分子生物學工作基礎考試試卷

2001年分子生物學工作基礎考試試卷回答下列問題1、解釋順式作用元件和反式作用因子；舉出兩種研究二者相互作用的實驗技術，并簡述其基本原理。（20分）2、試述DNA重組技術的基本步驟及相關酶類的具體作用。（20分）3、簡述基因治療中常用的基因轉移方法及其優(yōu)缺點；目前基因治療研究的主要問題與前景。（20分）4、美國NCBI目前通過Entrez提供哪八大生物信息方面的服務？蛋白質核酸生物信息預測分析的主要內容是什么？（20分）5、1）解釋genetargeting和transgene的概念。（5分）2）Kong等以（Gal）5-CAT為報告基因，分別與幾種真核基因表達載體共轉染，進行哺乳類two-hybrid和trihybrid實驗，測試CAT（氯霉素乙?；D移酶）活性結果如下：CAT（氯霉素乙酰基轉移酶）活性測定結果GAL4–MLP—GAL4–MLP+MyoD+GAL–MLP+MyoD+B47+GAL–MLP+MyoD+B47+MEF2—GAL–MLP+MyoD+B47及MEF2均為蛋白質名稱縮寫a）CAT報告基因上游有幾個Gal4結合位點？結合蛋白是什么？（3分）b）什么分子帶有DNA結合域（BD）？什么分子的DNA結合域（BD）？（3分）c）什么分子帶有轉錄激活域（AD）？（3分）d）什么分子最有可能與兩種以上的分子相互作用？（3分）e）實驗中作者構建的一種融合蛋白是什么？（3分）2002年分子生物學工作基礎考試試卷1、解釋下列名詞（20分）Contig,transgene,centimorgan,YAC,生物大分子2、簡述蛋白質組學，轉錄組學概念及提出的意義？（10分）3、簡述PCR的基本原理；舉兩例說明他在分子生物學中的應用？（20分）4、列舉4種研究轉錄因子與DNA相互作用的實驗技術，并簡述其工作原理？（20分）5、基因治療中基因的轉移方法及其優(yōu)缺點？（10分）；腫瘤基因治療的主要策略及其應用前景？（10分）6、某學者利用同源重組原理構建基因P的targetingconstruct（圖1），結合胚胎干細胞技術置換內源性P基因，對P基因突變小鼠靶基因用HindⅢ、SacⅠ酶解后進行Southernblot檢測（圖2）。請結合圖示回答下列問題。ＳＳＨＳＳＸＨＨＥ１Ｅ２圖１ＳＳＨＳＳＸＨＨＥ１圖２５probe＊5探針雜交neo探針雜交HindⅢSacⅠHindⅢSacⅠP/PP/P－P－/P－P/PP/P－P－/P－P/PP/P－P－/P－P/PP/P－P－/P－？kb————？kb————21kb——————P/P為純合突變小鼠，P/P－為雜合突變小鼠，P－/P－為野生型小鼠1)P基因5’端HindⅢ2）試推測Neo探針檢測結果提示可能發(fā)生了什么情況？為什么？（5分）2003年分子生物學工作基礎考試試卷回答下列問題1、某研究室利用同樣重組建立TIRAP基因缺陷鼠，構建targetingconstruct如圖左（上）所示；targetingsequence如圖左（中）；targeting后的突變基因如圖左（下）所示；圖右為采用560bp的3端片段做外探針對knockout小鼠子代基因組DNA進行Southern印跡的結果。neoneoTKR1R1R1R1neoR1neoR1R1R1———/—+/—+/+——6.6kb5.2kb請問：a）構建的targetingconstruct屬于置換型載體還是插入型載體？（4分）b）neo和TK基因各起何作用？（4分）c）解釋外探針，在左圖中表示出本實驗所用外探針序列的位置？（4分）d)在左圖中標示出Southern印跡實驗顯示的6.6kb和5.2kb序列的位置？（4分）e）如何設計引物進行PCR檢測targeting后的突變基因？（4分）2、如何獲得較大的基因組DNA片段（100-500kb）（5分）欲將其構建基因組DNA文庫，應考慮選擇何種載體，為什么？（5分）如何將其克隆之所選擇的載體？（5分）3、簡述PCR技術的基本原理，并舉兩例說明他在分子生物學中的應用？（15分）4、舉出三種能將PCR產物有效克隆到載體中的實驗方法，并簡述其原理？（15分）5、從已完成的人類基因組和小鼠基因組序列草圖來看，編碼蛋白質的核苷酸序列只占整個基因組核苷酸序列的一小部分（<5%）,請你設想一下，不編碼蛋白質的核苷酸序列在生物學上會有什么作用？（5分）6、高等動物如哺乳類的基因序列通常有內含子和外顯子組成，內含子和外顯子序列均在pre-mRNA的轉錄中體現(xiàn)出來，但成熟mRNA僅含有與外顯子相應的序列。從pre-mRNA到成熟mRNA有一個剪接（splicing）的過程，試問這一過程主要有哪些生物學意義？（5分）7、什么是染色質？染色質在遺傳信息的儲存和傳遞中有什么作用？（5分）8、什么是染色質重塑？染色質的重塑大致分哪些類型〉染色質重塑在基因轉錄的調控中起什么作用？（5分）9、基因轉錄大致分哪些步驟？同一基因在不同組織（細胞）中表達水平不同的可能原因是什么？（5分）10、Dr.Johnson’shascloned,fromhumanfibroblasts,afulllengthofcDNAthatencodesfora-15kDaprotein.ThisproteinapparentlycontainsaDim-1domain,whichisfoundinyeastproteinDim-1thatistheorthologueofhumanU5-15kDaprotein.Thus,Dr。JohnsonnamedthisproteinasDLP(forDim-1-likeprotein).HumanU5-15kDaproteinisoneofthesubunitsinaproteincomplexthatisbelievedtobeinvolvedinpre-mRNAsplicing.ThiscomplexalsocontainsotherproteinsubunitsincludinghnRNPF,prp6,HEF1,PQBP-1(alsoknownasNPW38)andAPC4,andadirectinteractionbetweenU5-15kDaandalloftheseproteinshasbeendemonstrated.YouareaskedbyDr.Johnsontodes