電化學(xué)發(fā)光免疫分析法培訓(xùn)課件

免疫分析基于抗原和抗體的特異性反應(yīng)進行檢測的一種手段；免疫標(biāo)記技術(shù)是將一些既易測定又具有高度敏感性的物質(zhì)標(biāo)記到特異性抗原或抗體分子上，通過這些標(biāo)記物的增強放大效應(yīng)來顯示反應(yīng)系統(tǒng)中抗原或抗體的性質(zhì)與含量。免疫學(xué)檢測歷史演進放射免疫檢測（興起于20世紀70年代，現(xiàn)仍普遍使用于縣級以上醫(yī)院）；酶聯(lián)免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構(gòu)普遍使用）；以化學(xué)發(fā)光為代表的光生物學(xué)標(biāo)記及免疫檢測技術(shù)（20世紀90年代開始推廣使用，產(chǎn)品步入成長期）三個階段。免疫分析法發(fā)光和化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光免疫分析法電化學(xué)發(fā)光電化學(xué)發(fā)光免疫分析法發(fā)光現(xiàn)象螢火蟲發(fā)光深海魚發(fā)光發(fā)光分類光照發(fā)光:發(fā)光劑經(jīng)短波長入射光照射后進入激發(fā)態(tài)，當(dāng)回復(fù)至基態(tài)時發(fā)出較長波長的可見光。生物發(fā)光：反應(yīng)底物在熒光素酶的催化下利用ATP產(chǎn)能，生成激發(fā)態(tài)的氧化熒光素，后者在回復(fù)到基態(tài)時多余的能量以光子形式放出?；瘜W(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光是指在某些特殊的化學(xué)反應(yīng)中，反應(yīng)的中間體或產(chǎn)物由于吸收了反應(yīng)釋放的化學(xué)能而處于電子激發(fā)態(tài)，當(dāng)其回到基態(tài)時伴隨產(chǎn)生的光輻射現(xiàn)象。因此ECL反應(yīng)易精確控制，具有靈活性。這種方法兼有發(fā)光分析的高靈敏度和抗原抗體反應(yīng)的高度特異性。酶聯(lián)免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構(gòu)普遍使用）；ECLI是電化學(xué)發(fā)光(ECL)和免疫測定相結(jié)合的產(chǎn)物；ECLIA檢測流程圖一（雙抗體夾心的形成）化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）分類酶聯(lián)免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構(gòu)普遍使用）；ECLI是目前最先進的標(biāo)記免疫測定技術(shù)之一。其特點是反應(yīng)面積比板式擴大20－30倍，吸附效率高；以化學(xué)發(fā)光為代表的光生物學(xué)標(biāo)記及免疫檢測技術(shù)（20世紀90年代開始推廣使用，產(chǎn)品步入成長期）三個階段。三聯(lián)吡啶釕

（[Ru(bpy)3]2+）特點ECLIA檢測流程圖二（生物素與親和素結(jié)合）ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發(fā)光反應(yīng)，而CL是通過化合物混合啟動發(fā)光反應(yīng)。免疫標(biāo)記技術(shù)是將一些既易測定又具有高度敏感性的物質(zhì)標(biāo)記到特異性抗原或抗體分子上，通過這些標(biāo)記物的增強放大效應(yīng)來顯示反應(yīng)系統(tǒng)中抗原或抗體的性質(zhì)與含量。ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電化學(xué)反應(yīng)）電致化學(xué)發(fā)光（ECL)光照發(fā)光:發(fā)光劑經(jīng)短波長入射光照射后進入激發(fā)態(tài)，當(dāng)回復(fù)至基態(tài)時發(fā)出較長波長的可見光。CLIA是將化學(xué)發(fā)光分析和免疫反應(yīng)相結(jié)合而建立的一種新的免疫分析技術(shù)。ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發(fā)光反應(yīng)，而CL是通過化合物混合啟動發(fā)光反應(yīng)。化學(xué)發(fā)光

Chemiluminescence(CL)化學(xué)發(fā)光是指在某些特殊的化學(xué)反應(yīng)中，反應(yīng)的中間體或產(chǎn)物由于吸收了反應(yīng)釋放的化學(xué)能而處于電子激發(fā)態(tài)，當(dāng)其回到基態(tài)時伴隨產(chǎn)生的光輻射現(xiàn)象。

化學(xué)發(fā)光反應(yīng)包括兩個關(guān)鍵步驟，即化學(xué)激發(fā)和發(fā)光。化學(xué)發(fā)光反應(yīng)能級圖[Ru(bpy)3]2+分子量小，空間位阻小，即便小分子的核酸也能標(biāo)記，使檢測的菜單大大豐富，更重要的是為其檢測菜單的開發(fā)前景提供了廣闊空間。三聯(lián)吡啶釕

（[Ru(bpy)3]2+）特點雖然化學(xué)發(fā)光具備很高的特異性和很小的干擾，但化學(xué)分析本身的不特異性，制約了整個方法的使用?；瘜W(xué)發(fā)光是指在某些特殊的化學(xué)反應(yīng)中，反應(yīng)的中間體或產(chǎn)物由于吸收了反應(yīng)釋放的化學(xué)能而處于電子激發(fā)態(tài)，當(dāng)其回到基態(tài)時伴隨產(chǎn)生的光輻射現(xiàn)象?；瘜W(xué)發(fā)光是指在某些特殊的化學(xué)反應(yīng)中，反應(yīng)的中間體或產(chǎn)物由于吸收了反應(yīng)釋放的化學(xué)能而處于電子激發(fā)態(tài)，當(dāng)其回到基態(tài)時伴隨產(chǎn)生的光輻射現(xiàn)象。“鏈霉親和素-生物素”是是具有很強的非共價相互作用的一對化合物，具有牢固而特異的結(jié)合，應(yīng)用此放大系統(tǒng)，使檢測的靈敏度大大提高；電致化學(xué)發(fā)光（ECL)化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）分類這種方法兼有發(fā)光分析的高靈敏度和抗原抗體反應(yīng)的高度特異性。測定范圍寬，可達7個數(shù)量級。[Ru(bpy)3]2+衍生物與免疫球蛋白結(jié)合的分子比超過20仍不會影響抗體的可溶性和免疫活性；發(fā)光酶免疫測定（chemiluminescenceenzymeimmunoasssay，CLEIA）CLIA是將化學(xué)發(fā)光分析和免疫反應(yīng)相結(jié)合而建立的一種新的免疫分析技術(shù)。ECL分析中采用[Ru(bpy)3]2+作為標(biāo)記物，其活化衍生物是[Ru(bpy)3]2+＋N羥基琥珀酸胺酯（NHS），該衍生物具有水溶性，且高度穩(wěn)定，保證電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的高效和穩(wěn)定，而且避免了本底噪聲的干擾。這種方法兼有發(fā)光分析的高靈敏度和抗原抗體反應(yīng)的高度特異性。因此ECL反應(yīng)易精確控制，具有靈活性。利用氧化鐵的磁性，使用電磁場分離結(jié)合態(tài)和游離態(tài)，方便迅速，實現(xiàn)了精確的全自動化；電致化學(xué)發(fā)光(ECL)是通過在電極上施加一定波形的電壓或電流信號進行電解反應(yīng)的產(chǎn)物之間或與體系中共存組分反應(yīng)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光的現(xiàn)象。

化學(xué)發(fā)光分析根據(jù)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)在某一時刻的發(fā)光強度或反應(yīng)的發(fā)光總量來確定反應(yīng)中相應(yīng)組分含量的分析方法，稱為化學(xué)發(fā)光分析。化學(xué)發(fā)光分析優(yōu)點化學(xué)發(fā)光具有熒光的特異性，同時不需要激發(fā)光，就避免了熒光分析中激發(fā)光雜散光的影響有很高的靈敏度，并且不象放射分析那樣存在強烈的環(huán)境污染和健康危害，是一種非常優(yōu)秀的定量分析方法。化學(xué)發(fā)光分析缺點雖然化學(xué)發(fā)光具備很高的特異性和很小的干擾，但化學(xué)分析本身的不特異性，制約了整個方法的使用。免疫分析法發(fā)光和化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光免疫分析法電化學(xué)發(fā)光電化學(xué)發(fā)光免疫分析法化學(xué)發(fā)光免疫分析

chemiluminescenceimmunoassay（CLIA）CLIA是將化學(xué)發(fā)光分析和免疫反應(yīng)相結(jié)合而建立的一種新的免疫分析技術(shù)。這種方法兼有發(fā)光分析的高靈敏度和抗原抗體反應(yīng)的高度特異性?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）分類按分離方法不同分微粒子化學(xué)發(fā)光免疫測定磁顆粒化學(xué)發(fā)光免疫測定化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）分類按發(fā)光劑不同分為發(fā)光酶免疫測定（chemiluminescenceenzymeimmunoasssay，CLEIA）化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)（chemiluminescenceimmunoassay，CLIA）電化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)（electro－chemiluminescenceimmunoassay，ECLI）免疫分析法發(fā)光和化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光免疫分析法電化學(xué)發(fā)光電化學(xué)發(fā)光免疫分析法電致化學(xué)發(fā)光（ECL)電致化學(xué)發(fā)光(ECL)是通過在電極上施加一定波形的電壓或電流信號進行電解反應(yīng)的產(chǎn)物之間或與體系中共存組分反應(yīng)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光的現(xiàn)象。電致化學(xué)發(fā)光（ECL)ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發(fā)光反應(yīng)，而CL是通過化合物混合啟動發(fā)光反應(yīng)。因此ECL反應(yīng)易精確控制，具有靈活性。電化學(xué)發(fā)光劑定義：指通過在電極表面進行電化學(xué)反應(yīng)而發(fā)出光的物質(zhì)。特點反應(yīng)在電極進行化學(xué)發(fā)光劑：三聯(lián)毗啶釕電子供體為：三丙胺（TPA）三聯(lián)毗啶釕分子結(jié)構(gòu)圖電致化學(xué)發(fā)光（ECL)在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，用電化學(xué)發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕[Ru(bpy)3]2+標(biāo)記Ab，通過Ag-Ab反應(yīng)和磁珠分離技術(shù)，根據(jù)三聯(lián)吡啶釕在電極上發(fā)出的光強度對待測的Ag或Ab進行定量/定性。電化學(xué)發(fā)光免疫分析

(Electro-ChemiluminescenceImmunoassay,ECLI)ECLI是電化學(xué)發(fā)光(ECL)和免疫測定相結(jié)合的產(chǎn)物；測定范圍寬，可達7個數(shù)量級。磁顆?；瘜W(xué)發(fā)光免疫測定因此ECL反應(yīng)易精確控制，具有靈活性?；瘜W(xué)發(fā)光反應(yīng)包括兩個關(guān)鍵步驟，即化學(xué)激發(fā)和發(fā)光。化學(xué)發(fā)光是指在某些特殊的化學(xué)反應(yīng)中，反應(yīng)的中間體或產(chǎn)物由于吸收了反應(yīng)釋放的化學(xué)能而處于電子激發(fā)態(tài)，當(dāng)其回到基態(tài)時伴隨產(chǎn)生的光輻射現(xiàn)象。三聯(lián)吡啶釕

（[Ru(bpy)3]2+）特點這種方法兼有發(fā)光分析的高靈敏度和抗原抗體反應(yīng)的高度特異性?！版溍褂H和素-生物素”是是具有很強的非共價相互作用的一對化合物，具有牢固而特異的結(jié)合，應(yīng)用此放大系統(tǒng)，使檢測的靈敏度大大提高；酶聯(lián)免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構(gòu)普遍使用）；化學(xué)發(fā)光具有熒光的特異性，同時不需要激發(fā)光，就避免了熒光分析中激發(fā)光雜散光的影響有很高的靈敏度，酶聯(lián)免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構(gòu)普遍使用）；電化學(xué)發(fā)光免疫分析

(Electro-ChemiluminescenceImmunoassay,ECLI)光照發(fā)光:發(fā)光劑經(jīng)短波長入射光照射后進入激發(fā)態(tài)，當(dāng)回復(fù)至基態(tài)時發(fā)出較長波長的可見光。ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電化學(xué)反應(yīng)）操作簡單，耗時短，易于自動化。電致化學(xué)發(fā)光（ECL)雖然化學(xué)發(fā)光具備很高的特異性和很小的干擾，但化學(xué)分析本身的不特異性，制約了整個方法的使用。三聯(lián)吡啶釕

（[Ru(bpy)3]2+

）特點ECL分析中采用[Ru(bpy)3]2+作為標(biāo)記物，其活化衍生物是[Ru(bpy)3]2+＋N羥基琥珀酸胺酯（NHS），該衍生物具有水溶性，且高度穩(wěn)定，保證電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的高效和穩(wěn)定，而且避免了本底噪聲的干擾。三聯(lián)吡啶釕（[Ru(bpy)3]2+

）特點[Ru(bpy)3]2+衍生物與免疫球蛋白結(jié)合的分子比超過20仍不會影響抗體的可溶性和免疫活性；[Ru(bpy)3]2+分子量小，空間位阻小，即便小分子的核酸也能標(biāo)記，使檢測的菜單大大豐富，更重要的是為其檢測菜單的開發(fā)前景提供了廣闊空間。電化學(xué)發(fā)光原理圖基態(tài)激發(fā)態(tài)不穩(wěn)定免疫分析法發(fā)光和化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光免疫分析法電化學(xué)發(fā)光電化學(xué)發(fā)光免疫分析法電化學(xué)發(fā)光免疫分析

(Electro-ChemiluminescenceImmunoassay,ECLI)ECLI是繼EIA、RIA、FIA、時間分辨熒光免疫技術(shù)（TRFIA）之后的新一代標(biāo)記免疫測定技術(shù)；ECLI是電化學(xué)發(fā)光(ECL)和免疫測定相結(jié)合的產(chǎn)物；ECLI是目前最先進的標(biāo)記免疫測定技術(shù)之一。ECLI原理在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，用電化學(xué)發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕[Ru(bpy)3]2+標(biāo)記Ab，通過Ag-Ab反應(yīng)和磁珠分離技術(shù)，根據(jù)三聯(lián)吡啶釕在電極上發(fā)出的光強度對待測的Ag或Ab進行定量/定性。ECLIA檢測流程圖一（雙抗體夾心的形成）“鏈霉親和素-生物素”是是具有很強的非共價相互作用的一對化合物，具有牢固而特異的結(jié)合，應(yīng)用此放大系統(tǒng)，使檢測的靈敏度大大提高；ECLIA檢測流程圖一（雙抗體夾心的形成）化學(xué)發(fā)光是指在某些特殊的化學(xué)反應(yīng)中，反應(yīng)的中間體或產(chǎn)物由于吸收了反應(yīng)釋放的化學(xué)能而處于電子激發(fā)態(tài)，當(dāng)其回到基態(tài)時伴隨產(chǎn)生的光輻射現(xiàn)象。ECLI是目前最先進的標(biāo)記免疫測定技術(shù)之一。電致化學(xué)發(fā)光（ECL)電致化學(xué)發(fā)光（ECL)微粒子化學(xué)發(fā)光免疫測定免疫標(biāo)記技術(shù)是將一些既易測定又具有高度敏感性的物質(zhì)標(biāo)記到特異性抗原或抗體分子上，通過這些標(biāo)記物的增強放大效應(yīng)來顯示反應(yīng)系統(tǒng)中抗原或抗體的性質(zhì)與含量。ECLI是電化學(xué)發(fā)光(ECL)和免疫測定相結(jié)合的產(chǎn)物；標(biāo)記物的再循環(huán)利用，使發(fā)光時間更長、強度更高、易于測定。ECLIA檢測流程圖五ECLIA檢測流程圖五ECLI是電化學(xué)發(fā)光(ECL)和免疫測定相結(jié)合的產(chǎn)物；高度敏感，可達pg／ml或pmol水平；ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電化學(xué)反應(yīng)）ECL分析中采用[Ru(bpy)3]2+作為標(biāo)記物，其活化衍生物是[Ru(bpy)3]2+＋N羥基琥珀酸胺酯（NHS），該衍生物具有水溶性，且高度穩(wěn)定，保證電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的高效和穩(wěn)定，而且避免了本底噪聲的干擾。在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，用電化學(xué)發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕[Ru(bpy)3]2+標(biāo)記Ab，通過Ag-Ab反應(yīng)和磁珠分離技術(shù)，根據(jù)三聯(lián)吡啶釕在電極上發(fā)出的光強度對待測的Ag或Ab進行定量/定性。磁顆?；瘜W(xué)發(fā)光免疫測定光照發(fā)光:發(fā)光劑經(jīng)短波長入射光照射后進入激發(fā)態(tài)，當(dāng)回復(fù)至基態(tài)時發(fā)出較長波長的可見光。測定范圍寬，可達7個數(shù)量級。ECLIA檢測流程圖二（生物素與親和素結(jié)合）化學(xué)發(fā)光是指在某些特殊的化學(xué)反應(yīng)中，反應(yīng)的中間體或產(chǎn)物由于吸收了反應(yīng)釋放的化學(xué)能而處于電子激發(fā)態(tài)，當(dāng)其回到基態(tài)時伴隨產(chǎn)生的光輻射現(xiàn)象。三聯(lián)吡啶釕

（[Ru(bpy)3]2+）特點光照發(fā)光:發(fā)光劑經(jīng)短波長入射光照射后進入激發(fā)態(tài)，當(dāng)回復(fù)至基態(tài)時發(fā)出較長波長的可見光。CLIA是將化學(xué)發(fā)光分析和免疫反應(yīng)相結(jié)合而建立的一種新的免疫分析技術(shù)。雖然化學(xué)發(fā)光具備很高的特異性和很小的干擾，但化學(xué)分析本身的不特異性，制約了整個方法的使用。8μm的聚苯乙烯微粒。電致化學(xué)發(fā)光（ECL)ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電化學(xué)反應(yīng)）“鏈霉親和素-生物素”是是具有很強的非共價相互作用的一對化合物，具有牢固而特異的結(jié)合，應(yīng)用此放大系統(tǒng)，使檢測的靈敏度大大提高；ECLIA檢測流程圖一（雙抗體夾心的形成）其特點是反應(yīng)面積比板式擴大20－30倍，吸附效率高；ECLIA檢測流程圖一（雙抗體夾心的形成）電化學(xué)發(fā)光免疫分析

(Electro-ChemiluminescenceImmunoassay,ECLI)免疫標(biāo)記技術(shù)是將一些既易測定又具有高度敏感性的物質(zhì)標(biāo)記到特異性抗原或抗體分子上，通過這些標(biāo)記物的增強放大效應(yīng)來顯示反應(yīng)系統(tǒng)中抗原或抗體的性質(zhì)與含量。測定范圍寬，可達7個數(shù)量級。[Ru(bpy)3]2+衍生物與免疫球蛋白結(jié)合的分子比超過20仍不會影響抗體的可溶性和免疫活性；化學(xué)發(fā)光劑：三聯(lián)毗啶釕電子供體為：三丙胺（TPA）電致化學(xué)發(fā)光（ECL)電化學(xué)發(fā)光免疫分析

(Electro-ChemiluminescenceImmunoassay,ECLI)ECLIA體系結(jié)構(gòu)圖ECLIA檢測流程圖三（磁珠吸引吸附于電極表面）ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電化學(xué)反應(yīng)）ECLIA檢測流程圖五（撤消磁場沖洗磁珠）方法評價采用的固相載體是帶有磁性的直徑約2.8μm的聚苯乙烯微粒。其特點是反應(yīng)面積比板式擴大20－30倍，吸附效率高；在液體中形成均勻的懸液，參與反應(yīng)時類似液相，反應(yīng)速度大大加快；測定范圍寬，可達7個數(shù)量級。放射免疫檢測（興起于20世紀70年代，現(xiàn)仍普遍使用于縣級以上醫(yī)院）；電化學(xué)發(fā)光免疫分析

(Electro-ChemiluminescenceImmunoassay,ECLI)ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發(fā)光反應(yīng)，而CL是通過化合物混合啟動發(fā)光反應(yīng)。標(biāo)記物的再循環(huán)利用，使發(fā)光時間更長、強度更高、易于測定?；瘜W(xué)發(fā)光具有熒光的特異性，同時不需要激發(fā)光，就避免了熒光分析中激發(fā)光雜散光的影響有很高的靈敏度，電致化學(xué)發(fā)光（ECL)化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）分類化學(xué)發(fā)光具有熒光的特異性，同時不需要激發(fā)光，就避免了熒光分析中激發(fā)光雜散光的影響有很高的靈敏度，化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）分類酶聯(lián)免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構(gòu)普遍使用）；CLIA是將化學(xué)發(fā)光分析和免疫反應(yīng)相結(jié)合而建立的一種新的免疫分析技術(shù)。ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發(fā)光反應(yīng)，而CL是通過化合物混合啟動發(fā)光反應(yīng)。雖然化學(xué)發(fā)光具備很高的特異性和很小的干擾，但化學(xué)分析本身的不特異性，制約了整個方法的使用。放射免疫檢測（興起于20世紀70年代，現(xiàn)仍普遍使用于縣級以上醫(yī)院）；ECLI是電化學(xué)發(fā)光(ECL)和免疫測定相結(jié)合的產(chǎn)物；免疫標(biāo)記技術(shù)是將一些既易測定又具有高度敏感性的物質(zhì)標(biāo)記到特異性抗原或抗體分子上，通過這些標(biāo)記物的增強放大效應(yīng)來顯示反應(yīng)系統(tǒng)中抗原或抗體的性質(zhì)與含量。因此ECL反應(yīng)易精確控制，具有靈活性。ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電化學(xué)反應(yīng)）三聯(lián)吡啶釕

（[Ru(bpy)3]2+）特點方法評價“鏈霉親和素-生物素”是是具有很強的非共價相互作用的一對化合物，具有牢固而特異的結(jié)合，應(yīng)用此放大系統(tǒng)，使檢測的靈敏度大大提高；方法評價利用氧化鐵的磁性，使用電磁場分離結(jié)合態(tài)和游離態(tài)，方便迅速，實現(xiàn)了精確的全自動化；標(biāo)記物的再循環(huán)利用，使發(fā)光時間更長、強度更高、易于測定。ELIA優(yōu)越性高度敏感，可達pg／ml或pmol水平；特異性強，重復(fù)性好，CV＜5％。測定范圍寬，可達7個數(shù)量級。試劑穩(wěn)定，無毒害，無污染，有效期長，達數(shù)月甚至數(shù)年。操作簡單，耗時短，易于自動化。在對環(huán)保很重視的國家，CLIA成了取代RIA的首選方法。臨床應(yīng)用激素腫瘤標(biāo)記物內(nèi)分泌功能傳染性疾病其它如VB12、葉酸、鐵蛋白、肌鈣蛋白、肌紅蛋白、酶、脂肪酸、維生素和藥物等多種檢測項目。

謝謝！深海魚發(fā)光發(fā)光分類光照發(fā)光:發(fā)光劑經(jīng)短波長入射光照射后進入激發(fā)態(tài)，當(dāng)回復(fù)至基態(tài)時發(fā)出較長波長的可見光。生物發(fā)光：反應(yīng)底物在熒光素酶的催化下利用ATP產(chǎn)能，生成激發(fā)態(tài)的氧化熒光素，后者在回復(fù)到基態(tài)時多余的能量以光子形式放出。化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光分析缺點雖然化學(xué)發(fā)光具備很高的特異性和很小的干擾，但化學(xué)分析本身的不特異性，制約了整個方法的使用。電致化學(xué)發(fā)光（ECL)ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發(fā)光反應(yīng)，而CL是通過化合物混合啟動發(fā)光反應(yīng)。因此ECL反應(yīng)易精確控制，具有靈活性。放射免疫檢測（興起于20世紀70年代，現(xiàn)仍普遍使用于縣級以上醫(yī)院）；并且不象放射分析那樣存在強烈的環(huán)境污染和健康危害，是一種非常優(yōu)秀的定量分析方法。生物發(fā)光：反應(yīng)底物在熒光素酶的催化下利用ATP產(chǎn)能，生成激發(fā)態(tài)的氧化熒光素，后者在回復(fù)到基態(tài)時多余的能量以光子形式放出。雖然化學(xué)發(fā)光具備很高的特異性和很小的干擾，但化學(xué)分析本身的不特異性，制約了整個方法的使用。光照發(fā)光:發(fā)光劑經(jīng)短波長入射光照射后進入激發(fā)態(tài)，當(dāng)回復(fù)至基態(tài)時發(fā)出較長波長的可見光。8μm的聚苯乙烯微粒。酶聯(lián)免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構(gòu)普遍使用）；化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）分類電化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)（electro－chemiluminescenceimmunoassay，ECLI）電致化學(xué)發(fā)光（ECL)電化學(xué)發(fā)光免疫分析

(Electro-ChemiluminescenceImmunoassay,ECLI)電致化學(xué)發(fā)光（ECL)利用氧化鐵的磁性，使用電磁場分離結(jié)合態(tài)和游離態(tài)，方便迅速，實現(xiàn)了精確的全自動化；酶聯(lián)免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構(gòu)普遍使用）；ECLIA檢測流程圖一（雙抗體夾心的形成）化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）分類電致化學(xué)發(fā)光(ECL)是通過在電極上施加一定波形的電壓或電流信號進行電解反應(yīng)的產(chǎn)物之間或與體系中共存組分反應(yīng)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光的現(xiàn)象。ECLI是目前最先進的標(biāo)記免疫測定技術(shù)之一。ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電化學(xué)反應(yīng)）在對環(huán)保很重視的國家，CLIA成了取代RIA的首選方法。三聯(lián)吡啶釕

（[Ru(bpy)3]2+

）特點ECL分析中采用[Ru(bpy)3]2+作為標(biāo)記物，其活化衍生物是[Ru(bpy)3]2+＋N羥基琥珀酸胺酯（NHS），該衍生物具有水溶性，且高度穩(wěn)定，保證電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的高效和穩(wěn)定，而且避免了本底噪聲的干擾。電化學(xué)發(fā)光免疫分析

(Electro-ChemiluminescenceImmunoassay,ECLI)ECLI是繼EIA、RIA、FIA、時間分辨熒光免疫技術(shù)（TRFIA）之后的新一代標(biāo)記免疫測定技術(shù)；ECLI是電化學(xué)發(fā)光(ECL)和免疫測定相結(jié)合的產(chǎn)物；ECLI是目前最先進的標(biāo)記免疫測定技術(shù)之一。ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電化學(xué)反應(yīng)）利用氧化鐵的磁性，使用電磁場分離結(jié)合態(tài)和游離態(tài)，方便迅速，實現(xiàn)了精確的全自動化；ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發(fā)光反應(yīng)，而CL是通過化合物混合啟動發(fā)光反應(yīng)。光照發(fā)光:發(fā)光劑經(jīng)短波長入射光照射后進入激發(fā)態(tài)，當(dāng)回復(fù)至基態(tài)時發(fā)出較長波長的可見光。ECLIA檢測流程圖一（雙抗體夾心的形成）ECL分析中采用[Ru(bpy)3]2+作為標(biāo)記物，其活化衍生物是[Ru(bpy)3]2+＋N羥基琥珀酸胺酯（NHS），該衍生物具有水溶性，且高度穩(wěn)定，保證電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的高效和穩(wěn)定，而且避免了本底噪聲的干擾。CLIA是將化學(xué)發(fā)光分析和免疫反應(yīng)相結(jié)合而建立的一種新的免疫分析技術(shù)。操作簡單，耗時短，易于自動化。ECLIA檢測流程圖五化學(xué)發(fā)光是指在某些特殊的化學(xué)反應(yīng)中，反應(yīng)的中間體或產(chǎn)物由于吸收了反應(yīng)釋放的化學(xué)能而處于電子激發(fā)態(tài)，當(dāng)其回到基態(tài)時伴隨產(chǎn)生的光輻射現(xiàn)象?！版溍褂H和素-生物素”是是具有很強的非共價相互作用的一對化合物，具有牢固而特異的結(jié)合，應(yīng)用此放大系統(tǒng)，使檢測的靈敏度大大提高；特異性強，重復(fù)性好，CV＜5％。以化學(xué)發(fā)光為代表的光生物學(xué)標(biāo)記及免疫檢測技術(shù)（20世紀90年代開始推廣使用，產(chǎn)品步入成長