臨床血液學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)-第七章-第一節(jié)-血管壁和血管內(nèi)皮細(xì)胞的檢驗(yàn)-課件

第一章造血及造血調(diào)控第一節(jié)造血器官與造血微環(huán)境臨床血液學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)第七章血栓與止血疾病檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)血管壁和血管內(nèi)皮細(xì)胞的檢驗(yàn)第一節(jié)血管壁和血管內(nèi)皮細(xì)胞的檢驗(yàn)一、出血時(shí)間檢測(cè)

二、血管性血友病因子檢測(cè)三、血漿內(nèi)皮素-1檢測(cè)四、血漿血栓調(diào)節(jié)蛋白檢測(cè)五、血漿6-酮-前列腺素F1α和去甲基6-酮-前列腺素F1α

檢測(cè)

目錄重點(diǎn)提示血管壁和血管內(nèi)皮細(xì)胞檢驗(yàn)方法vWF的檢測(cè)及其診斷血管性血友病的意義PT、APTT、TT檢測(cè)的臨床意義血栓彈力圖儀的原理、主要檢測(cè)參數(shù)及臨床意義第一節(jié)血管壁和血管內(nèi)皮細(xì)胞的檢驗(yàn)一、出血時(shí)間檢測(cè)【實(shí)驗(yàn)原理】出血時(shí)間（bleedingtime,BT）是指皮膚受特定條件的外傷后，出血自行停止所需的時(shí)間。

第一節(jié)血管壁和血管內(nèi)皮細(xì)胞的檢驗(yàn)【參考區(qū)間】模板法：6.9±2.1分鐘【臨床意義】

1.BT延長見于血管壁和血小板的初期止血缺陷。2.BT縮短見于某些嚴(yán)重的血栓前狀態(tài)和血栓性疾病。第一節(jié)血管壁和血管內(nèi)皮細(xì)胞的檢驗(yàn)一、出血時(shí)間檢測(cè)【應(yīng)用評(píng)價(jià)】⒈BT是篩查血管與血小板相互作用有無異常較為敏感的試驗(yàn)。⒉BT實(shí)驗(yàn)操作較為復(fù)雜、皮膚切口稍大，臨床開展受到一定限制，一般不作為常規(guī)篩查試驗(yàn)。⒊試驗(yàn)前一周應(yīng)停用抗血小板藥物。第一節(jié)血管壁和血管內(nèi)皮細(xì)胞的檢驗(yàn)一、出血時(shí)間檢測(cè)二、血管性血友病因子

血管性血友病因子（vonWillebrandfactor,vWF）是一種多聚體大分子蛋白，具有與膠原、肝素、FⅧ輕鏈、血小板膜糖蛋白GPIb及GPⅡb-Ⅲa、瑞斯托霉素等結(jié)合的多個(gè)功能區(qū)。vWF的分析包括含量、活性、功能、多聚體等多項(xiàng)檢測(cè)。

第一節(jié)血管壁和血管內(nèi)皮細(xì)胞的檢驗(yàn)（一）血漿vWF抗原（vWF：Ag）含量（二）血漿vWF活性（vWF：activity，vWF：A）（三）vWF的功能分析（四）vWF多聚體分析（五）基因診斷

第一節(jié)血管壁和血管內(nèi)皮細(xì)胞的檢驗(yàn)二、血管性血友病因子

（一）血漿vWF抗原（vWF：Ag）含量【實(shí)驗(yàn)原理】膠乳顆粒增強(qiáng)的免疫比濁法。在待測(cè)血漿中加入包被有抗vWF：Ag單克隆抗體的膠乳顆粒，后者與vWF：Ag結(jié)合后發(fā)生凝集反應(yīng)，膠乳顆粒凝集的強(qiáng)度與血漿中的vWF：Ag含量成比例關(guān)系，通過全自動(dòng)凝血分析儀可以快速測(cè)定血漿vWF：Ag的含量，結(jié)果以對(duì)照血漿的百分比表示。第一節(jié)血管壁和血管內(nèi)皮細(xì)胞的檢驗(yàn)二、血管性血友病因子

（二）血漿vWF活性（vWF：activity，vWF：A）

【實(shí)驗(yàn)原理】用抗vWF的血小板結(jié)合位點(diǎn)的單克隆抗體包被的膠乳顆粒與待測(cè)血漿中的vWF反應(yīng)，膠乳顆粒發(fā)生凝集的程度與vWF活性成比例關(guān)系。第一節(jié)血管壁和血管內(nèi)皮細(xì)胞的檢驗(yàn)二、血管性血友病因子

（三）vWF的功能分析

1.血漿vWF瑞斯托霉素輔因子檢測(cè)：比濁法。

2.瑞斯托霉素誘導(dǎo)的血小板凝集試驗(yàn)：血小板聚集儀法。

3.vWF的膠原結(jié)合能力：ELISA定量檢測(cè)與膠原結(jié)合的vWF。

4.vWF的FⅧ結(jié)合能力：用抗vWF的單克隆抗體包被酶標(biāo)反應(yīng)板，加入去除FⅧ的待測(cè)血漿，形成抗vWF-vWF的復(fù)合物，再加入一定濃度的重組FⅧ，然后通過ELISA定量vWF結(jié)合的FⅧ量，結(jié)果以對(duì)照血漿的百分比表示。第一節(jié)血管壁和血管內(nèi)皮細(xì)胞的檢驗(yàn)二、血管性血友病因子

（四）vWF多聚體分析【實(shí)驗(yàn)原理】用SDS瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)vWF的功能多聚體，然后通過放射自顯影或Westernblotting鑒定和分析各種多聚體區(qū)帶。（五）基因診斷【實(shí)驗(yàn)原理】常用PCR和突變分析檢測(cè)vWF的基因缺陷。第一節(jié)血管壁和血管內(nèi)皮細(xì)胞的檢驗(yàn)二、血管性血友病因子

【參考區(qū)間】（1）血漿vWF:Ag(血凝分析儀檢測(cè))：41.1%～125.9%(O型)；61.3%～157.8%(A+B+AB型)（2）血漿vWF:A(血凝分析儀檢測(cè))：38.0%～125.2%(O型)；49.2%～169.7%(A+B+AB型)（3）血漿vWF:Rc:70%～150%；

vWF:CBc:;vWF:FⅧBC：RIPA：0.5g/L，Ris＜20%；1.5g/LRis＞60%第一節(jié)血管壁和血管內(nèi)皮細(xì)胞的檢驗(yàn)二、血管性血友病因子

【臨床意義】（1）遺傳性或獲得性血管性血友?。╲WD）（2）血栓性疾病（3）急性時(shí)相反應(yīng)第一節(jié)血管壁和血管內(nèi)皮細(xì)胞的檢驗(yàn)二、血管性血友病因子

【應(yīng)用評(píng)價(jià)】（1）在vWF檢測(cè)中，vWF：Ag的定量最常用（2）vWF：RC和RIPA是最常用的vWF功能試驗(yàn)，vWF多聚體分析是診斷vWD最為特異的試驗(yàn)

三、血漿內(nèi)皮素-1

【實(shí)驗(yàn)原理】ELISA雙抗體夾心法測(cè)定含量

【參考區(qū)間】

血漿ET-1＜5ng/L(ELISA法)第一節(jié)血管壁和血管內(nèi)皮細(xì)胞的檢驗(yàn)【臨床意義】增高：心絞痛、心肌梗死、缺血性腦血管病、原發(fā)性高血壓病、高脂蛋白血癥、腎功能衰竭、肺動(dòng)脈高壓休克及DIC等?！緫?yīng)用評(píng)價(jià)】可作為反應(yīng)血管內(nèi)皮損傷程度的一項(xiàng)指標(biāo)，用于心血管病患者的療效判斷、預(yù)后估計(jì)等。第一節(jié)血管壁和血管內(nèi)皮細(xì)胞的檢驗(yàn)

三、血漿內(nèi)皮素-1

四、血漿血栓調(diào)節(jié)蛋白（thrombomodulin，TM）

（一）血漿血栓調(diào)節(jié)蛋白抗原含量（TM：Ag）測(cè)定

【實(shí)驗(yàn)原理】ELISA法或放射免疫分析法（RIA）【參考區(qū)間】血漿TM:Ag20～35μg（RIA）第一節(jié)血管壁和血管內(nèi)皮細(xì)胞的檢驗(yàn)（二）血漿TM活性測(cè)定【實(shí)驗(yàn)原理】通過自動(dòng)凝血分析儀動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)吸光度的變化量可測(cè)定TM的活性?！緟⒖紖^(qū)間】血漿TM:A68%～120%【臨床意義】升高與損傷程度相關(guān)；減低見于TM缺乏癥,患者血栓性疾病發(fā)病率高。。【應(yīng)用評(píng)價(jià)】可作為血管內(nèi)皮損傷的最佳標(biāo)志物之一。第一節(jié)血管壁和血管內(nèi)皮細(xì)胞的檢驗(yàn)四、血漿血栓調(diào)節(jié)蛋白（thrombomodulin，TM）

五、血漿6-酮-前列腺素F1α和去甲基6-酮-前列腺素F1α

【實(shí)驗(yàn)原理】ELISA競爭法

【參考區(qū)間】

1.血漿6-keto-PGF1α：10.6～35.2ng/L2.血漿DM-6-keto-PGF1α：10.9～43.3ng/L3.尿液DM-6-keto-PGF1α：128～172ng/mg(尿肌酐)第一節(jié)血管壁和血管內(nèi)皮細(xì)胞的檢驗(yàn)【臨床意義】減低見于先天性花生四烯酸代謝缺陷或口服阿司匹林、血栓