食用菌制種技術(shù)

食用菌制種技術(shù)用于生產(chǎn)的菌種稱栽培種的設(shè)備01設(shè)備及程序滅菌與消毒菌種保藏制作分離與培養(yǎng)目錄03050204基本信息食用菌制種技術(shù)基本器具有試管、菌種瓶、塑料袋、孢子收集器、天平、溫度計(jì)、濕度計(jì)、孢子收集器。設(shè)備及程序配料稱量設(shè)備滅菌設(shè)備接種設(shè)備培養(yǎng)設(shè)備工藝流程12345設(shè)備及程序配料稱量設(shè)備試管有多種規(guī)格，常用的是21mm×200mm、25mm×200mm。菌種瓶一般容量是750ml、口徑3cm的玻璃瓶，也有用罐頭瓶、廣口瓶生產(chǎn)的。效果以前種規(guī)格為好。但均要求能耐高溫、高壓，并要無色透明，便于檢查菌絲生長(zhǎng)和雜菌污染情況。生產(chǎn)菌種的塑料袋要求用聚丙烯薄膜袋，常用的規(guī)格是17cm×34cm。塑料頸圈高3cm，直徑3.5cm。用橡皮筋或塑料繩扎口。藥物天平、托盤式天平，稱量1000g，感量-1.0g；扭力天平，稱量100g，感量0.01g；分析天平，稱量100g，感量0.1—1.0g?？筛鶕?jù)不同要求選用。孢子收集器是用來采收菌類孢子的一種裝置，包括底盤、培養(yǎng)皿、三角架、紗布及有孔燈罩或鐘罩等。拌料設(shè)備主要有拌料機(jī)、鐵鏟等。裝料設(shè)備主要有裝料機(jī)、鐵鏟等。滅菌設(shè)備主要有滅菌鍋。滅菌鍋是一個(gè)可以密閉并能耐受一定壓力的金屬鍋。鍋底（或夾層）盛水，加熱后由于鍋內(nèi)（夾層）蒸汽增加而壓力加大，溫度或高，從而殺死鍋內(nèi)容物的雜菌菌體及孢子，達(dá)到滅菌的目的。滅菌鍋有兩種：1．高壓蒸汽滅菌鍋，具有滅菌時(shí)間短，效果好，省燃料等優(yōu)點(diǎn)。缺點(diǎn)是投資較大，工廠生產(chǎn)的手提式、直立式、臥式等，也有用鋼板自制的。2．土蒸鍋，是自制的常壓蒸汽滅菌鍋。接種設(shè)備接種設(shè)備有接種箱、接種室、超凈工作臺(tái)、負(fù)離子發(fā)生器接種箱用木材和玻璃制成，要求密閉。接種箱的前后裝有兩扇能啟閉的玻璃窗，下方開兩個(gè)小洞口，洞口裝有布袖套。箱的大小可自行決定，以方便操作為宜。接種箱結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單制造方便，成本低，且體積小，便于消毒徹底。接種室要求密閉、干燥，體積5m3—7m3為宜，外面應(yīng)設(shè)有一間緩沖室，兩室的上方要求安裝紫外線滅菌燈及日光燈。超凈工作臺(tái)是利用過濾滅菌的原理，先將空氣過濾，得到無菌空氣，然后將無菌空氣從風(fēng)洞處打出，使工作臺(tái)范圍內(nèi)成無菌狀態(tài)。負(fù)離子發(fā)生器是采用強(qiáng)電離對(duì)空氣進(jìn)行滅菌的一種新方式。通過電離使用菌體蛋白質(zhì)和核酸變性死亡，滅菌效果較理想。培養(yǎng)設(shè)備培養(yǎng)設(shè)備有培養(yǎng)室、電熱恒溫培養(yǎng)箱。培養(yǎng)室是培養(yǎng)菌種的場(chǎng)所。室內(nèi)裝有放置菌種的架子。要求干燥向陽，房間不宜過大，面積20—25m2，以培養(yǎng)5000—6000瓶菌種為宜。電熱恒溫培養(yǎng)箱是采用自然對(duì)流通外式的結(jié)構(gòu)，冷空氣從底部風(fēng)孔進(jìn)入，經(jīng)電熱器加溫后，從兩側(cè)對(duì)流孔間上升，并從內(nèi)膽左右側(cè)小孔進(jìn)入內(nèi)室，再經(jīng)箱頂?shù)姆忭斏w調(diào)節(jié)，使內(nèi)室溫度均恒。溫度計(jì)、濕度計(jì)。用來觀察培養(yǎng)室、栽培室等處溫度、濕度、以便根據(jù)情況加以調(diào)節(jié)。常用的有棒形溫度計(jì)和干濕球溫度計(jì)。工藝流程（一）菌種的概念和類型在自然界中，食用菌繁衍后代依靠孢子，孢子借風(fēng)力傳播到適宜的環(huán)境下，萌發(fā)成菌絲體，菌絲體生長(zhǎng)繁衍到生理成熟后，在一定的條件下，就可形成子實(shí)體。在人工栽培食用菌時(shí)，孢子雖然是它的“種子”，但一般不用孢子直接播種（有些為異宗配合），而是用孢子或子實(shí)體組織細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)萌發(fā)形成的純菌絲體作為播種材料。因此，通常所指的菌種，實(shí)際上是經(jīng)過人工培養(yǎng)并進(jìn)一步繁殖的食用菌的純菌絲體。制種是食用菌生產(chǎn)最重要的環(huán)節(jié)。菌種的優(yōu)劣，直接影響到食用菌的產(chǎn)量和質(zhì)量。優(yōu)良菌種包含兩大方面的含義：一是指菌種本身的生物學(xué)特性，如高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、抗逆性強(qiáng)；二是指菌種純度高、無蟲害、無雜菌。因此培育優(yōu)良的菌種，是提高食用菌生產(chǎn)水平的重要環(huán)節(jié)。人工培養(yǎng)的菌種，根據(jù)菌種培養(yǎng)的不同階段，可分為母種、原種和栽培種3類。一般把從自然界中，首次通過孢子分離或組織分離而得到的純菌絲體稱為母種，或稱一級(jí)種。它是菌種類型的原始種。原始母種通過移接(轉(zhuǎn)管)成數(shù)支試管(斜面)種，這些移接的試管種，亦可稱為母種。把母種接到木屑、谷粒、棉子殼、糞草等瓶(袋)裝培養(yǎng)基上培養(yǎng)而成的菌種稱為原種，或稱二級(jí)種。它是母種和栽培種之間的過渡種。把原種擴(kuò)接到相同或類似的材料上，進(jìn)行培養(yǎng)直接用于生產(chǎn)的菌種稱栽培種，或稱三級(jí)種。制作制作培養(yǎng)基是用人工方法配合各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，供給食用菌生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。培養(yǎng)基必須具備三個(gè)條件：第一，有食用菌生長(zhǎng)所需的物質(zhì)，如水分和養(yǎng)分，這些物質(zhì)要有合適的比例；第二，具有一定的生化反應(yīng)所需的合適酸堿度和一定的緩沖能力，具有合適的滲透壓和一定的氧化還原電位；第三，必須經(jīng)嚴(yán)格滅菌，保持無菌狀態(tài)。由于食用菌菌種培育通常采用三級(jí)生產(chǎn)，即母鐘培育、原種培育和栽培種培育，所以和生產(chǎn)菌種相應(yīng)用的培養(yǎng)基也可分為三種類型。一級(jí)種培養(yǎng)基的制備馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基。是通用的食用菌母種培養(yǎng)基。其組成是：馬鈴薯200克、瓊脂20克、蔗糖20克、水1000毫升。按配方組成配制分裝于試管里、管口塞棉塞。及時(shí)滅菌，滅菌時(shí)間不能太長(zhǎng)，一般以30分鐘即可，以免消毒時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)破壞培養(yǎng)料的營(yíng)養(yǎng)成分，不利于菌絲生長(zhǎng)。消毒結(jié)束后立即取出試管斜放于桌面上，做成斜面培養(yǎng)基。挑取2-3支試管放置于250C恒溫箱中培養(yǎng)3-5天，若培養(yǎng)基表面沒有發(fā)現(xiàn)雜菌以及乳白色細(xì)菌產(chǎn)生，則表示滅菌徹底，可供擴(kuò)接母種使用。滅菌與消毒干熱滅菌消毒濕熱蒸汽滅菌滅菌與消毒干熱滅菌1、火焰滅菌是直接利用火焰反微生物殺死的方法，它中適用于金屬制的工具，玻璃器皿口等物品的滅菌。2、干熱滅菌是利用熱空氣進(jìn)行滅菌的方法。滅菌溫度140℃—160℃，時(shí)間2—3h，它只適用于金屬及玻璃器皿的滅菌。電熱干燥箱是干熱滅菌常用的設(shè)備。濕熱蒸汽滅菌1、高壓蒸汽滅菌利用高溫高壓蒸汽滅菌，是一種最有效、使用最廣泛的滅菌方法。蒸汽壓力與溫度成正比。高壓滅菌所采用的蒸汽壓力與時(shí)間，應(yīng)根據(jù)具體物質(zhì)而定。高壓滅菌鍋的形成與規(guī)格較多，有立式、臥式、手提式，能源用電、蒸汽、煤等。使用高壓蒸汽滅菌鍋應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：①滅菌鍋內(nèi)的冷空氣必須排盡；②滅菌鍋內(nèi)的基質(zhì)排列一定要稀疏些。使蒸汽流運(yùn)暢通；③滅菌時(shí)升壓和降壓要緩慢；④滅菌過程應(yīng)注意保持棉塞干燥。2、常壓蒸汽滅菌法這是利用自然壓力的蒸汽滅菌的方法。可用土蒸鍋，蒸蘢等滅菌。由于常壓，溫度較高壓的低得多，故滅菌時(shí)間要長(zhǎng)。其優(yōu)點(diǎn)是結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、成本低、便于自制，適宜于家庭制種。消毒1、低溫消毒法（巴氏消毒法）一些不耐高溫的食品，如牛奶、果子酒、醬油等，需要低溫消毒，加熱到60℃維持30min，即可殺死食品中的病原菌及多數(shù)細(xì)菌營(yíng)養(yǎng)體。蘑菇培養(yǎng)料的后發(fā)酵，就是采用巴氏消毒法，殺死有害于蘑菇的病蟲雜菌。2、沸水消毒法主要用于針筒等器材的消毒，將有關(guān)的器材置沸水中燒煮一定時(shí)間，以殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)體。3、化學(xué)藥劑消毒法這是利用化學(xué)藥劑進(jìn)行殺菌的方法。殺菌劑的種類及使用濃度：①重金屬鹽類：所有的重金屬鹽類對(duì)微生物都有素害作用，如硝酸銀、氯化汞等。②氧化劑：常用的氧化劑有高錳酸鉀、過氧化氫、漂白粉、漂白精等，常用的高錳酸鉀溶液濃度是0.1%，氯氣自來水清潔劑濃度為1ppm，漂白精濃度為400ppm。③、有機(jī)化合物：甲醛（福爾馬林）5%甲醛溶液用于種子表面消毒，原液可用于接種箱、培養(yǎng)室、栽培室等空間消毒，熏蒸用量6—10ml/cm3。新潔爾滅：0.25%新潔爾滅溶液可用作皮膚、種子消毒。4、干燥消毒利用干燥使微生物失水，達(dá)到殺菌或抑菌的目的，稱為干燥消毒。分離與培養(yǎng)菌種的培養(yǎng)菌種的分離分離與培養(yǎng)菌種的分離食用菌菌種分離方法有四種，即組織分離法、孢子分離法、耳木分離法和土中菌絲分離法。（一）組織分離法組織分離法是利用子實(shí)體內(nèi)部組織來獲得純菌種的方法，根據(jù)不同的分離材料大體可分為三種。1、子實(shí)體組織分離①、種菇的選擇從優(yōu)良的品系中選取優(yōu)良的個(gè)體作種菇，以單生菇、菇形圓整、無病蟲害菇作分離材料。②分離把種菇帶入接種箱內(nèi)，用75%酒精表面消毒，用解剖刀在菌柄中部縱切一刀，然后撕開，挑取菌蓋與菌柄交界處的一小塊組織，接種到PDA培養(yǎng)基上，數(shù)天后就可看到組織塊及培養(yǎng)基上有白色菌絲，即表明分離成功。2、菌核組織分離茯苓、豬苓、雷丸等藥用菌，常利用菌核分離得到菌種。分離方法是將菌核表面消毒后，用解剖刀切開，取中間組織1小塊，接入PDA培養(yǎng)基上，20℃—25℃培養(yǎng)。3、菌索分離密環(huán)菌，假密環(huán)菌常用菌索來分離。方法是將菌索表面消毒后，去掉菌鞘，把白色菌髓部分用無菌剪刀剪成小段。移接在PDA培養(yǎng)基上，20℃—25℃培養(yǎng)，有白色菌絲長(zhǎng)出且無污染，即表明分離成功。菌種的培養(yǎng)接種后的原種或栽培種全部拿出培養(yǎng)箱或培養(yǎng)室，根據(jù)不同食用菌菌絲發(fā)育最適溫度進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)2～3天后，菌絲開始生長(zhǎng)時(shí)，要每天定期檢查，如發(fā)現(xiàn)黃、綠、橘紅、黑色雜菌時(shí)，要及時(shí)揀出清理。尤其是塑料袋菌種，檢查工作到菌絲長(zhǎng)滿為止。培養(yǎng)室切忌陽光直射，但也不要完全黑暗；注意通風(fēng)換氣，室內(nèi)保持清潔，空氣相對(duì)濕度不要超過65%；同時(shí)菌種瓶、袋不要堆疊過高，瓶間要有空隙，以防溫度過高造成菌絲衰老，生活力降低。特別是對(duì)加溫的培養(yǎng)室要注意：一要保持室內(nèi)溫度的穩(wěn)定，因在溫差較大的情況(特別是母種培養(yǎng))會(huì)形成冷凝水，而使菌絲倒伏變黃。有條件的話，可根據(jù)菇類的菌絲生長(zhǎng)對(duì)溫度的要求，按品種分開放在不同溫度的培養(yǎng)室(箱)內(nèi)培養(yǎng)。同時(shí)要注意經(jīng)常調(diào)換原種、栽培種排放的位置以使同一批菌種菌絲生長(zhǎng)一致。二要注意通風(fēng)換氣，以免室內(nèi)二氧化碳濃度過高而影響菌絲生長(zhǎng)。菌種保藏菌種保藏一個(gè)優(yōu)良菌株被選育出來以后，必須保持其優(yōu)良性狀，防止雜菌污染，才不致降低生產(chǎn)性能。因此保藏好菌種，對(duì)研究和生產(chǎn)食用菌都具有十分重要的意義。菌種保藏的方法有斜面低溫、沙土管、液體石蠟封藏、冷凍真空及液氮超低溫等。斜面低溫保藏法這是最簡(jiǎn)單最普通的保藏方法，即將菌種在適宜的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)成熟后，置于4—5'C的低溫下保藏，以后每隔2～3個(gè)月轉(zhuǎn)管一次。此法適用于除草菇外的所有食用菌菌種。草菇對(duì)低溫忍耐力差，它的菌絲體在50C下即易死亡，因此草菇菌種應(yīng)保藏在lo～13'(2的環(huán)境中。若需置于4～5℃的低溫下保藏，應(yīng)在草菇菌苔上灌注3～4mL的防凍劑。一般生產(chǎn)上，草菇多采用室內(nèi)常溫保藏。低溫保藏菌種的培養(yǎng)基一般用營(yíng)養(yǎng)豐富的天然培養(yǎng)基，如馬鈴薯—葡萄糖—瓊脂培養(yǎng)基等。為防止菌種在保藏過程中產(chǎn)生酸過多，在配制保藏用培養(yǎng)基時(shí)需添加少