ABO亞型鑒定模板課件

2012.03ABO亞型武漢亞洲心臟病醫(yī)院檢驗(yàn)中心優(yōu)選文檔A和B抗原是紅細(xì)胞膜表面糖蛋白、糖脂分子的糖類決定簇。A抗原末端糖基:N-乙酰氨基半乳糖B抗原末端糖基:D-半乳糖。

KarlLandsteiner

(1868-1943)ABO抗原不是ABO基因的直接產(chǎn)物ABO血型分子生物學(xué)基礎(chǔ)優(yōu)選文檔2ABO亞型理論優(yōu)選文檔3A亞型分類依據(jù)紅細(xì)胞上的A抗原依次減少，H抗原的活性則相對(duì)增強(qiáng)幻燈片31、紅細(xì)胞被抗A及抗A1凝集的程度2、紅細(xì)胞被抗AB凝集的程度3、紅細(xì)胞的H反應(yīng)性程度4、血清內(nèi)有無抗A1抗體5、分泌型人唾液內(nèi)具有的A及H物質(zhì)抗-A1抗-AB抗-HA2C抗-A、抗-B、AC、BC、OC亞型試劑常規(guī)試劑優(yōu)選文檔4優(yōu)選文檔5A1和A2占A型的99.99%血清學(xué)區(qū)別：依賴抗-A1抗血清試劑紅細(xì)胞唾液（分泌型）-A-B-AB-A1-HA1A2BOA14+04+2+W/0004+0A/HA24+04+03+0/W04+0A/HAint4+04+2+3+004+0A/H1、如無抗-A1，A1和A2不需加以區(qū)分。2、產(chǎn)生抗-A1的頻率，A2型為1%-8%；A2B型為22%-35%。3、抗-A1在37℃反應(yīng)才具有臨床意義。優(yōu)選文檔6A3和Aend兩者均呈現(xiàn)mf外觀抗血清試劑紅細(xì)胞唾液（分泌型）-A-B-AB-A1-HA1A2BOA33+mf03+mf03+0/w04+0A/HAend1+mf01+mf04+0/w04+0H1、A3凝集細(xì)胞占60%；Aend凝集細(xì)胞占10%，Aend需多次離心才能被發(fā)現(xiàn)。2、出現(xiàn)mf時(shí)，要進(jìn)行臨床調(diào)查，了解患者是否是為白血病或骨髓移植，如疑是疾病原因造成，應(yīng)慎報(bào)亞型。優(yōu)選文檔7Ax、Ael和Am抗血清試劑紅細(xì)胞唾液（分泌型）-A-B-AB-A1-HA1A2BOAxw01+-3+04+w04+0HAel0<el>00<el>04+w04+0HAm0-1+<el>00-1+<el>04+004+0A/HAy極罕見，表現(xiàn)型與Am很相似優(yōu)選文檔8各種弱A亞型的鑒別要領(lǐng)紅細(xì)胞與抗-A及/或抗-AB反應(yīng)弱凝集

A3/Ax/Aend混合外觀(Mf）60%A310％紅細(xì)胞呈十分弱的mf凝集Aend與抗-A呈弱凝，與抗-AB凝集增強(qiáng)Ax不凝集吸附放散抗-AAm/Ay/Ael容易吸附放散抗-AAm分泌型唾液中有一定量的A物質(zhì)不容易吸附放散抗-AAy分泌型唾液含少量的A物質(zhì)吸附放散抗-AAel分泌型唾液只含H物質(zhì)無A物質(zhì)優(yōu)選文檔9B亞型B3、Bx、Bel、Bend、Bm血清學(xué)特點(diǎn)同相應(yīng)A亞型不同之處，鑒定時(shí)不需抗-A1試劑，及A2細(xì)胞抗血清試劑紅細(xì)胞唾液（分泌型）-A-B-AB-A1-HA1A2BOB303+mf3+mf04+4+3+0/w0B/HBend01+mf004+4+4+0/w0HBx0w1-3+04+4+3+w0HBel00<el>004+4+4+w0HBm00-1+<el>0-1+<el>04+4+3+00B/H優(yōu)選文檔10AB亞型A2B、A3B、AxB、AmB、AelB、AendB、AB3、ABx、ABm、ABel、ABend同A亞型和B亞型的血清學(xué)特點(diǎn)不同之處：不需抗AB血清鑒定；與抗H的凝集強(qiáng)度弱，呈w/0，同A1B抗血清試劑紅細(xì)胞唾液（分泌型）-A-B-AB-A1-HA1A2BOA1B4+4+4+4+w/00000H/A/BAxBw4+4+0w/0w000B/HABx4+w4+4+w/000w0優(yōu)選文檔11cisABcisAB是一種罕見的ABO亞型，人群中的發(fā)生率非常低，大約在170000到580000之間。最早出現(xiàn)起源于親代與子代的ABO血型是遺傳的矛盾，按照ABO三復(fù)等位基因?qū)W說和孟德爾遺傳定律，AB和O型的雙親不可能生下AB型或O型的子代。分子機(jī)理：在A等位基因的基礎(chǔ)上發(fā)生了堿基錯(cuò)義突變，變異的A基因具有編碼雙功能活性酶的能力，血清學(xué)除了表現(xiàn)A抗原的特異性外，還表現(xiàn)少量B抗原的特異性。血清學(xué)特點(diǎn)：A抗原接近正?；蛉趼杂谡?；B抗原較正常弱很多；抗血清試劑紅細(xì)胞唾液（分泌型）-A-B-AB-A1-HA1A2BOcisAB2-4+2+4+04+001-3+0H/AABx4+w4+4+w/000w0優(yōu)選文檔12B（A）同cisAB的遺傳方式相似，也是一種罕見的ABO亞型，cisAB是在1964年發(fā)現(xiàn)，B(A)是在1985年發(fā)現(xiàn)；分子機(jī)理：被認(rèn)為是遺傳學(xué)上的B型，在B基因基礎(chǔ)上發(fā)生錯(cuò)義突變，由于單堿基突變，變異的B基因具有編碼雙功能活性酶的能力，血清學(xué)除了表現(xiàn)為B抗原特異性外，還表現(xiàn)為少量A抗原特異性。血清學(xué)特點(diǎn)：較弱的A抗原和接近正常的B抗原特異性，血清中有較強(qiáng)的抗-A。抗血清試劑紅細(xì)胞-A-B-AB-A1-HA1A2BOB（A)2+4+4+04+1-3+1+00AxBw4+4+0w/0w000優(yōu)選文檔13cisAB、B(A)正常AB型，A和B等位基因分別位于9號(hào)同源染色體的ABO位點(diǎn)上，分別從父方或母方遺傳得到。極少數(shù)人類個(gè)體的一條9號(hào)染色體上存在一個(gè)cisAB或B（A）基因，它編碼的酶具有雙功能活性，可以同時(shí)催化A抗原和B抗原的合成。cisAB的A抗原接近正常，B抗原較正常弱很多；B(A)的B抗原接近正常，A抗原弱很多。cisAB或B（A）血清中存在針對(duì)弱抗原產(chǎn)生的不規(guī)則抗體與抗H反應(yīng)強(qiáng)度僅次于甚至接近與O細(xì)胞。血清學(xué)方法判斷為AB亞型，需分子生物學(xué)驗(yàn)證cisAB或B（A）是從一個(gè)親本遺傳而來的，因此基因型是cisAB

/O或B（A）

/O，表現(xiàn)型為AB型。帶有cisAB或B(A)等位基因的個(gè)體，若與O型血的人（基因型O/O）生育，子女的血型可能表現(xiàn)為AB型或O型，而不像通常AB型血與O型血的父母只能生出A或B型血的子女。優(yōu)選文檔14孟買型和類孟買型孟買型和類孟買型在ABO血型系統(tǒng)中為罕見的稀有血型，常因交叉配血不合而被發(fā)現(xiàn)。為紅細(xì)胞上H抗原缺乏而使ABO血型物質(zhì)不能正常合成的一類血型。遺傳特點(diǎn)：與A、B基因相對(duì)獨(dú)立的H-h系統(tǒng)是hh純合子，不能合成表達(dá)A或B基因的前提物質(zhì)-H物質(zhì)孟買型類孟買型H抗原缺乏，非分泌型（H和Se基因均無活性），其紅細(xì)胞和分泌液中均無ABH物質(zhì)；血清中有很強(qiáng)的抗-H，血清與所有O型人的紅細(xì)胞反應(yīng)都很強(qiáng)。H抗原缺乏，分泌型（H基因無活性而SE基因有活性），其分泌液中含有正常ABH物質(zhì)，紅細(xì)胞上含有少量ABH物質(zhì)，一般認(rèn)為可能為血漿中的ABH物質(zhì)吸附到紅細(xì)胞上所致，可通過吸收放散試驗(yàn)測(cè)得。紅細(xì)胞上ABH抗原缺乏或弱表達(dá)，血清中存在抗H或抗HI抗體1952年發(fā)現(xiàn)1961年發(fā)現(xiàn)優(yōu)選文檔15孟買型和類孟買型血清學(xué)特點(diǎn)抗血清試劑紅細(xì)胞唾液（分泌型）-A-B-AB-A1-HA1A2BOOh00004+4+4+3+-Omh

00004+4+4+wHAmhw0w00w04+wA/HBmh0ww004+3+wwB/H血清學(xué)方法繁瑣，結(jié)合正反定型、抗體篩選、吸收放散試驗(yàn)、唾液中的血型物質(zhì)測(cè)定以及家系調(diào)查來綜合分析。分子生物學(xué)方法進(jìn)行ABO基因定型簡(jiǎn)便、快速、可靠，成為輸血醫(yī)學(xué)的研究熱點(diǎn)。優(yōu)選文檔16ABO正反定型不一致原因類型處理正定型額外抗原多凝集獲得性B直抗強(qiáng)陽(yáng)性抗原減弱或缺失血型物質(zhì)增多疾病原因亞型反定型抗體減弱或缺失年齡因素丙球減少或缺乏額外抗體自身抗體假凝集亞型不規(guī)則抗體同種抗體優(yōu)選文檔17ABO正反定型不合原因分析正定型反定型自身C可能原因抗-A抗-BA1CBCOC14+01+4+0024+4+2+2+2+2+33+4+1+00044+4+2+2+2+05002+4+006004+4+4+074+004+3+0同種抗體A亞型緡錢狀凝集冷自身抗體AB型的亞型同種抗體A型抗-HO型A亞型同種抗體孟買型

同種抗體優(yōu)選文檔18ABO正反定型不一致紅細(xì)胞三洗6管：-A、-B、AC、BC、OC、自身C正常：2管強(qiáng)凝集，其他4管陰性（正定型4+；反定型>2+）異常：1、出現(xiàn)其他的凝集（不規(guī)則抗體)

2、不到2管強(qiáng)凝集（ABO亞型、抗原、抗體減弱）不規(guī)則抗體亞型6管反應(yīng)結(jié)果優(yōu)選文檔19ABO亞型鑒定流程1、人-A、人-B2、-H(新鮮BC、OC對(duì)照）3、-AB(單獨(dú)A亞型、B亞型）4、-A1(A亞型的鑒定)5、排除其他不規(guī)則抗體H抗原強(qiáng)弱：O>A亞/B亞>B>AB亞型>A1>A1B優(yōu)選文檔20ABO亞型案例分析優(yōu)選文檔21案例1反應(yīng)條件正定反定-A-BAcBcOc自身cIS01+w4+1+w00二次02+w4+1+w004℃*10min02+2+±±RT恢復(fù)02+w2+w00Step1正定型多次離心4℃反應(yīng)吸收放散反定型多次離心4℃反應(yīng)加大血清量吸收放散增強(qiáng)抗原抗體反應(yīng)分析：1、強(qiáng)凝集1管，弱凝集2管。2、B抗原減弱，血清中存在正?？笰,同時(shí)還有與BC反應(yīng)的弱不規(guī)則抗體3、懷疑B亞型4、進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)：優(yōu)選文檔22Step2-HPCOCBCIS4+4+2+Step3關(guān)鍵步驟人-A人-B-ABIS00±二次001+S4℃02+w考慮到人源抗血清效價(jià)比較低的緣故，并未得到預(yù)期的結(jié)果，但4℃顯示有B抗原存在，與抗-AB也未見增強(qiáng)H抗原：O>A亞/B亞>B>AB亞型>A1>A1B優(yōu)選文檔23根據(jù)以上的反應(yīng)格局，高度懷疑Bx,鑒于Bx亞型的血清學(xué)特征，即為血清中存在能凝集常規(guī)BC的抗體，為減少偶然性，選擇健康B型2份，O型2份（對(duì)照），分別與待檢血清反應(yīng)2dps+1dBC-1BC-2OC-1OC-2IS±±00二次±±00排除其他不規(guī)則抗體，進(jìn)一步證實(shí)為不規(guī)則抗BStep4優(yōu)選文檔24根據(jù)以上結(jié)果，該病例紅細(xì)胞上有弱的B抗原，血清中有強(qiáng)的抗A和弱的不規(guī)則抗B,紅細(xì)胞與抗H呈強(qiáng)陽(yáng)性凝集，根據(jù)血清學(xué)格局，初步判斷為Bx亞型，須經(jīng)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確認(rèn)。結(jié)論優(yōu)選文檔25案例2反應(yīng)條件正定反定-A-BAcBcOc自身cIS2+02+S3+S00二次2+S02+S4+00Step1分析：1、強(qiáng)凝集只有1管，弱凝集有2管。

2、A抗原減弱，血清中有正?？笲，同時(shí)還存在與A1C反應(yīng)的比較弱的不規(guī)則抗體

3、懷疑A亞型

4、進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)：抗-A1、抗-AB、抗-H，A2細(xì)胞優(yōu)選文檔26Step2人-A人-B-A1-ABIS2+004+二次2+s004+A1C3+與抗-A1不反應(yīng)，為A亞型；同時(shí)與抗-AB凝集增強(qiáng)，進(jìn)一步證明為A亞型血清與A1C反應(yīng)，與A2C不反應(yīng)，證明存在不規(guī)則抗-A1抗體Step3PS+A2C抗-A+A2CIS03+w二次03+優(yōu)選文檔27Step4-HPCOCBCIS3+S4+2+H抗原增強(qiáng)，凝集強(qiáng)度與O細(xì)胞相當(dāng)

根據(jù)以上的反應(yīng)格局，高度懷疑Ax。2dps+1dAC-1AC-2OC-1OC-2IS2+W2+W00二次2+2+00排除其他不規(guī)則抗體，進(jìn)一步證實(shí)為不規(guī)則抗A1Step5優(yōu)選文檔28結(jié)論根據(jù)以上結(jié)果，該病例紅細(xì)胞上有弱的A抗原，血清中有強(qiáng)的抗A和弱的不規(guī)則抗A1,紅細(xì)胞與抗H呈強(qiáng)陽(yáng)性凝集，根據(jù)血清學(xué)格局，初步判斷為Ax亞型，須經(jīng)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確認(rèn)。優(yōu)選文檔29案例3反應(yīng)條件正定反定-A-BAcBcOc自身cIS2+s4+1+w000二次3+w4+1+w0004℃*10min2+w±1+s±RT恢復(fù)1+s000Step1分析：1、強(qiáng)凝集1管，弱凝集2管。2、A抗原減弱，B抗原正常，血清中存與AC反應(yīng)的弱不規(guī)則抗體3、懷疑A亞型B4、進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)優(yōu)選文檔30Step2人-A人-B-A1IS2+w4+0二次2+4+0A1C3+與抗-A1不反應(yīng)，為A亞型血清與A1C反應(yīng)，與A2C不反應(yīng)，證明存在不規(guī)則抗-A1抗體Step3PS+A2C抗-A+A2CIS03+w二次03+優(yōu)選文檔31Step4-HPCOCBCIS±4+2+二次1+w4+2+sH抗原未見增強(qiáng)，因?yàn)橛姓５腂基因

根據(jù)以上的反應(yīng)格局，高度懷疑AxB2dps+1dAC-1AC-2OC-1OC-2IS0000二次±±00排除其他不規(guī)則抗體，進(jìn)一步證實(shí)為不規(guī)則抗A1Step5優(yōu)選文檔32案例4Step1反應(yīng)條件正定反定-A-BAcBcOc自身cIS1+4+2+s000二次1+s4+3+000AxB?B(A)?優(yōu)選文檔33Step2IS2+二次2+Step3PS+A2C人-A人-B-A1IS04+0二次04+0A1C3+人-A并未得到預(yù)期的結(jié)果?？?A1不反應(yīng)，初步判斷為A亞B。仍然不能區(qū)分是AXB還是B(A)排除AXB，AXB與A2細(xì)胞不反應(yīng)，此點(diǎn)是鑒別B(A)與AXB最有價(jià)值的依據(jù)之一優(yōu)選文檔34-HPCOCBCIS4+4+2+s二次4+4+2+sStep4AXB與抗-H呈弱凝集，而B(A)與抗-H呈強(qiáng)凝集，這也是區(qū)分兩者的一個(gè)非常重要的標(biāo)記結(jié)論：根據(jù)以上血清學(xué)實(shí)驗(yàn)，初步定為B(A)亞型，須經(jīng)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確認(rèn)。B(A)亞型的特點(diǎn)：1、紅細(xì)胞上A抗原減弱，B抗原基本正常

2、H抗原增強(qiáng)，與O細(xì)胞H抗原相當(dāng)

3、血清中的抗-A與A1、A2細(xì)胞均有反應(yīng)B(A)與AXB的區(qū)別：1、B(A)的H抗原增強(qiáng)，AXB不增強(qiáng)

2、B(A)的血清與A1、A2細(xì)胞均反應(yīng)；AXB只與

A1細(xì)胞反應(yīng)。優(yōu)選文檔35案例5反應(yīng)條件正定反定-A-BAcBcOc自身cIS4+002+00二次4+±02+004℃*10min1+w±2+s±±RT恢復(fù)1+w02+00Step1分析：1、強(qiáng)凝集1管，弱凝集2管。2、A抗原正常，B抗原減弱，血清中存與BC反應(yīng)的弱不規(guī)則抗體3、懷疑AB亞型4、進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)：優(yōu)選文檔36Step2-HPCOCBCIS03+1+w二次±3+s1+4℃1+4+1+sStep3人-A人-B-A1IS3+S04+二次3+S04℃4+±人源抗血清顯示有正常A抗原，有比較弱的B抗原。此處增加抗-A1的目的用以區(qū)分CisABH抗原未見增強(qiáng)，CisAB呈4+,兩者可區(qū)分優(yōu)選文檔37

根據(jù)以上的反應(yīng)格局，懷疑ABx2dps+1dBC-1BC-2OC-1OC-2IS2+2+00二次2+s2+s00排除其他不規(guī)則抗體，進(jìn)一步證實(shí)為不規(guī)則抗BStep4優(yōu)選文檔38案例6反應(yīng)條件正定反定-A-BAcBcOc自身cIS4+2+02+w00二次4+3+w02+004℃*10min02+s00Step1分析：1、強(qiáng)凝集1管，弱凝集2管。2、A抗原正常，B抗原減弱，血清中存與BC反應(yīng)的弱不規(guī)則抗體3、懷疑AB亞型ABx?CisAB?4、進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)：優(yōu)選文檔39Step2人-A人-B-A1IS1+s±0二次2+s1+04℃3+s2+A1C3+與抗-A1不反應(yīng)，說明A抗原為非正常A1型。初步排除ABX優(yōu)選文檔40-HPCOCBCIS4+4+2+w二次4+4+2+Step3ABx與抗-H呈弱凝集，而CisAB與抗-H呈強(qiáng)凝集，這是區(qū)分兩者的一個(gè)非常重要的標(biāo)記結(jié)論：根據(jù)以上血清學(xué)實(shí)驗(yàn)，初步定為CisAB亞型，須經(jīng)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確認(rèn)。cisAB亞型的特點(diǎn)：1、紅細(xì)胞上A抗原基本正常，B抗原弱于正常B抗原

2、H抗原增強(qiáng)，與O細(xì)胞H抗原相當(dāng)

3、血清中存在弱的抗-BcisAB與ABx的區(qū)別：1、cisAB的H抗原增強(qiáng)，ABx不增強(qiáng)

2、cisAB的紅細(xì)胞與抗-A1不反應(yīng)；ABx與抗-A1反應(yīng)

優(yōu)選文檔41案例7反應(yīng)條件正定反定-A-BAcBcOc自身cIS003+s000二次004+1+w004℃*10min001+s00Step1分析：1、強(qiáng)凝集1管，弱凝集1管。2、O型：抗-B減弱？3、B亞型：B抗原未檢出，血清中有不規(guī)則抗B?4、進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)：優(yōu)選文檔42Step2-HPCOCBCIS4+4+2+二次4+4+2+Step3人-A人-B-ABIS000二次0004℃000人源血清和抗-AB均顯示不反應(yīng)。H抗原增強(qiáng)，B亞型和O型仍然無法區(qū)分。由于該標(biāo)本為健康獻(xiàn)血員，無其他疾病史，可排除抗體減弱的可能。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)，證明是否存在B抗原。優(yōu)選文檔43Step4

吸收放散試驗(yàn)PCOC（對(duì)照）4℃1h離心吸出上清4℃NS洗滌6次56℃熱放散10min立即離心吸出上清液（放散液）再次離心放散液中加入BC，4℃過夜人-B離心看結(jié)果4℃過夜PC放OC放IS（Bc)2+±證明有B抗原存在優(yōu)選文檔44

根據(jù)以上的反應(yīng)格局，懷疑Bel2dps+1dBC-1BC-2OC-1OC-2IS0000二次1+w1+w00排除其他不規(guī)則抗體，進(jìn)一步證實(shí)為不規(guī)則抗BStep5優(yōu)選文檔45結(jié)論根據(jù)以上血清學(xué)試驗(yàn)，初步鑒定為Bel型。其特點(diǎn)：紅細(xì)胞上僅有很少量的B抗原，常規(guī)的血清學(xué)方法難以檢測(cè)出，需通過吸收放散試驗(yàn)才能證明血清中通常存在不規(guī)則抗B需與抗B減弱的O型相區(qū)別優(yōu)選文檔46案例8反應(yīng)條件正定反定-A-BA