電子版五門配套課件藥分chape

第九章二氫吡啶類鈣通道阻滯藥物的分析學(xué)習(xí)要求：1.掌握：二氫吡啶類藥物的基本結(jié)構(gòu)及主要理化性質(zhì)；結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與分析方法間的關(guān)系；鈰量法的原理、方法及注意事項(xiàng)。2.熟悉：二氫吡啶類藥物的化學(xué)鑒別反應(yīng)及有關(guān)物質(zhì)檢查的方法；3.了解：二氫吡啶類藥物其他的鑒別試驗(yàn)及含量測(cè)定方法、及體內(nèi)分析中樣品的處理方法。二氫吡啶類鈣通道阻滯藥物也稱鈣拮抗劑，廣泛應(yīng)用于缺血性心血管疾病，高血壓、腦血管疾病等的治療。第一節(jié)

結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、常見藥物的結(jié)構(gòu)二氫吡啶類藥物的基本骨架：CH3R12R

OOCCOOR3R4R5HN6

1

25

4

3為活性必需，變成吡啶環(huán)或六氫吡啶環(huán)活性消失為活性必需，若為乙?；?/p>

或氰基活性

降低，若為

硝基則激活

鈣通道鄰、間位有吸電子基團(tuán)活性較佳，對(duì)位取代活性下降取代基與活性關(guān)系次序：H＜甲基＜環(huán)烷基＜苯基或取代苯基影響作用部位，3,5位取代酯基不同，為手性中心。HNCH3CH3CH3OOCCOOCH3NO2硝苯地平HNCH3CH3CH3CH2OOCCOOCH3NO2尼群地平HNCH3CH3(CH3)2CHOOCCOO(CH2)2OCH3NO2尼莫地平HNCH3H2NCH2CH2OCH2CH3CH2OOCCOOCH3ClSO3H苯磺酸氨氯地平HNCH3CH3CH3CH2OOCClCOOCH3Cl非洛地平激活開放鈣通道的二氫吡啶類化合物HNOOFNO2FFHNOOOOOFF

FHNNO2OONONBayK8644PN202791CGP28392二、主要理化性質(zhì)1.

二氫吡啶環(huán)的還原性氧化還原反應(yīng)鑒別或氧化還原滴定法含量測(cè)定2.

硝基的氧化性苯環(huán)上大多有硝基，具有氧化性，可被還原劑還原為芳伯氨基，可用重氮化-偶合反應(yīng)鑒別。3.

二氫吡啶環(huán)氨基質(zhì)子解離性二氫吡啶類藥物與堿作用后，1,4-位氫可以發(fā)生解離，形成共軛環(huán)發(fā)生顏色變化，可以進(jìn)行鑒別。穩(wěn)定性二氫吡啶類藥物遇光極不穩(wěn)定，易發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)，因此要避光保存此類藥物。旋光性本類藥物的C4位多為手性碳原子，具有旋光性。吸收光譜特性本類藥物具有芳環(huán)，有明顯的紫外吸收特征和紅外特征第二節(jié)鑒別試驗(yàn)一、化學(xué)鑒別法（一）與亞鐵鹽反應(yīng)二氫吡啶類藥物苯環(huán)上硝基具有氧化性，可將氫氧化亞鐵氧化為紅棕色氫氧化鐵沉淀。ChP2010尼莫地平的鑒別：取本品約20mg，加乙醇2ml溶解后，加新制的5%硫酸亞鐵銨溶液2ml，1.5mol/L硫酸溶液1滴與0.5mol/L氫氧化鉀溶液1ml，強(qiáng)烈振搖，1分鐘內(nèi)沉淀由灰綠色變?yōu)榧t棕色。（二）與氫氧化鈉試液反應(yīng)ChP2010硝苯地平的鑒別：取本品約25mg，加丙酮1ml溶解，加20%

氫氧化鈉溶液3～5滴，振搖，溶液顯橙紅色。（三）沉淀反應(yīng)ChP2010尼莫地平注射液的鑒別：取本品適量（約相當(dāng)于尼莫地平20mg），置分液漏斗中，加乙醚30ml振搖提取，靜置，分取乙醚層，置水浴上蒸干，放冷，殘?jiān)右掖?ml，攪拌使溶解，移至試管中，加1%氯化汞溶液3ml，即發(fā)生白色沉淀。（四）重氮化-偶合反應(yīng)BP2010硝苯地平的鑒別：取本品25mg，加10ml鹽酸-水-乙醇混合溶液（1.5∶3.5

∶5），溫?zé)?，加入鋅粒0.5g，放置

5分鐘，濾過(guò)，濾液加亞硝酸鈉溶液（10g/L）5ml，放置2分鐘，再加入氨基磺酸銨溶液（50g/L）2ml，搖勻，加入鹽酸萘乙二胺溶液（5g/L）2ml，即顯紅色（持續(xù)5分鐘以上）。二、分光光度法（一）紫外分光光度法ChP2010尼群地平軟膠囊的鑒別：避光操作。取本品的內(nèi)容物約1g，置100ml量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，取10ml，置100ml量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，在

353nm與303nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，在353nm與303nm的吸光度比值應(yīng)為2.1～2.3。（二）紅外分光光度法ChP2010尼群地平片的鑒別：避光操作。取本品（約相當(dāng)于尼群地平

100mg），研細(xì)，加丙酮10ml，振搖使溶解，濾過(guò)，濾液暗處揮干，殘?jiān)?jīng)減壓干燥，依法測(cè)定。本品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照的圖譜（光譜集600）一致。五、色譜法（一）高效液相色譜法ChP2010尼莫地平片的鑒別：在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間一致。（二）薄層色譜法BP2010硝苯地平的鑒別：取本品加甲醇制成每1ml中約含1mg的溶液，作為供試品溶液；另取硝苯地平對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml約含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述兩種溶液各5ml，分別點(diǎn)于同一硅膠F254薄層板上，以乙酸乙酯-環(huán)己烷（40∶60）為展開劑，展開，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視，供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的位置和顏色應(yīng)與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)一致。第三節(jié)有關(guān)物質(zhì)的檢查二氫吡啶類藥物遇光極不穩(wěn)定，易發(fā)生光化學(xué)歧化作用，引入雜質(zhì)，因此各國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)中均規(guī)定在避光條件下進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查，大多采用HPLC法。HCH3

N

CH3CH3OOCCOOCH3NO2CH3

N

CH3CH3OOCCOOCH3NO2[O]或光CH3

N

CH3CH3OOCCOOCH3NO光硝苯地平在光照和氧化劑存在條件下分別生成兩種降解氧化產(chǎn)物：雜質(zhì)I：2,6-二甲基-4-(2-硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯

雜質(zhì)II：2,6-二甲基-4-(2-亞硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯ChP2010硝苯地平有關(guān)物質(zhì)的檢查：避光操作。取本品，精密稱定，加甲醇溶解并定量稀釋制成每1ml中約含1mg的溶液，作為供試品溶液；另取2,6-二甲基-4-(2-硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯(雜質(zhì)Ⅰ)對(duì)照品與2,6-二甲基-4-(2-亞硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯(雜質(zhì)Ⅱ)對(duì)照品，精密稱定，加甲醇溶解并定量稀釋制成每1ml中各約含10μg的混合溶液，作為對(duì)照品貯備液；分別精密量取供試品溶液與對(duì)照品貯備液各適量，用流動(dòng)相定量稀釋制成每1ml中分別含硝苯地平2μg、雜質(zhì)Ⅰ1μg與雜質(zhì)Ⅱ1μg的混合溶液，作為對(duì)照溶液。照高效液相色譜法試驗(yàn)。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(60:40)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為

235nm。取硝苯地平對(duì)照品、雜質(zhì)Ⅰ對(duì)照品與雜質(zhì)Ⅱ?qū)φ掌犯鬟m量，加甲醇溶解并稀釋制成每1ml中各約含

1mg、10μg與10μg的混合溶液，取20μl，注入液相色譜儀，雜質(zhì)Ⅰ峰、雜質(zhì)Ⅱ峰與硝苯地平峰之間的分離度均應(yīng)符合要求。取對(duì)照溶液20μl，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使硝苯地平色譜峰的峰高約為滿量程的50%；再精密量取供試品溶液與對(duì)照溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍。供試品溶液的色譜圖中如有與雜質(zhì)Ⅰ峰、雜質(zhì)Ⅱ峰保留時(shí)間一致的色譜峰，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，均不得過(guò)0.1%；其他單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液中硝苯地平峰面積（0.2%）；雜質(zhì)總量不得過(guò)0.5%。第四節(jié)含量測(cè)定NH一、鈰量法NO2CO2CH3CH3CH3H3COO2Ce(SO4)26HClO4NNO2CO2CH3CH3CH3H3COO2Ce(ClO4)34H2SO4硝苯地平與硫酸鈰反應(yīng)的摩爾比為1∶2。ChP2010硝苯地平的含量測(cè)定：取本品約0.4g，精密稱定，加無(wú)水乙醇50ml，微熱使溶解，加高氯酸溶液（取70%高氯酸8.5ml，加水至100ml）50ml、鄰二氮菲指示液3滴，立即用硫酸鈰滴定液（0.1mol/L）滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，在水浴中加熱至50℃左右，繼續(xù)緩緩滴定至橙紅色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml硫酸鈰滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于17.32mg的C17H18N2O6。二、紫外-可見分光光度法ChP2010尼群地平軟膠囊的含量測(cè)定：避光操作，取本品10粒置小燒杯中，用剪刀剪破嚢殼，加無(wú)水乙醇少量，振搖使溶解后，將內(nèi)容物與嚢殼全部轉(zhuǎn)移至具塞

錐形瓶中，用無(wú)水乙醇反復(fù)沖洗剪刀及小燒杯，洗液并入錐形

瓶中，將錐形瓶密塞，置40℃水浴中加熱15分鐘，并時(shí)時(shí)振搖，將內(nèi)容物移入100ml量瓶中，用無(wú)水乙醇反復(fù)沖洗嚢殼和錐形瓶，洗液并入量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置100ml量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，在353nm的波

長(zhǎng)處測(cè)定吸光度；另取尼群地平對(duì)照品適量，精密稱定，用無(wú)水乙醇溶解并定量稀釋制成1ml中約含20μg的溶液，同法測(cè)定，計(jì)算，即得。三、高效液相色譜法ChP2010尼莫地平分散片的含量測(cè)定：色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-水（35∶38∶27）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為235nm。理論板數(shù)按尼莫地平峰計(jì)算不低于8000，尼莫地平峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。測(cè)定法 避光操作。取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于尼莫地平10mg)，置50ml量瓶中，加流動(dòng)相適量，超聲處理15分鐘使尼莫地平溶解，放冷，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，離心10分鐘(每分鐘3000轉(zhuǎn))，精密量取上清液5ml，置50ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密量取10μl注入液相色

譜儀，記錄色譜圖；另取尼莫地平對(duì)照品，精密稱定，用流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每1ml中約含20mg的溶液，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。第五節(jié)體內(nèi)二氫吡啶類藥物的分析氨氯地平分子結(jié)構(gòu)中含有一個(gè)手性碳原子，故具有一對(duì)光學(xué)異構(gòu)體R-(+)-氨氯地平與S-(-)-氨氯地平，僅S-(-)-氨氯地平具有血管擴(kuò)張作用，其中左旋氨氯地平藥效是消旋氨氯地平的2倍，因此需進(jìn)行血漿中氨氯地平對(duì)映體的手性分離

與立體選擇性藥動(dòng)學(xué)研究。人血漿中氨氯地平對(duì)映體的固相萃取LC-MS/MS法測(cè)定：樣品處理：血漿樣品1.0ml，與1.0ml用流動(dòng)相制備的內(nèi)標(biāo)溶液(10ng/ml)混合后，取1.8ml上載至C18固相萃取柱(萃取柱預(yù)先用含2.5%氨的甲醇1.0ml洗滌2次，再用

5mmol/L醋酸銨溶液1.0ml沖洗平衡)，分別用5mmol/L醋酸銨溶液1.0ml和水-甲醇(65:35)1.0ml洗滌，再用含

2.5%氨的甲醇1.0ml洗脫，洗脫液在60℃下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸發(fā)至干，殘?jiān)锛?50μl流動(dòng)相溶解，吸取100μl注入液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)進(jìn)行分析。色譜與質(zhì)譜條件色譜柱為Chiral-AGP柱

(150mm×4.0mm，5μm)，流動(dòng)相為10

mmol/L醋酸銨緩沖液(pH4.5)-正丙醇(99:1)，流速0.9ml/min，柱溫30℃。

APCI離子源，溫度350℃，輔助氣(N2)流速2

L/min，氣簾氣(N2)壓力410kPa流速1.2

L/min，電暈放電電流2mA，正離子選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)(SRM)[M+H]+離子，N2碰撞能量

15eV，用于定量分析的離子反應(yīng)分別為m/z409→238(氨氯地平)和m/z260→116(S-(-)-普萘洛爾)。SRM氨氯地平的LC-MS/MS離子流圖A.空白血漿B.空白血漿添加0.5ng/ml的氨氯地平消旋體練習(xí)與思考題

尼莫地平具有氧化性，與亞鐵鹽反應(yīng)，呈現(xiàn)的顏色變化是A.溶液變?yōu)榘咨獴.出現(xiàn)沉淀，沉淀由灰綠色變?yōu)榧t棕色C.溶液顯橙紅色D.出現(xiàn)橙紅色沉淀E.無(wú)變化

各國(guó)藥典規(guī)定對(duì)二氫吡啶類藥物中引入的雜質(zhì)檢查大多采用的方法是A.TLCD.HPLCB.紫外分光