第十七章-螺旋體推選優(yōu)秀ppt

第十七章螺旋體第一頁，共54頁。第一節(jié)鉤端螺旋體

是人畜共患病，鼠類和豬是儲存宿主。在腎中存在，隨尿排出，污染水和土壤，人類接觸污染疫水。穿透皮膚粘膜侵入，并引起血癥，產(chǎn)生如內(nèi)毒素等物質(zhì)，引起鉤端螺旋體病，出現(xiàn)發(fā)熱、頭痛肌痛、眼結(jié)膜充血等中毒癥狀，患者有全身毛細血管損傷和微循環(huán)障礙，并引起肝腎功能損害。由于血清型、毒力數(shù)量不同以及免疫水平差異，有①流感傷寒型；②黃疽出血型；③肺出血型；④腦膜腦炎(nǎoyán)型；⑤腎功能衰竭型；⑥胃腸炎型等類型。第二頁，共54頁。應(yīng)用顯微鏡凝集試驗和凝集素吸收試驗，可進行(jìnxíng)血清群和型的分類。問號狀鉤端螺旋體可分為25個血清群、273個血清型，其中我國至少存在19個血清群、74個血清型。我國目前使用的問號鉤端螺旋體參考株有14群15型。第三頁，共54頁。玻片后作暗視野檢查。在液體培養(yǎng)基中，分裂一次需8～lOh，培養(yǎng)一周左右，呈現(xiàn)(chéngxiàn)為半透明云霧狀生長，但菌數(shù)僅相當于普通細菌的1／10—1／100。標記的特異DNA探針法，檢出標本中鉤第四十九頁，共54頁。傳梅毒的陽性率為80％-100％。第四十一頁，共54頁。分離(fēnlí)培養(yǎng)FTA-ABS-DS法無論對早期梅毒或晚期梅毒都有很高的敏感性和特異性，且陽性出現(xiàn)時間早。一期梅毒陽性率達90％，晚期梅毒的陽性率為95％。精品(jīnɡpǐn)課件！人被虱叮咬(dīnɡyǎo)后，因抓癢將虱糞壓碎，經(jīng)皮膚創(chuàng)傷進入人體。第四十七頁，共54頁。生長慢，1代需18h，需培養(yǎng)1～3初期梅毒，取下疳分泌物；微生物特性(tèxìng)因數(shù)量太少，故在實驗室診斷中價值不大。微生物特性(tèxìng)

螺旋細密(xìmì)和規(guī)則，一端彎曲使菌體呈問號狀故名鉤端螺旋體。G-，但不易著色。常用Fontana鍍銀染色法，被染成棕褐色。暗視野顯微鏡下可見活潑運動、折光性強而成白色的鉤端螺旋體。內(nèi)鞭毛緊緊纏繞在原生質(zhì)圓柱體表面呈螺旋狀，使鉤端螺旋體活潑地沿長軸旋轉(zhuǎn)運動。第四頁，共54頁。培養(yǎng)(péiyǎng)特性

營養(yǎng)要求較高，常用含10％兔血清的Korthof培養(yǎng)基，兔血清除促進鉤端螺旋體生長外，尚有中和代謝產(chǎn)物毒性的作用。最適生長溫度為28℃～30℃，最適pH為7．2～7．6，人工培養(yǎng)基中生長緩慢。在液體培養(yǎng)基中，分裂一次需8～lOh，培養(yǎng)一周左右，呈現(xiàn)(chéngxiàn)為半透明云霧狀生長，但菌數(shù)僅相當于普通細菌的1／10—1／100。第五頁，共54頁。抵抗力

對熱抵抗力弱，60℃、1min即死亡。0．2％來蘇、l：2000升汞、1％石炭酸經(jīng)10～30min被殺滅。對青霉素敏感。鉤端螺旋體在夏秋季酸鹼度中性的濕土或水中可存活20天以上，甚至數(shù)月之久，這在本菌的傳播上有重要(zhòngyào)意義。第六頁，共54頁。標本(biāoběn)采集鉤端螺旋體可從臨床標本、攜帶者和自然界的水中分離獲得。標本采集(cǎijí)包括血液、尿和腦脊液，發(fā)病早期(1周內(nèi))血液的陽性率高，1周后尿和腦脊液等的陽性率高。感染6～10天取血可檢出抗體，在病程第3或4周達最高水平，此后抗體水平逐漸下降，血清學診斷則需在病程早期及恢復期分別采集(cǎijí)血清，作雙份血清試驗。第七頁，共54頁。標本(biāoběn)直接檢查

1．取急性期病人(bìngrén)血以4000r／min離心45—60min，取1滴沉淀物置玻片上，加蓋玻片后作暗視野檢查。也可用Fontana鍍銀染色法染色后觀察。第八頁，共54頁。2．核酸檢測采用同位素或生物素、地高辛標記的特異DNA探針法，檢出標本中鉤端螺旋體的核酸，較培養(yǎng)法快速(kuàisù)、敏感。若先用PCB技術(shù)先行擴增，再用探針確定，則敏感度更加提高。第九頁，共54頁。分離(fēnlí)培養(yǎng)

取鉤端螺旋體血癥期的病人血液2ml或發(fā)病后第2周的無菌弱堿性尿沉渣接種于Korthof培養(yǎng)基中，28℃孵育，因系需氧生長，故靠近(kàojìn)培養(yǎng)液面呈半透明霧狀混濁。取培養(yǎng)物作暗視野檢查，觀察有無螺旋體生長。連續(xù)觀察30d，如無生長方判為陰性第十頁，共54頁。抗體(kàngtǐ)檢測顯微鏡下凝集試驗是常用的方法。(1)抗原制備：取標準菌株4—7天的培養(yǎng)(péiyǎng)物，每視野50～60條活鉤端螺旋體。第十一頁，共54頁。(2)方法與結(jié)果：取病人血清以56℃，30min滅活后稀釋，每個稀釋度0．1ml血清中加入等量活菌抗原，30℃2h后，取1滴覆蓋玻片，暗視野顯微鏡下若有抗體存在，則鉤體凝集成團，數(shù)減少，菌體溶解。結(jié)果判定：50％以上菌體凝集或溶解為“2+”為血清效價。達1：300以上才有診斷意義或效價增高(zēnggāo)4倍以上，則可確診本病。第十二頁，共54頁。酶聯(lián)免疫吸附試驗(shìyàn)用ELISA法和IgM斑點-ELISA法等間接檢測鉤體病人血清中特異性抗體，用于該病的快速診斷。包被抗原用鉤端螺旋體培養(yǎng)(péiyǎng)物經(jīng)超聲波破碎，15000r／min離心20min，用于包被的抗原濃度以20μg／ml為好。被檢血清OD值為陰性對照的2倍，即為陽性。第十三頁，共54頁。動物(dòngwù)試驗動物是分離鉤端螺旋體的敏感方法，尤其適用于有雜菌污染的標本。方法是將標本接種于幼齡豚鼠或金地鼠腹腔(fùqiāng)。接種3～5d后，可用暗視野顯微鏡檢查腹腔(fùqiāng)液；亦可在接種后3～6d取心血檢查并作分離培養(yǎng)。動物死后解剖，可見皮下、肺部等有大小不等的出血斑，肝、脾臟器中有大量鉤端螺旋體存在。第十四頁，共54頁。第二節(jié)疏螺旋體屬

有3～10個稀疏而不規(guī)則的螺旋，運動活潑(huópo)。對人致病的主要有伯氏疏螺旋體、回歸熱螺旋體、奮森螺旋體等。第十五頁，共54頁。一、伯氏(bóshì)疏螺旋體是萊姆病的主要病原體，1977年在萊姆鎮(zhèn)發(fā)現(xiàn)，從硬蜱及患者體內(nèi)分離(fēnlí)出伯氏疏螺旋休。1985年我國在黑龍江省林區(qū)首次發(fā)現(xiàn)萊姆病，1988年從病人血液中分離(fēnlí)出病原體，迄今已有十多個省和自治區(qū)證實有萊姆病存在。第十六頁，共54頁。傳播媒介是硬蜱，伯氏疏螺旋體可在蜱的中腸生繁殖，叮咬時使宿主感染。經(jīng)3～30d潛伏期，在叮咬部位可出現(xiàn)慢性移行性紅斑。經(jīng)2-3周，皮損消退，留有斑痕與色素沉著。早期癥狀有頭痛發(fā)熱、肌痛等。80％未經(jīng)治療(zhìliáo)的可發(fā)展至慢性關(guān)節(jié)炎、慢性神經(jīng)系統(tǒng)異常，嚴重者可同時出現(xiàn)皮膚、神經(jīng)、關(guān)節(jié)、心等多臟器損害。第十七頁，共54頁。微生物特性(tèxìng)

1．疏螺旋體，兩端稍尖。運動活潑，在培養(yǎng)基中，不規(guī)則地纏繞一起，呈卷圈狀。周漿鞭毛數(shù)不等。與運動有關(guān)。Ｇ-易著色。Giemsa或Wright染色均佳。2．抗原成分主要(zhǔyào)的有鞭毛蛋白(40kＤ)、外膜蛋白A(OspA)、B(OspB)和C(OspC)，60kD抗原。40kD鞭毛蛋白既是免疫原，也是致病原之一。第十八頁，共54頁。3.營養(yǎng)要求(yāoqiú)高，培養(yǎng)基需含有長鏈飽和與不飽和脂肪酸、葡萄糖、氨基酸和q清蛋白等。微需氧，5％—10％C02促進生長。適宜溫度為35℃。生長慢，1代需18h，需培養(yǎng)1～3周觀察到生長情況。第十九頁，共54頁。微生物檢驗(jiǎnyàn)

1．標本采集早期取病損皮膚組織、淋巴結(jié)抽出液、血液。2.直接(zhíjiē)用暗視野顯微鏡，觀察關(guān)節(jié)滑膜液、腦脊液、尿液等標本中螺旋體的形態(tài)和運動，因數(shù)量太少，故在實驗室診斷中價值不大。用于蜱內(nèi)臟組織檢查,檢出率較高。第二十頁，共54頁。3.核酸(hésuān)檢測用PCR技術(shù)檢查DNA，方法快速、敏感性高，用已知引物，以標本中螺旋體質(zhì)粒DNA片段為模板，擴增后形成309bp的DNA分子(是編碼OspA的基因(jīyīn)片段)，經(jīng)瓊脂糖電泳證實。此DNA分子在所有伯氏疏螺旋體菌株中均可被檢出，而其他菌種則為陰性。第二十一頁，共54頁。4.分離(fēnlí)培養(yǎng)標本接種在BSK復合(fùhé)培養(yǎng)基中，33℃孵育。BSK培養(yǎng)基是含有牛血清白蛋白(BSA)和熱滅活兔血清等營養(yǎng)豐富的液體培養(yǎng)基，通常從感染的脾中分離螺旋體較易，而從損傷皮膚中分離較難。因分裂1代需12h以上，需培養(yǎng)2-3周可觀察生長情況。第二十二頁，共54頁。5.抗體(kàngtǐ)檢測間接免疫熒光法(IFA)：將螺旋體在BSK中培養(yǎng)5-7天，離心8200rpm30min收集螺旋體，稀釋至200個螺旋體／高倍鏡視野。取20μl懸液于玻片上，干燥后用丙酮固定5min。待檢血清(xuèqīng)以PBS倍比稀釋，加于玻片10～15μl稀釋血清(xuèqīng)，濕盒內(nèi)37℃孵育30min，洗后加熒光素標記抗人IgG。IFA操作簡便實用，但類風濕性關(guān)節(jié)炎和其他螺旋體病可出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。第二十三頁，共54頁。6.動物(dòngwù)試驗常用(chánɡyònɡ)的實驗動物有小白鼠，金地鼠和兔等。以螺旋體懸液感染，可出現(xiàn)與人類相似的皮損癥狀，血培養(yǎng)亦陽性，抗體效價顯著升高，可作為良好的動物模型，常用(chánɡyònɡ)新西蘭白兔。動物試驗雖是一種經(jīng)典的方法，但較繁瑣，有生物危害。第二十四頁，共54頁。二、回歸熱疏螺旋體是引起人類回歸熱的病原體。根據(jù)回歸熱傳播媒介不同，分為(fēnwéi)兩類:一為虱傳回歸熱，或稱流行性回歸熱，其病原體為回歸熱疏螺旋體。另一為蜱傳回歸熱熱，又稱地方性回歸熱。我國流行的回歸熱主要是虱傳型。第二十五頁，共54頁。流行性回歸熱主要通過人體虱在人類中傳播。當虱吸吮病人血液后，螺旋體從中腸進入血淋巴大量繁殖，不進入唾液或卵巢。人被虱叮咬(dīnɡyǎo)后，因抓癢將虱糞壓碎，經(jīng)皮膚創(chuàng)傷進入人體。第二十六頁，共54頁。侵入人體后，先在內(nèi)臟繁殖，經(jīng)一周左右的潛伏期，大量流入血液，引起菌血癥型發(fā)熱、肝、脾腫大，出現(xiàn)黃疽；持續(xù)一周左右，驟然(zhòurán)退熱，血中螺旋體消失，隔一周或數(shù)日又發(fā)熱，血中出現(xiàn)螺旋體。如此反復發(fā)作與緩解可達3～10次，故稱回歸熱第二十七頁，共54頁。取發(fā)熱(fārè)期外周血1滴，加蓋玻片用暗視野顯微鏡觀察，螺旋體運動活潑；為紅細胞直徑的2-4倍，螺旋稀疏不規(guī)則，呈波狀。如發(fā)熱(fārè)期未能查到螺旋體，取抗凝血0．1ml接種乳鼠腹腔，每日取尾靜脈血鏡檢，1～3天可查到大量疏螺旋體?？乖鬃园l(fā)變異，使其血清學診斷十分困難。第二十八頁，共54頁。三、奮森疏螺旋體

有3—8個不規(guī)則疏螺旋，形態(tài)與回歸熱螺旋體類似。G-，運動活潑。專性厭氧，常與梭桿菌寄生于牙齦部。一般不致病，只有當人體抵抗力顯著降低時，兩種菌繁殖，協(xié)同引起奮森咽峽炎、牙齦炎、口頰壞疽、潰瘍性口腔炎等。用棉拭子從病灶處取材，涂片染色鏡檢，可見(kějiàn)G-螺旋體與G-梭桿菌共存。第二十九頁，共54頁。第四節(jié)密螺旋體屬螺旋細密、規(guī)則兩端尖，數(shù)目多；包括(bāokuò)致病性和非致病性兩大類。致病密螺旋體有蒼白和品他密螺旋體兩個種。第三十頁，共54頁。蒼白密螺旋體又分3個亞種：蒼白亞種、地方亞種和極細亞種，它們分別引起梅毒、是性傳播疾病。地方性梅毒通過污染餐具傳染，雅司病經(jīng)直接接觸(jiēchù)患者皮膚受損部位而傳染，二者的臨床癥狀與梅毒相似，但不是性傳播疾病。品他密螺旋體引起人類品他病。第三十一頁，共54頁。一、梅毒(méidú)螺旋體引起梅毒。人是惟一傳染源。先天性梅毒通過胎盤由母體傳染胎兒(tāiér)，獲得性梅毒經(jīng)性接觸傳播。也可經(jīng)輸血引起。獲得性梅毒，臨床上分為三期：Ⅰ期無痛性硬下疳。多見于外生殖器；Ⅱ期梅毒疹，全身淋巴結(jié)腫大；Ⅲ期損害全身組織和器官。第三十二頁，共54頁。先天性梅毒，又稱胎傳梅毒。引起胎兒全身性感染(gǎnrǎn)，導致流產(chǎn)或死胎；或出生呈現(xiàn)馬鞍鼻、先天性耳聾等特殊體征。第三十三頁，共54頁。微生物特性(tèxìng)

1．形態(tài)與染色有8～14個致密規(guī)則小螺旋，兩端尖直運動活潑，G-，但不易(bùyì)著染。Fontana鍍銀染成棕褐色。在光鏡下易于查見。在暗視野顯微鏡下，可觀察標本形態(tài)和運動方式。第三十四頁，共54頁。2.電鏡下觀察，有細胞壁和細胞膜。細胞壁外有包膜，細胞膜內(nèi)為含細胞質(zhì)和核質(zhì)的螺旋形原生質(zhì)圓柱體。繞著3—4根周漿鞭毛或內(nèi)鞭毛，與運動有關(guān)。3.不能在無活細胞的人工(réngōng)培養(yǎng)基中生長繁殖。4.抵抗力極弱。對溫度和干燥特別敏感，4℃3天死亡。保存4℃3天血液就無傳染梅毒的危險。第三十五頁，共54頁。梅毒(méidú)螺旋體檢驗1.直接(zhíjiē)顯微鏡檢查初期梅毒，取下疳分泌物；二期梅毒取梅毒疹、病灶滲出物或局部淋巴結(jié)穿刺液，將上述檢材置于玻片上用暗視野顯微鏡檢查，如見有呈現(xiàn)運動活潑，沿其長軸滾動、屈伸、旋轉(zhuǎn)、前后移行等的螺旋體即有診斷意義。第三十六頁，共54頁。2.核酸(hésuān)檢測用PCR技術(shù)直接檢測臨床標本中梅毒(méidú)螺旋體的特異性DNA片段，用于檢測的引物和探針是編碼外膜蛋白4．7kD的基因，其擴增產(chǎn)物經(jīng)斑點印跡，或電泳以Southern印跡法鑒定。第三十七頁，共54頁。3.抗體(kàngtǐ)檢測(1)非密螺旋體抗原試驗(shìyàn)多用牛心肌的心脂質(zhì)作為抗原，測定病人血清中的反應(yīng)素。初期梅毒病灶出現(xiàn)后1-2周時，陽性率為53％～83％，二期梅毒的陽性率可達100％，晚期梅毒的陽性率58％-85％，胎傳梅毒的陽性率為80％-100％。第三十八頁，共54頁。1)性病(xìngbìng)研究所實驗室

(VDRL)玻片試驗所用抗原(0．03％心擬脂、0．21％卵磷脂、0．9％膽固醇，用無水乙醇配制)0．3ml加入裝有0．3ml緩沖鹽水的小瓶內(nèi)(10—15ml容積)，加塞混勻。再加2．4ml緩沖鹽水即為抗原懸液，待檢血清(xuèqīng)經(jīng)56℃30min滅活，滴加于玻片的漆圈內(nèi)加等量抗原液，搖轉(zhuǎn)玻片5min充分混勻反應(yīng)后觀察結(jié)果。有大片絮狀凝聚物為(3+)，中等凝聚物為(2+)，細小凝聚物為(+)，液體混濁為(—)。第三十九頁，共54頁。第二十九頁，共54頁。周觀察到生長情況。暗視野顯微鏡下若有抗體存在，則鉤體凝集分離(fēnlí)培養(yǎng)第三十四頁，共54頁。FTA-ABS試驗具高度特異性和敏感性，在第一期梅毒的頭幾天就可測出特異性抗體。取20μl懸液于玻片上，干燥后用丙酮固定5min。1)性病(xìngbìng)研究所實驗室

(VDRL)玻片試驗二、其他(qítā)密螺旋體微生物特性(tèxìng)標本采集(cǎijí)包括血液、尿和腦脊液，發(fā)病早期(1周內(nèi))血液的陽性率高，1周后尿和腦脊液等的陽性率高。2)快速血漿(xuèjiāng)反應(yīng)素環(huán)狀

卡片試驗(RPR)用活性炭顆粒(kēlì)吸附VDRL抗原。與反應(yīng)素結(jié)合形成黑色凝集塊，可肉眼觀察結(jié)果。取待檢血清加于環(huán)狀卡圓圈內(nèi)，加VDRL抗原致敏活性炭1滴，旋轉(zhuǎn)搖勻8min，觀察結(jié)果。在白色底板出現(xiàn)明顯黑色凝集顆粒(kēlì)為陽性，試驗結(jié)果用肉眼很容易判斷，不需顯微鏡，也易于推廣。第四十頁，共54頁?？蓪吮颈侗认♂屵M行半定量試驗。對評價療效和判斷(pànduàn)是否再感染有價值。第四十一頁，共54頁。(2)密螺旋體抗原(kàngyuán)試驗用密螺旋體抗原檢測病人血清中特異性抗體，由于梅毒螺旋體、雅司螺旋體等抗原性相似，所以用血清學試驗不可能區(qū)別(qūbié)這些密螺旋體及其所致疾病。第四十二頁，共54頁。1)熒光(yíngguāng)密螺旋體抗體

吸收試驗(FTA-ABS)先用吸收劑去除病人血清非特異性抗原，提高特異性，稀釋成不同(bùtónɡ)稀釋度，加于預(yù)先涂有梅毒螺旋體抗原的玻片上，置濕盒內(nèi)，37℃孵育30min，洗片后再用熒光素標記的羊抗人丙球蛋白抗體，在熒光顯微鏡下觀察。陽性者可見發(fā)熒光的梅毒螺旋體。FTA-ABS試驗具高度特異性和敏感性，在第一期梅毒的頭幾天就可測出特異性抗體。第四十三頁，共54頁。2)梅毒螺旋體熒光抗體

雙染色(rǎnsè)試驗(FTA—ABS-DS)用Nichol株梅毒螺旋體作抗原，用四甲基異硫氰酸若丹明結(jié)合的抗人球蛋白抗血清及異硫氰酸熒光素(FITC)結(jié)合的抗梅毒螺旋體球蛋白雙重染色，用間接免疫熒光技術(shù)檢測(jiǎncè)血清中的抗TPlgG抗體。第四十四頁，共54頁。FTA-ABS-DS法無論對早期梅毒或晚期梅毒都有很高的敏感性和特異性，且陽性出現(xiàn)時間早。一期梅毒陽性率達90％，晚期梅毒的陽性率為95％。對確診病人的敏感性和特異性分別為91．7％和92．o％，但技術(shù)要求較高，且較費時費錢，因此(yīncǐ)多用于實驗室試驗。第四十五頁，共54頁。3)抗梅毒螺旋體抗體(kàngtǐ)的微量

血凝檢測(MHA-TP)用抗原致敏紅細胞作間接血凝試驗是檢測抗體最簡易的方法，所用抗原是用梅毒螺旋體(Nichols株)提取物去致敏經(jīng)醛化處理的綿羊紅細胞，病人的血清先與非致病性Reiter細胞。血清若含有抗體則與這些細胞反應(yīng)(fǎnyìng)形成平鋪孔底的凝集；用非致敏紅細胞作對照，以除外非特異性凝集。第四十六頁，共54頁。4)ELISA用Nichols株為抗原，以超聲波擊碎。此法可用于各期梅毒診斷，靈敏度為96％，對感染血清靈敏度為95％。與熒光抗體雙吸收法(FTA-ABS-DS)比較，兩法符