微生物實驗顯微鏡直接計數(shù)法

微生物實驗顯微鏡直接計數(shù)法第一頁，共十四頁，編輯于2023年，星期二二、實驗原理1.血球計數(shù)板法

利用計數(shù)板上有固定體積和精確刻度的兩個計數(shù)室進行計數(shù)，是常用的在顯微鏡下對細胞數(shù)目進行計數(shù)的方法。具有直觀、快速等優(yōu)點，但誤差較大，不適合細菌計數(shù)。（1）計數(shù)室體積：正方形，邊長為1mm，深0.1mm→蓋上蓋玻片后，容積為0.1mm3。（2）計數(shù)室刻度的規(guī)格16×25型：16個中方格，每個中方格分25個小格；25×16型：25個中方格，每個中方格分16個小格。第二頁，共十四頁，編輯于2023年，星期二計數(shù)室

第三頁，共十四頁，編輯于2023年，星期二第四頁，共十四頁，編輯于2023年，星期二（3）計數(shù)和計算方法我們采用的是25×16的，計數(shù)時查5個中方格的總菌數(shù)。如圖：計算：1個計數(shù)室的總菌數(shù)=A/5×25×B1g（ml）樣品中的總菌數(shù)=A/5×25×10×1000×B=50,000A×B個5個方格的總菌數(shù)稀釋倍數(shù)第五頁，共十四頁，編輯于2023年，星期二2.測定生長量的其他方法平板菌落計數(shù)法、干重法和比濁法等。（1）平板菌落計數(shù)法（2）干重法（適合濃度較高的樣品）取一定量菌液中→離心或過濾，分離菌體→烘干至恒重(溫度可采用105℃、100℃或80℃)→稱重。一般干重為濕重的10%-20%。第六頁，共十四頁，編輯于2023年，星期二第七頁，共十四頁，編輯于2023年，星期二（3）比濁法在一定范圍內(nèi)，菌懸液中的細胞濃度與混濁度成正比，即與吸光值成正比，菌數(shù)越多，吸光值越大。因此，借助于分光光度計，在一定波長下測定菌懸液的光密度，就可反應出菌液的濃度。該法適合測定濃度較高的樣品。第八頁，共十四頁，編輯于2023年，星期二三、實驗材料1.菌種：酵母菌（Saccharomycescerevisiae）懸液(已稀釋100倍)2.器具：顯微鏡、血球計數(shù)板、吸管、蓋玻片。四、實驗步驟1.檢查計數(shù)板

檢查計數(shù)板是否有破損。2.鏡檢計數(shù)室

在加樣前，先對計數(shù)板的計數(shù)室進行鏡檢。若有污物，則需清洗后才能進行計數(shù)。第九頁，共十四頁，編輯于2023年，星期二3.加樣品

在清潔干燥的血球計數(shù)板蓋上蓋玻片，再用細口滴管將酵母菌稀釋液由蓋玻片邊緣點一小滴（不宜過多），讓菌液沿縫隙靠毛細滲透作用自行進入計數(shù)室，一般計數(shù)室均能充滿菌液。注意不可有氣泡產(chǎn)生。第十頁，共十四頁，編輯于2023年，星期二4.顯微鏡計數(shù)靜置幾分鐘，將計數(shù)板放在顯微鏡下，先用低倍鏡找到計數(shù)室，再換成高倍鏡進行計數(shù)。5.清洗血球計數(shù)板計數(shù)完畢，將計數(shù)板在水龍頭下沖洗干凈后自行晾干，鏡檢觀察每小格內(nèi)無殘留物為止。

第十一頁，共十四頁，編輯于2023年，星期二五、注意事項1.加樣前先搖勻菌液，計數(shù)室中不可有氣泡產(chǎn)生；2.菌液濃度以每小格有5-10個菌體為宜。3.計數(shù)時，格線上的菌體只數(shù)上方和右邊線上的；4.如遇酵母出芽，芽體大小達到母細胞的一半時，作為兩個菌體計算；5.清洗計數(shù)板時切勿用手或硬物刷洗。在水龍頭上用水柱清洗，直到洗凈為止。6.一個樣品要從兩個計數(shù)室中計得的平均值來計算。第十二頁，共十四頁，編輯于2023年，星期二特別注意血球計數(shù)板均有編號，一人一個，務必小心使用，若損壞，需原價賠償或賠償