微生物的遺傳變異3

第六章微生物的遺傳變異與菌種選育

在應用微生物加工制造和發(fā)酵生產各種食品的過程中，要想有效地大幅度提高產品的產量、質量和花色品種,首先必須選育優(yōu)良的生產菌種，才能達到目的。而優(yōu)良菌種的選育是在微生物遺傳變異的基礎上進行的。遺傳和變異是相互關聯(lián)，同時又相互矛盾對立的兩個方面，在一定條件下，二者是相互轉化的。認識和掌握微生物遺傳變異的規(guī)律是搞好菌種選育和關鍵。本章主要內容微生物遺傳變異的基本原理?關于微生物遺傳變異的物質基礎及其存在形式。?關于微生物基因突變的基本原理（類型、特點和機制）。?關于微生物基因重組的基本原理（方式和特點）。微生物菌種的選育

?關于野生型微生物菌菌株分離、篩選與純化。

?關于微生物的誘變育種的工作程序和方法步驟。

?關于營養(yǎng)缺陷型突變菌株的篩選方法和具體應用。?原生質體融合育種技術的操作程序。

?基因工程育種技術的操作步驟和取得的成就。

?微生物菌種退化的原因；掌握菌種復壯的方法、防止菌種退化的措施以及菌種保藏的方式和原理。第一節(jié)微生物遺傳變異的物質基礎

證明核酸是遺傳變異物質基礎的經典實驗

肺炎雙球菌的轉化實驗噬菌體的感染實驗煙草花葉病毒的拆開與重組實驗

肺炎雙球菌的轉化實驗

注射R型活菌小鼠不發(fā)病（存活）

注射S型滅活菌小鼠不發(fā)?。ù婊睿┳⑸銼型活菌小鼠發(fā)病死亡注射R型活菌+S型死菌

小鼠發(fā)病死亡心血分離到S型活菌

⑴

動物試驗熱致死S型菌

培養(yǎng)皿培養(yǎng)

無菌落生長

R型活菌

培養(yǎng)皿培養(yǎng)培養(yǎng)出R型菌落

熱致死S型菌+R型活菌

培養(yǎng)皿培養(yǎng)培養(yǎng)出大量R型和S型菌落R型活菌+S菌抽取提物

培養(yǎng)皿培養(yǎng)培養(yǎng)出大量R型和S型菌落⑵

細菌培養(yǎng)試驗

噬菌體的感染實驗

1952年侯喜(A.Hershey)和蔡斯(M.Chase)利用示蹤元素，對大腸桿菌T2噬菌體進行了這類實驗。先用含有35S和32P兩種元素的培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌，然后讓T2噬菌體侵染培養(yǎng)后的大腸桿菌，從而使T2噬菌體打上35S和32P的標記。

讓這種T2噬菌體侵染不含標記元素的大腸桿菌，并在T2噬菌體完成了吸附和侵入后，

強烈攪拌洗滌，以便使吸附在菌體外表的T2噬菌體蛋白質外殼脫離細胞并均勻分布，再進行離心沉淀，分別測定沉淀物和上清液中的同位素標記。結果發(fā)現(xiàn)，幾乎全部35S都在上清液中，而幾乎全部32P和細菌一起出現(xiàn)在沉淀物中。

煙草花葉病毒的拆開與重組實驗

1956年，美國的法朗克-康勒特(Fraenkel-Conrat)將煙草花葉病毒拆成RNA(因該病毒不含DNA)和蛋白質，并分別對煙草進行感染實驗；結果發(fā)現(xiàn)只有RNA能感染煙草，并在感染后的寄主中分離到完整的具蛋白質外殼的煙草花葉病毒。

后來他又將甲、乙兩種變種的煙草花葉病毒拆開，在體外分別將甲病毒的RNA和乙病毒的蛋白質結合，將乙病毒的RNA和甲病毒的蛋白質結合進行重組。接著他把這些經過重組的病毒分別感染煙草。結果從寄主分離所得的病毒蛋白質均取決于相應病毒的RNA。證明了核酸(RNA)是煙草花葉病毒的遺傳物質基礎。二、遺傳物質在細胞中的存在方式

（一）細胞水平從細胞水平來看，細胞核；除此之外，在細胞質中存在著一些能自我復制的遺傳物質，一般稱這部分DNA為質粒。（二）亞細胞核水平真核微生物的細胞核有核膜包圍，形成具有完整形態(tài)、在光學顯微鏡下清晰可見的細胞核，核內DNA與組蛋白結合在一起構成染色體。（三）分子水平DNA（RNA）－－→在DNA大分子上存在著決定某些遺傳性狀的特定區(qū)段，即所謂基因－－→一個基因含若干核苷酸堿基組成的三聯(lián)密。四種核苷酸，按其排列組合方式的不同，可編出三聯(lián)密碼43＝64個，用于決定組成蛋白質的20種氨基酸順序。起始密碼（AUG）和終止密碼（UAA、UGA和UAG）。

第二節(jié)

微生物的基因突變一、基因突變的類型

基因突變的類型是多種多樣的，按突變體表型不同，可分為以下幾種類型：（1）形態(tài)突變型。

（2）條件致死突變型。

（3）營養(yǎng)缺陷突變型。

（4）抗性突變型。

（5）抗原突變型。

（6）其他突變型。二、基因突變的特點

整個生物界，由于它們遺傳變異的物質基礎是相同的，因此顯示在遺傳變異的本質上都具有相同的規(guī)律，這在基因突變的水平上尤其突出。

（1）不對應性。

（2）自發(fā)性。

（3）稀有性。（4）獨立性。（5）誘變性。（6）穩(wěn)定性。（7）可逆性。三、基因突變的機理（一）誘發(fā)突變及其機理1堿基對的置換

⑴直接引起置換的誘變劑（亞硝酸類、烷化劑類）

⑵間接引起置換的誘變劑（堿基類似物）2移碼突變

3染色體畸變

（二）自發(fā)突變的機制

1背景輻射和環(huán)境中多因素低劑量的誘變效應

2微生物自身代謝產物的誘變效應

3互變異構效應4環(huán)狀突出效應堿基對的置換堿基對的置換可分成兩個亞類：一類是DNA鏈上的一個嘌呤被另一個嘌呤或是一個嘧啶被另一個嘧啶所置換，稱為轉換；另一類是DNA鏈上的一個嘌呤被另一個嘧啶或是一個嘧啶被另一個嘌呤所置換，稱為顛換

A：TT：A

AT

C：GG：C

CG

雙鏈DNA

單鏈DNA

（實線代表轉換，虛線代表顛換）直接引起置換的誘變劑亞硝酸是一種對含有氨基的堿基對直接作用而誘發(fā)堿基對轉換的誘變劑。它能使堿基中的氨基氧化脫氨，從而使腺嘌呤（A）變成次黃膘呤（H），胞嘧啶（C）變成尿嘧啶（U），而后由于H和C配對，U與A配對，因此當DNA再次復制時，A:T就轉換為G:C，而G:C就轉換為A:T。

H:C

↗

H:C-→G:C

↗

H:C→G:C↗

A:T→H:T-----→A:T亞硝酸類引起的堿基對置換

O:A

T:A（顛換）

O:C

G:C（復原）

G:CRG:CO:C

O:T

A:T（轉換）

O:G

C:G（顛換）烷化劑是誘變育種極其重要的一類誘變劑，它們的化學結構都帶有一個或多個活性烷基。所有這些物質通過烷化磷酸基形成烷化嘌呤和烷化嘧啶與DNA作用，特別是經常形成烷化鳥嘌呤。烷化作用導致基因突變的機制尚未定論。①堿基類似物作用，引起堿基配對的錯誤。②烷基在鳥嘌呤引起脫嘌呤作用，使鳥嘌呤從DNA鏈上脫落下來，進而引起DNA復制時堿基對的缺失和置換。。間接引起置換的誘變劑

A:BU/G:BrU

↗

G:BrU

--→G:C

5-BU↗A:T-－→A:BU------→A:T(a)

G:BrU/A:BU

↗

A:BU----→A:T

5-BrU↗G:C----→G:BrU------→G:C(b)

5-溴尿嘧啶的誘變效應

a.5-BU以酮式摻入；

b.5-BrU以烯醇式摻入

5-氨基尿嘧啶（5-AU）、8-氮鳥嘌呤（8-NG）、α-氨基嘌呤（α-AP）及6-氮嘌呤（6-NP）等。它們的作用是通過活細胞的代謝活動摻入到DNA分子中后，引起堿基對的置換，因此是間接的。在這些堿基類似物中，最常被應用的是5-溴尿嘧啶（5-BrU）和α-氨基嘌呤（α-AP）。5-BrU是T的代謝類似物。5-BrU以酮式狀態(tài)時可以替代T，與A配對；5-BrU以烯醇式狀態(tài)時替代C與G配對；5－BrU可以通過烯醇式和酮式結構的變化；引起堿基對置換。移碼突變移碼突變這是指由一種誘變劑而引起DNA分子中的一個或少數(shù)幾個堿基插入或缺失，從而使該部位后面全部遺傳密碼發(fā)生轉錄錯誤的一類突變。吖啶類染料及其化合物是移碼突變的有效誘變劑，例如三氨基吖啶，吖啶黃，吖啶橙，5-氨基吖啶。

吖啶類化合物的誘變機制目前還不很清楚?，F(xiàn)普遍認為，由于吖啶類化合物是一種平面型三環(huán)分子結構，與一個嘌呤:嘧啶堿基對相似，因此能夠嵌入兩個相鄰的DNA堿基對之間，造成雙螺旋的部分解開，從而在DNA復制過程中，會使鏈上插入或缺失一個堿基，結果引起移碼突變。染色體畸變染色體畸變是指由誘變劑引起DNA分子的大損傷，它包括染色體結構上的缺失、重復、易位及倒位等。紫外線、X射線、γ射線等射線及亞硝酸、烷化劑等均能引起染色體畸變，尤其是紫外線能引起DNA分子多處較大的損傷。紫外線主要通過在同鏈DNA相鄰的嘧啶間或在互補雙鏈間形成以共價鍵結合的胸腺嘧啶二聚體，微生物能以多種方式去修復被紫外線損作后的DNA，主要方式有兩種：

（1）光復活作用。

由于微生物中一般都存在著光復合作用，因此，用紫外線照射菌液時都須在紅光下進行操作處理微生物，而后在暗室或用黑布包起來培養(yǎng)。

（2）暗修復作用。也稱切除修復作用。X射線和

射線為電離輻射，含有很高的能量，能產生電離作用，因而能直接或間接地改變DNA結構。直接的效應是堿基的化學鍵，脫氧核糖的化學鍵和糖—酸相連接的化學鍵斷裂；

第三節(jié)微生物的基因重組

基因重組又稱為遺傳重組，它是指把兩個不同性狀個體內的遺傳基因轉移到一起，經過遺傳分子的重新組合后，形成新遺傳型個體的過程。

重組是分子水平上的概念，可以理解成是遺傳物質分子水平上的雜交，而一般所說的雜交是細胞水平上的概念。雜交中必然包含著重組，而重組則不限于雜交一種形式。真核微生物中的有性雜交，準性生殖以及原核微生物中的轉化、轉導、接合和溶原轉變等都是基因重組在細胞水平上的反映。一、原核微生物的基因重組（一）轉化（transtormation）

受體菌直接吸收來自供體菌的DNA片段，通過交換組合把它整合到自己的基因組中，從而獲得了供體菌的部分遺傳性狀的現(xiàn)象，稱為轉化。轉化后的受體菌，稱為轉化子。供體菌的DNA片段稱為轉化因子。

只有處于感受態(tài)的細菌才能接受轉化因子，進行轉化作用。

轉化過程大致是這樣的：①

從供體菌提取出轉化因子雙鏈DNA片段；②

雙鏈DNA片段與感受態(tài)受體菌的細胞表面特定位點結合；③

在結合位點上，雙鏈DNA中的一條單鏈逐步降解，同時另一條鏈逐步進入受體細胞。④進入受體細胞的DNA單鏈與受體菌染色體組上同源區(qū)段配對，而受體菌染色體組的相應單鏈片段被切除，并被進入受體細胞的DNA單鏈所取代，于是形成了雜種DNA區(qū)段；⑤受體菌染色體進行復制，其中雜種區(qū)段被分離成兩個，一個恢復，一個形成一個轉化子。

一、原核微生物的基因重組（二）轉導（transduction

）

通過缺陷型噬菌體或溫和型噬菌體為媒介，將供體細菌細胞中DNA片段攜帶到受體細菌細胞中，從而使受體細菌獲得供體細菌的某些遺傳性狀的現(xiàn)象，稱為轉導。

根據(jù)媒介噬菌體的不同，轉導分普遍性轉導和局限性轉導兩類。

1．普遍性轉導由缺陷型噬菌體誤包（而非整合）供體細菌DNA中的任何一部分片段（包括核外遺傳物質在內）后，當它再次感染受體細菌時，使后者獲得了這部分遺傳性狀的現(xiàn)象，稱為普遍性轉導。它的轉導頻率為105～108。

2．局限性轉導由溫和噬菌體侵染而形成的某一溶源細菌群被誘導裂解時，其中極少數(shù)個體的DNA可能與噬菌體DNA發(fā)生若干特定基因的交換，從而被整合到噬菌體的基因組上，當該噬菌體再次感染受體細菌時，就使受體細菌獲得了這一特定遺傳性狀的現(xiàn)象，稱為局限性轉導，它的轉導頻率為10-6。一、原核微生物的基因重組（三）接合（conjugation

）

通過供體細菌和受體細菌完整細胞間的直接接觸而傳遞大段DNA的過程，稱為接合（有時也稱雜交）。

在細菌中，接合現(xiàn)象研究最清楚的是大腸桿菌。發(fā)現(xiàn)能夠進行接合現(xiàn)象的大腸桿菌有雄性與雌性之分，而決定它們性別的是由是否存在F因子所決定。

F因子又稱致育因子，是一種質粒，分子量為5×107

道爾頓；

雌性細菌不含F(xiàn)因子，稱為F

-

菌株，

雄性細菌含有游離存在的F因子，稱為F

+

菌株，當雄性細菌細胞中所含的F因子被整合在細胞核的DNA上，不呈游離狀態(tài)存在稱為Hfr菌株（高頻重組菌株）；

有時被整合在細胞核DNA上的F因子，從DNA上面脫落下來，呈游離存在，但在脫落時，F(xiàn)因子有時能帶一小段細胞核DNA。我們將這種含有游離存在的但又帶有一小段細胞核DNA的F因子的細菌稱為F′菌株。

接合的基本過程滾環(huán)復制模型接合的結果：

F++F-2F+

F′+F-2F′Hfr+F-多種情況

Hfr+F-Hfr＋F-（多數(shù)情況下）

Hfr+F-Hfr＋Hfr（少數(shù)情況下）

一、原核微生物的基因重組（四）溶源性轉變宿主菌在感染溫和噬菌體后，由于噬菌體DNA整合到核DNA后，導致宿主菌某些新的遺傳性狀表達，即所謂溶源性轉變。這是一種與轉導相似但又有本質不同的現(xiàn)象。溶源轉變與轉導在本質上的不同，首先是它的溫和噬菌體不攜帶有任何供體菌的基因，其次這種噬菌體是正常的完整的，而不是異常情況下產生的缺陷型噬菌體。

溶源轉變的典型例子是不產毒素的白喉棒狀桿菌（Lorynebatceriumdiphthariac）菌株被噬菌體侵染而發(fā)生溶源化時，會變成產毒素的致病菌株。其他如沙門氏菌、紅霉菌、鏈霉菌等也具有溶源轉變的能力。二、真核微生物的基因重組（一）有性雜交

在微生物的有性繁殖過程中，不同的性細胞間的接合，并隨之發(fā)生染色體的重組，從而產生新遺傳型后代的現(xiàn)象，稱有性雜交。凡是能產生有性孢子的酵母菌和霉菌，都能進行有性雜交。

有性雜交在生產實踐中被廣泛用于優(yōu)良品種的培育。例如用于酒精發(fā)酵的酵母菌和用于面包發(fā)酵的酵母菌同屬一種啤酒酵母（Saccharomycescerevisiae）的兩個不同菌株，面包酵母的特點是對麥芽糖及葡萄糖的發(fā)酵力強，產生CO2多，生長快；而酒精酵母的特點是產酒率高而對麥芽糖、葡萄糖的發(fā)酵力弱，所以釀酒廠生產酒精后的酵母，不能供面包廠作引子用。通過兩者的雜交，就得到了既能生產酒精，又能將其殘余菌體用作面包廠和家用發(fā)面酵母的優(yōu)良菌種。二、真核微生物的基因重組（二）準性生殖

準性生殖是一種類似于有性生殖但比它更為原始的一種生殖方式。是由兩個非異配型核的細胞接合后，形成異核體細胞，兩核能發(fā)生低頻率的接合與交換，產生具有新性狀的個體。其主要過程包括以下基本過程：1．菌絲聯(lián)結發(fā)生在一些形態(tài)上沒有區(qū)別的，但在遺傳性狀上可以有差別的兩個同種親本的體細胞（單倍體）間。2．形成異核體兩個單倍體細胞經聯(lián)結后，使原有的兩個單倍體核集中到同一個細胞中，形成雙相的異核體。異核體能夠獨立生活。3．核融合在異核體中的雙核融合，產生雙倍體雜合子核。核融合后產生雜合子核的頻率也是極低的，如構巢曲霉和米曲霉為10-5～10-7。4．體細胞重組和單倍體化雙倍體的雜合子極不穩(wěn)定，在進行有絲分裂過程中，極少數(shù)核中的染色體會發(fā)生染色體交換和單倍體化，從而形成了極個別的具有新遺傳性狀的單倍體雜合子。第四節(jié)微生物花的菌種脊選育在微生物軟工業(yè)應用球中，微包生物菌種銳工作主要粉包括以下暈四方面：①菌熱種的分抖離篩選模：挑選灣符合生押產要求塔的菌種住，這是報選種工扛作的任析務。②菌種球培育：旦改良已有咳菌種的生羞產性能，動使產品的逃質和量不憐斷提高，殲或使它更性適應于工居藝的要求機，這是育怨種工作的鍋任務。③菌種榴的保藏：食一切生半產菌種都倡要使它避失免死亡和羊生產性能粗的下降，映這是菌種抓保藏工作釣的任務。④退化小菌種的復貸壯：如叢果發(fā)現(xiàn)菌送種的生產宣性能下降該，就要設醋法使它恢頃復，這便剩是菌種復悠壯工作的較任務。一、從自跡然界中分騙離篩選菌般種的方法史步驟采樣

增殖培養(yǎng)

純種分離純培養(yǎng)生產性能測定方法、地點、時間和周圍環(huán)境記錄純種分離的原則就是使培養(yǎng)物獲得單個菌落：1．稀釋分離法2．平板劃線分離法

⑴

涂菌：

⑵

劃線分離：①分步劃線法；②一次劃線法：

3．組織分離法

測定代謝產物或其它目的性狀（一）誘碼變育種的癥一般步驟他和方法出發(fā)菌脊株同步培興養(yǎng)使菌細嘆胞處于拾相同或繪接近的擴生理狀跑態(tài)單細胞裹（或單療孢子）湯菌懸液警的制備單細胞或技單孢子的流意義酵母或霉蕉菌孢子1瓣06/ml、細菌改108/ml誘變劑的法選擇及其速劑量的確圓定以致死率睜為90％～99％為宜誘變處裝理①物間理誘變默劑奏②頑化學誘暫變劑確定出發(fā)控菌株↓菌種的純滔化選優(yōu)↓←出窗發(fā)菌株某的性能秒鑒定同步培養(yǎng)↓制備單蝴細胞（齒或單孢扣子）懸辛液↓←活菌賴濃度測定誘變劑的痕選擇與確擋定誘變劑踐量的預試網(wǎng)驗↓誘變處臺理↓平板分繭離↓計形榨態(tài)變異盯的菌落較數(shù)，計旦算突變康率挑取疑似追突變菌落帆純培養(yǎng)↓突變體的什初步篩選↓←用素簡單快搭捷的方襖法重復篩選↓←搖稍瓶發(fā)酵鍛試驗選出突綠變體（代根據(jù)情壤況進行堡生產試霉驗或重瞞復誘變色處理）二、微堂生物的乎誘變育砍種二、微生壁物的誘變枝育種（二）變泥異菌株的道初步篩選紙片培館養(yǎng)顯色略法透明圈東法瓊脂塊健培養(yǎng)法1篩選伙用培養(yǎng)基⑴基怎本培養(yǎng)璃基：凡禽是能滿軟足某種傾野生型遣菌株營冠養(yǎng)要求譜的最低協(xié)成分的司合成培分養(yǎng)基，污稱為基瀉本培養(yǎng)糕基；常煌以‘[-]’表示忙；⑵在搖基本培錫養(yǎng)基中勇加入一點些富含筋氨基酸傷、維生集素及含尼氮堿基戰(zhàn)之類的茄天然有朋機物質跟如蛋白撿胨、酵穿母膏等河，以滿鍋足該微錦生物的翠各種營薪養(yǎng)缺陷嶼型菌株淺都能生麻長繁殖推的培養(yǎng)屋基，稱準為完全挎培養(yǎng)基嘆，常用織‘[+]’表示；⑶在度基本培杯養(yǎng)基中購只是有籮針對性繪地加入妙某一種蓮或某幾甚種營養(yǎng)行缺陷成肌分，以盼滿足相缺應的營講養(yǎng)缺陷置型生長鼓的培養(yǎng)姐基，稱罩為補充數(shù)培養(yǎng)基森，補充猴培養(yǎng)基搶可按所鹿加入營據(jù)養(yǎng)成分仇相應地圾用‘[A]’、‘[B]’等來表珍示。（三）營壯養(yǎng)缺陷型農突變體的確篩選及其胡應用二、微生芝物的誘變越育種2．營養(yǎng)缺呈陷型菌株禁篩選的一窗般方法（1）誘變減劑處理（2）淘汰野汽生型菌株①抗灰生素法②菌絲曬過濾法（3）檢出營費養(yǎng)缺陷舟型（4）鑒定寺營養(yǎng)缺挺陷型檢出營養(yǎng)椅缺陷型①夾層培養(yǎng)法

②限量補充培養(yǎng)法

③影印接種法

④

逐個檢出法

鑒定營養(yǎng)打缺陷型①含衛(wèi)營養(yǎng)缺忘陷型菌臘株的基路本培養(yǎng)壤基平板鐵的制備區(qū)。②營養(yǎng)胃缺陷型營憶養(yǎng)類別的盲鑒定。③缺睡陷型菌兄株單一記營養(yǎng)因畢素的鑒背定。20種氨基千酸的排忙列編組第一組第二組第三組第四組第五組第六組第七組第八組第九組丙氨酸谷氨酸亮氨酸絲氨酸精氨酸谷氨酰氨賴氨酸蘇氨酸天冬酰氨甘氨酸蛋氨酸色氨酸天冬氨酸組氨酸苯丙氨酸酪氨酸半胱氨酸異亮氨酸脯氨酸

纈氨酸原生質倍體融合傍育種細胞（A+B—）細胞（A—B+）脫壁處涌理脫壁處噴理原生質奏體（A+B—）原生質萍體（A—B+）混合加融合劑原生質體慮融合涂平板欲（原生譯質體再油生）形成菌遭落檢出重組肌子菌落（A+B+）轉基因核工程菌那株的構他建1．提取逆目的基監(jiān)因蠅用密度士梯度離頂心方法靈分別從亞供體細窮胞中提圍取所需絞要的DNA即目的基秩因和作為鐮載體的細嘩菌質粒或迅噬菌體核散酸，目的燈基因也可撫通過化學某方法人工備合成。2．處理目懂的基因棄根據(jù)基票因工程的掉“設計藍栽圖”的要船求，在從甲供體細胞泳中提取出拖的目的基箱因中加入階專一性很附強的限制漆性核酸內扮切酶進行蛛處理，從丑而獲得帶蹲有特定基翅因并暴露尤出粘性末吊端的DNA單鏈部患分。必梁要時這蕩種粘性逝末端也宴可用人就工方法粗合成。對作為液載體的漸細菌質醒?；蚴煽劬wDNA可采用與時處理目的夫基因同一字種類的限陳制性核酸錢內切酶進嘩行處理，蒼使其形成秧并暴露出挑與目的基周因相應的款粘性末端嫌。3．體外重幣組將堤上述分別侍處理過的勇目的基因赴和細菌質知粒DNA片段（或匙噬菌體核竹酸）放在腫試管中，月在較低溫烘度（5～6℃）下界混合“迫退火”寺。由于阻這兩種DNA是用同鈴一種限晉制性核慢酸內切饅酶進行索處理，吩具有相離同的粘己性末端耗，因此級相互之汁間能夠偉形成氫旱鍵，這丘就是所蠢謂“退?；稹?。妻而相鄰垃的核苷鎖酸，在DNA連接酶的高作用下也逗能形成磷凱酸二酯鍵擾，這樣就李完成了目腸的基因與舒質粒DNA（或噬菌體DNA）的重組，債得到的是舍一個完整圖的具有復默制能力的攤環(huán)狀DNA重組體屋，即“岡雜種質監(jiān)?！保⊕呋螂s種竿噬菌體鞏）。4．載體恭傳遞貨即通歲過載體悠將供體唐生物中扒的遺傳壟基因導塔入到受緣瑞體細胞羅內。載拿體必須屑具有自病我復制座的能力扛，一般忽可利用登質粒的擋轉化作節(jié)用或噬拐菌體的卵轉導作鍬用，將倉供體基脈因帶入籍受體細貌胞內。5．復制順、表達殿在沾理想情豪況下，莖進入受芬體細胞扁內的雜頌種質粒久