的黃褐色灶，壞死灶中陷，有的壞死灶周圍血帶；盲腸外觀明顯腫大，觸之堅(jiān)硬，呈香腸狀，粗細(xì)不均，腸腔干酪樣物充塞，可懷疑為陽(yáng)性，需通過下列任意一種方法驗(yàn)證：——若有火雞組織滴蟲感染，盲腸粘膜刮取物或肝臟抹片在顯微鏡油鏡下可見單成簇分布的蟲體，大小為6

μm～20

μm?；蚪M織切片中發(fā)現(xiàn)蟲體，呈不圓形或橢圓形，胞質(zhì)囊泡狀核。蟲體呈圓形，淡玫瑰色細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，判為陽(yáng)性。反之則為陰——若有火雞組織滴蟲感染，擴(kuò)增的片段大小為

bp，所測(cè)得的序列應(yīng)為火雞組織滴蟲的18S

序列，判為陽(yáng)反之則為陰性。13DB11/T

—B附

錄 B（規(guī)范性）實(shí)驗(yàn)鵝的毛滴蟲檢測(cè)B.1 儀器設(shè)備和材料生物顯微鏡，生理鹽水，載玻片，蓋玻片。B.2 檢測(cè)步驟用生理鹽水浸濕的棉簽刮取實(shí)驗(yàn)鵝口腔或嗉囔粘液，置于載玻片上制成壓片，在400倍光學(xué)暗視野觀察。B.3 檢測(cè)在鏡下看到有呈圓形或梨狀可活動(dòng)的蟲體，前端有

4

根比蟲體長(zhǎng)

2～3

倍的鞭毛，且有活，結(jié)果為陽(yáng)性；反之為陰性。14DB11/T

—CB附

錄 C（規(guī)范性）實(shí)驗(yàn)鴿的瘧原蟲檢測(cè)C.1 儀器設(shè)備和材料生物，，，，姬氏染液。C.2 檢測(cè)步驟C.2.1 厚、取4

μL～5

μL鴿血，使血滴與平置的載玻片接觸，再由里向外一個(gè)方向旋轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)2～4圈，涂成直徑

cm～1

cm大小圓形厚血膜。在同一玻片的另一區(qū)域，取約1

μL～

μL的血量，使血滴與平置的載玻片接觸，并形成°～，待血液向兩側(cè)擴(kuò)展約2

cm～2.5

cm寬時(shí)，均勻而從右向左推成舌狀薄血膜。C.2.2 血膜涂片的染色和觀察用定血膜，然后用姬液30

隨后水洗2

min～3

。干燥后的染色涂片在顯微鏡下觀察。C.3 檢測(cè)在鏡下看到占據(jù)紅的細(xì)胞核以外空間的蟲體，后者依據(jù)其發(fā)育階段不同呈現(xiàn)不同的大形態(tài)，為陽(yáng)性；反之為陰性。D15DB11/T

—EC附

錄 D（規(guī)范性）實(shí)驗(yàn)魚的寄生蟲檢測(cè)D.1 體表寄生蟲的D.1.1 肉眼檢查D.1.1.1將待檢魚麻醉后放在盤上，檢查