動物細胞培養(yǎng)與核移植技術(shù)

動物細胞培養(yǎng)與核移植技術(shù)第一頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期五回憶植物細胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？

植物組織培養(yǎng),

植物體細胞雜交暢想對一個大面積燒傷的人來說，如何才能獲得大量健康的皮膚進行移植?克隆羊多利如何培養(yǎng)出來？第二頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期五動物細胞工程：動物細胞培養(yǎng)、動物細胞核移植、動物細胞融合、生產(chǎn)單克隆抗體等一、動物細胞培養(yǎng)：1、概念：

從動物機體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。2、原理：細胞增殖→有絲分裂第三頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期五

注意關(guān)鍵詞:

細胞貼壁接觸抑制原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細胞株細胞系閱讀課文44--46頁相關(guān)內(nèi)容第四頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期五3、動物細胞培養(yǎng)的過程:第五頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期五動物胚胎或幼齡動物的組織、器官細胞懸浮液原代培養(yǎng)（貼壁生長和接觸抑制）傳代培養(yǎng)細胞系（50代以后，遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，失去接觸抑制）單個細胞加培養(yǎng)液（分解彈性纖維）胰蛋白酶或膠原蛋白酶剪碎過程：動物組織細胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，將細胞網(wǎng)絡(luò)起來形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。細胞株（10~50代，遺傳物質(zhì)，沒有改變）

傳代培養(yǎng)第六頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期五原代培養(yǎng)：從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞為原代細胞。一般在1～10代，保持正常核型。傳代培養(yǎng)：將原代細胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。解答概念第七頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期五

細胞株：傳代細胞一般傳至10代左右細胞生長停滯，大部分細胞衰老死亡，少數(shù)細胞存活到40~50代，這種傳代細胞為細胞株，遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生改變。

細胞系：細胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細胞生長停滯狀態(tài)，只有部分細胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細胞為細胞系。細胞株和細胞系的區(qū)別：細胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細胞的特點，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。第八頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期五

多細胞動物和人體的細胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，根據(jù)你所學(xué)的內(nèi)環(huán)境的知識，思考并討論以下問題：討論11.體外培養(yǎng)細胞時需要提供哪些物質(zhì)？2.體外培養(yǎng)的細胞需要什么樣的環(huán)境條件？

充足的營養(yǎng):水、無機鹽、葡萄糖、氨基酸等適宜的溫度、適宜的pH和氣體環(huán)境無菌、無毒的液體環(huán)境。第九頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期五（1）、無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）（2）、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素、動物血清、血漿等。）（3）、溫度和PH

36.5+0.5度；PH為7.2-7.4。（4）、氣體環(huán)境：

O2和CO2（95%空氣和5%CO2

）補充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)4、動物細胞培養(yǎng)的條件細胞代謝必需的維持培養(yǎng)液PH值第十頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期五無菌操作培養(yǎng)箱第十一頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期五培養(yǎng)器皿動物細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)表面為什么要光滑、無毒？第十二頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期五2、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細胞培養(yǎng)材料？1、動物細胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基有何獨特之處？3、為什么培養(yǎng)前要將組織細胞分散成單個細胞？4、動物細胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。獨特之處有：1、液體培養(yǎng)基2、成分中有動物血清等因為這些組織或器官上的細胞生命力旺盛，分裂能力強成塊組織不利培養(yǎng)，分散了做成細胞懸浮液利于培養(yǎng)不能，動物細胞培養(yǎng)只能使細胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動物個體思考:第十三頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期五（1）生產(chǎn)蛋白質(zhì)生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。（2）獲得大量自身的皮膚細胞，用于植皮。（3）用于檢測有毒物質(zhì)（4）用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)5、動物細胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用第十四頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期五細胞的全能性細胞株、細胞系植物體培養(yǎng)結(jié)果獲得細胞或細胞分泌蛋白快速繁殖、培育無病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細胞增殖原理動物細胞培養(yǎng)共同點①都需無菌條件，培養(yǎng)基中含有有機物好和無機物等營養(yǎng)物質(zhì)②都是細胞有絲分裂過程比較項目試一試植物組織培養(yǎng)第十五頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期五

動物細胞特點？分化潛能變?nèi)酰弘S著細胞分化程度的提高而逐漸受到限制，分化潛能變?nèi)?，這是指整體細胞而言。細胞核仍具有全能性：它含有保持物種遺傳性所需的全套基因，而且并沒有因細胞分化而丟失基因，因此高度分化的動物細胞細胞核仍具有全能性想一想第十六頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期五

根據(jù)動物細胞核仍具有全能性的特點,怎樣將動物細胞的全能性表達?

再想一想利用動物細胞核移植技術(shù)第十七頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期五

二、動物細胞核移植：

將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體。

用核移植的方法得到的動物?？寺游铮?、分類：胚胎細胞核移植：體細胞核移植：細胞分化程度低，恢復(fù)全能性容易細胞分化程度高，恢復(fù)全能性困難1、概念3、原理：動物細胞核的全能性第十八頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期五第十九頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期五

卵巢卵母細胞（MⅡ中期：供質(zhì)）1.共分成兩大階段：核移植和胚胎移植，還用到動物細胞培養(yǎng)技術(shù)供體細胞（供核）細胞培養(yǎng)體細胞核去核無核卵母細胞顯微注入細胞融合重組細胞重組胚胎胚胎移植代孕母體生出與供體奶牛遺傳基礎(chǔ)相同的犢牛物理或化學(xué)方法激活，使其完成細胞分裂和發(fā)育電刺激歸納:2.取卵細胞作受體細胞的原因是:它是最大的細胞,易操作,含有促使細胞核表達全能性的物質(zhì)和營養(yǎng)條件3.它是一個無性繁殖的過程，嚴格來說新個體有卵巢母細胞的細胞質(zhì)，所以有兩個親本的性狀3、細胞核移植過程第二十頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期五多莉羊卵細胞C母綿羊子宮Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細胞細胞質(zhì)細胞核細胞核移植胚胎移植重組胚胎分娩電脈沖刺激重組細胞妊娠多莉羊的培育過程無性生殖第二十一頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期五討論2：1、在體細胞的細胞核移植到受體卵母細胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細胞的核？為使核移植的胚胎或動物的遺傳物質(zhì)全部來自供體動物提供的體細胞2、用于核移植的供體細胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細胞，這是為什么？

因為傳代10代以內(nèi)的細胞核型不會發(fā)生變化，保持正常的二倍體核型.3、你認為用上述體細胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動物，是對體細胞供體動物100%的復(fù)制嗎？為什么？

不是?？寺游锏倪z傳物質(zhì)大部分來至供體細胞核，但其細胞質(zhì)的遺傳物質(zhì)來自受體細胞，此外，環(huán)境對動物的性狀也會有一定的影響，所以克隆動物不會是核供體動物100%的復(fù)制。第二十二頁，共二十四頁，編輯于2023年，星期五（1）.加速家畜遺傳改良，促進優(yōu)良畜群繁育（2）.保護瀕危動物（3）.轉(zhuǎn)基因克隆動物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白（4）.作為異體移植供體，治療人類疾病。（5）使人類更深入了解胚胎發(fā)育及衰老過程（