2015屆高三生物知識(shí)突破練：13《生物技術(shù)實(shí)踐》（人教版）

第一部分知識(shí)專(zhuān)題強(qiáng)化練

專(zhuān)題13生物技術(shù)實(shí)踐

直擊考綱］1.微生物的分離和培養(yǎng)。2.培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用。3.利用微生物發(fā)酵來(lái)生

產(chǎn)特定的產(chǎn)物。4.從生物材料中提取某些特定的成分。5.運(yùn)用發(fā)酵加工食品的基本方法。6.

植物的組織培養(yǎng)。

考點(diǎn)39微生物的利用

■真題重溫

1.判斷卜列有關(guān)微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用的敘述

(1)常用液體培養(yǎng)基分離獲得細(xì)菌單菌落(2012?大綱全國(guó)，5B)(X)

(2)用蒸儲(chǔ)水配制牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板(2009?安徽，6A)(V)

⑶純化菌種時(shí)，為了得到單菌落，常采用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法

(2011?新課標(biāo)全國(guó)，39節(jié)選)(V)

(4)測(cè)定培養(yǎng)液中微生物數(shù)量，可選用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)(2010?山東，34節(jié)選)(V)

(5)玉米秸稈中的纖維素經(jīng)充分水解后的產(chǎn)物可被酵母菌利用發(fā)酵生產(chǎn)酒精。培養(yǎng)酵母菌時(shí),

該水解產(chǎn)物為酵母菌的生長(zhǎng)提供碳源。發(fā)酵過(guò)程中檢測(cè)酵母菌數(shù)量可采用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法

或稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)(2014?山東，35節(jié)選)(J)

2.(2013?新課標(biāo)全國(guó)H,39)臨床使用抗生素前，有時(shí)需要做細(xì)菌耐藥實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)時(shí)，首先

要從病人身上獲取少量樣本，然后按照一定的實(shí)驗(yàn)步驟操作，以確定某致病菌對(duì)不同抗生素

的敏感性。回答下列問(wèn)題：

(1)為了從樣本中獲取致病菌單菌落，可用法或法將樣本接種于

固體培養(yǎng)基表面，經(jīng)過(guò)選擇培養(yǎng)、鑒別等步驟獲得。

(2)取該單菌落適當(dāng)稀釋?zhuān)梅ń臃N于固體培養(yǎng)基表面，在37℃培養(yǎng)箱

中培養(yǎng)24h,使其均勻生長(zhǎng)，布滿平板。

(3)為了檢測(cè)該致病菌對(duì)于抗生素的敏感性，將分別含有A、B、C、D四種抗生素的濾紙片

均勻置于該平板上的不同位置，培養(yǎng)一段時(shí)間后，含A的濾紙片周?chē)霈F(xiàn)透明圈，說(shuō)明該

致病菌對(duì)抗生素A；含B的濾紙片周?chē)鷽](méi)有出現(xiàn)透明圈，說(shuō)明該致病

菌對(duì)抗生素B；含C的濾紙片周?chē)耐该魅Ρ群珹的小，說(shuō)明

__________________________________________;含D的濾紙片周?chē)耐该魅σ脖群珹的小，

且透明圈中出現(xiàn)了一個(gè)菌落，在排除雜菌污染的情況下，此菌落很可能是抗生素D的

（4）根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，為達(dá)到抗菌目的，最好應(yīng)選用抗生素。

答案（1）劃線（平板劃線）稀釋涂布（或涂布）

（2）涂布⑶敏感不敏感該致病菌對(duì)C的敏感性比對(duì)A的弱耐藥菌（4）A

解析（1）微生物純化的方法主要有平板劃線法和稀釋涂布平板法。（2）根據(jù)微生物的特點(diǎn)對(duì)

其進(jìn)行一系列濃度梯度稀釋?zhuān)缓笥猛坎挤ń臃N于固體培養(yǎng)基表面，再在適宜條件下培養(yǎng)。

（3）對(duì)某種抗生素越敏感的致病菌，在該抗生素存在的范圍內(nèi)越不易生存，形成的透明圈就

越大。故含A的濾紙片周?chē)霈F(xiàn)透明圈，說(shuō)明有抗生素A的地方該致病菌受到抑制；B的

周?chē)鷽](méi)有透明圈，說(shuō)明致病菌對(duì)抗生素B不敏感，通過(guò)含C的透明圈要比A的透明圈小，

說(shuō)明該致病菌對(duì)C的敏感性比A的弱；D出現(xiàn)了透明圈，說(shuō)明該致病菌對(duì)D敏感，但是在

透明圈上出現(xiàn)一個(gè)菌落，又排除雜菌污染，判斷此菌落的微生物對(duì)抗生素D產(chǎn)生了耐藥性。

（4）根據(jù)以上分析，為達(dá)到抗菌的目的，最好選擇抗生素A.

3.（2013?四川，10節(jié)選）普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人將地衣芽抱桿菌的a

淀粉酶基因轉(zhuǎn)入酵母菌中，經(jīng)篩選得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌種（過(guò)程如圖甲所

示）。

a-KWWJSW接種到新群珞養(yǎng)」Z7S

6一G翅=胃淤1

就俎質(zhì)敕固體平板培養(yǎng)&加總

.............................穗佳埴卷一單獨(dú)

圖甲圖乙

（1）圖甲中，過(guò)程①需要的酶有。為達(dá)到篩選目的，平

板內(nèi)的固體培養(yǎng)基應(yīng)以作為唯一碳源。②、③過(guò)程需重復(fù)幾次，目的是

（2）某同學(xué)嘗試過(guò)程③的操作，其中一個(gè)平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如圖乙所示。該同學(xué)的接

種方法是;推測(cè)該同學(xué)接種時(shí)可能的操作失誤是

（3）以淀粉為原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的適宜條件下密閉發(fā)酵，接種

菌的發(fā)酵罐需要先排氣，其原因是。

答案（1）限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶淀粉進(jìn)一步篩選純化獲得分解淀粉能力強(qiáng)的

酵母菌（2）稀釋涂布平板法涂布不均勻（3）工程酵母工程酵母菌分解淀粉產(chǎn)生葡萄糖

的能力強(qiáng)，導(dǎo)致酒精發(fā)酵產(chǎn)生CO2的速率更快

解析（1）圖甲中過(guò)程①為構(gòu)建基因表達(dá)載體，需要的酶有限制性核酸內(nèi)切酶及DNA連接

酶；欲篩選可直接利用淀粉的菌種，宜制備以淀粉為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基；圖示②、③過(guò)

程需重復(fù)幾次，其作用在于“純化”，從而進(jìn)一步篩選出分解淀粉能力更強(qiáng)的酵母菌.（2）

圖乙所示培養(yǎng)基平板中的菌落呈分散分布，應(yīng)為采用稀釋涂布平板法接種的結(jié)果，然而，該

平板上菌落并非“均勻分布”而是相對(duì)集中于左側(cè)，這可能是由于制作平板時(shí)“涂布不均

勻”所致。(3)若以“淀粉”為原料，則相對(duì)于普通菌種，工程酵母菌因轉(zhuǎn)入了a淀粉酶基

因，其利用淀粉的能力將更強(qiáng)，故發(fā)酵產(chǎn)生C02的能力更強(qiáng)，因此需要先排氣。

■知能回歸

1.微生物的培養(yǎng)

(1)無(wú)菌技術(shù)：主要包括消毒和滅菌。

①消毒方法：常用煮沸消毒法、巴氏消毒法。

②常用滅菌方法：灼燒滅菌——接種環(huán)、接種針等金屬器具；干熱滅菌——主要針對(duì)玻璃器

皿等；高壓蒸汽滅菌——主要針對(duì)培養(yǎng)基等。

(2)如圖為倒平板操作過(guò)程，操作時(shí)要待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時(shí)，在酒精燈火焰附近進(jìn)行。

制備固體培養(yǎng)基最后要將平板倒置，其主要目的是防止培養(yǎng)皿蓋上的水珠滴入培養(yǎng)基造成污

染。

(3)平板劃線操作

平板劃線法：通過(guò)接種

環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表

向連續(xù)劃線的操作，將

聚集的菌種逐步稀釋分

放到培養(yǎng)基的表面

(4)稀釋涂布平板法：先將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋后涂布平板，在稀釋度足夠高的菌液里,

聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。如圖所示：

2.某種微生物的分離與計(jì)數(shù)

(1)分離——選擇培養(yǎng)基

①培養(yǎng)基中加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌。

②培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽可得到金黃色葡萄球菌。

③培養(yǎng)基中缺乏氮源時(shí)，可以分離得到固氮微生物。

④當(dāng)培養(yǎng)基的某種營(yíng)養(yǎng)成分為特定化學(xué)成分時(shí)，也具有分離效果。

⑤改變微生物的培養(yǎng)條件，也可以達(dá)到分離微生物的目的，如將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)

只能得到耐高溫的微生物。

⑵計(jì)數(shù)

①土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)

a.篩選菌株：利用以尿素為唯氮源的選擇培養(yǎng)基篩選菌株。

b.計(jì)數(shù)方法：活菌計(jì)數(shù)法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)法。前者為了增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力和準(zhǔn)確性，則

需設(shè)置重復(fù)組，一般選擇菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。

c.過(guò)程：土壤取樣一樣品的稀釋一微生物的培養(yǎng)與觀察。

②分解纖維素的微生物的分離

a.實(shí)驗(yàn)原理

「纖維素胸(友合僧)一|

纖維素纖維二精.W電”.電.萄糖

纖維素分解幽

剛果紅1”一―人叫纖/素摩-紅色消失、

纖維索LL復(fù)”物出巡明圈

即：可根據(jù)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。

b.流程：土壤取樣一選擇培養(yǎng)一梯度稀釋一涂布平板一挑選菌落。

(3)鑒定方法

鑒定分解尿

含酚紅指示劑的尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基f細(xì)菌f指示劑變紅，則該菌能分

素的細(xì)菌

解尿素

鑒定纖維素剛果紅纖維素分解菌

含纖維素1.代臼]一出現(xiàn)

分解菌培養(yǎng)基,匕透明圈

■典題特訓(xùn)______________________________

1.下列有關(guān)實(shí)驗(yàn)室中微生物培養(yǎng)和分離的敘述，錯(cuò)誤的是()

A.獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的入侵

B.高溫滅菌的目的是殺死所有微生物

C.劃線分離可在培養(yǎng)基上獲得均勻分布的單菌落

D.稀釋涂布平板法可用于計(jì)數(shù)活菌數(shù)目

答案C

解析微生物培養(yǎng)過(guò)程中要進(jìn)行無(wú)菌操作，防止外來(lái)雜菌的入侵，A正確；高溫滅菌可殺死

所有微生物，B正確；劃線分離可在培養(yǎng)基上獲得逐漸變稀分布的單菌落，C錯(cuò)誤；稀釋涂

布平板法中根據(jù)菌落的數(shù)目可計(jì)數(shù)活菌數(shù)目，D正確。

2.某學(xué)者欲研究被石油污染過(guò)的土壤中細(xì)菌數(shù)量，并從中篩選出能分解石油的細(xì)菌。下列

操作錯(cuò)誤的是（）

A.利用平板劃線法對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)

B.以石油為唯一碳源的培養(yǎng)基篩選

C.采用稀釋涂布平板法分離菌種

D.稱(chēng)取和稀釋土壤時(shí)應(yīng)在火焰旁

答案A

解析稀釋涂布平板法有利于將細(xì)菌分離形成單個(gè)菌落，利于計(jì)數(shù)，因此，如果是通過(guò)菌落

數(shù)來(lái)估算細(xì)菌的數(shù)量，應(yīng)該采用稀釋涂布平板法對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)；要篩選出能分解石油的細(xì)

菌，應(yīng)該采用選擇培養(yǎng)基，即以石油作為唯一碳源進(jìn)行培養(yǎng)，在這種培養(yǎng)基上只有能分解石

油的細(xì)菌才能生長(zhǎng)繁殖；操作時(shí)要無(wú)菌操作，稱(chēng)取和稀釋土壤應(yīng)在火焰旁。

3.下列關(guān)于微生物的營(yíng)養(yǎng)，說(shuō)法正確的是（）

A.同一種物質(zhì)不可能既作碳源又作氮源

B.凡是碳源都能提供能量

C.除水以外的無(wú)機(jī)物僅提供無(wú)機(jī)鹽

D.無(wú)機(jī)氮源也可能提供能量

答案D

解析此題考查我們對(duì)微生物的營(yíng)養(yǎng)和能源的理解。對(duì)一些微生物來(lái)說(shuō)，含C、H、0、N

的化合物既是碳源，又是氮源。C02是光能自養(yǎng)細(xì)菌的碳源，但不能提供能量.CO?和N2

是無(wú)機(jī)物，也是微生物的碳源和氮源。硝化細(xì)菌所利用的氮源是無(wú)機(jī)氮源氨，同時(shí)氨也為硝

化細(xì)菌提供用以化能合成作用的能源。

4.下列對(duì)無(wú)菌操作轉(zhuǎn)接培養(yǎng)物的操作順序的敘述，正確的是（）

①接種環(huán)在火焰上灼燒滅菌②在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開(kāi)棉塞③打開(kāi)棉塞的試管口通

過(guò)火焰④將已冷卻的接種環(huán)仰入菌液，沾取一環(huán)菌液轉(zhuǎn)移到一裝有無(wú)菌培養(yǎng)基的試管中

⑤將試管口塞.上棉塞⑥接種環(huán)再次灼燒滅菌

A.①②?⑤⑥B.①②③④⑤

C.①②③④⑤⑥D(zhuǎn).①②③④

答案C

5.（2014?新課標(biāo)全國(guó)H,39）為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測(cè)定了該河流水樣中

的細(xì)菌含量，并進(jìn)行了細(xì)菌分離等工作。回答下列問(wèn)題：

(1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測(cè)水樣中的細(xì)菌含量。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后

的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是;

然后，將1mL水樣稀釋100倍，在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培

養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為

(2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌。操作時(shí)，接種環(huán)通過(guò)火菌，在第二

次及以后的劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線。這樣做的目的是

(3)示意圖A和圖B中，表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。

圖A圖B

(4)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng)，另一部分進(jìn)行

振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。分析其原因是：振蕩

培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中的含量，同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高

____________的利用率。

答案(1)檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格3.8X107

(2)灼燒將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落

(3)B(4)溶解氧營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)

解析(1)為了檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格，可在涂布接種前，隨機(jī)取滅菌后的空白平板

先行培養(yǎng)一段時(shí)間。0.1mL稀釋液中平均有(39+38+37)/3=38個(gè)活菌，則每毫升稀釋液中

活菌的數(shù)目為38/0.1=380,則稀釋前每毫升水樣中活菌數(shù)目為380X100=3.8X1()4,則每

升水樣中活菌數(shù)目為3.8X1O4X1000=3.8X1()7。

(2)接種環(huán)、接種針等金屬用具可直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，以達(dá)到迅速?gòu)氐诇?/p>

菌的目的。在第二次及以后的劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線，其目的是將聚集

的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落。

(3)比較圖A和圖B可以看出：A培養(yǎng)基中細(xì)菌的分布呈線性，是用平板劃線法接種培養(yǎng)后

得到的結(jié)果；B培養(yǎng)基中細(xì)菌均勻分布，是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。

(4)振蕩培養(yǎng)可以提高培養(yǎng)液中溶解氧的含量，還可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高了營(yíng)

養(yǎng)物質(zhì)的利用率，因此振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。

6.(2014?四川，10)有機(jī)農(nóng)藥苯磺隆是一種除草劑，長(zhǎng)期使用會(huì)污染環(huán)境。研究發(fā)現(xiàn)，苯磺

隆能被土壤中某些微生物降解。分離降解苯磺隆的菌株和探索其降解機(jī)制的實(shí)驗(yàn)過(guò)程如圖

甲、圖乙所示。

土壤樣品選擇培養(yǎng)

劃線純化

測(cè)定采橫

隆降解率

圖乙

（1）微生物生長(zhǎng)繁殖所需的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有碳源、水、四類(lèi)，該實(shí)驗(yàn)所用

的選擇培養(yǎng)基只能以苯磺隆作為唯?碳源，其原因是。

（2）與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常需添加生長(zhǎng)素和,這

些植物激素?般需要事先單獨(dú)配制成保存?zhèn)溆谩?/p>

（3）純化菌株時(shí)，通常使用的劃線工具是。劃線的某個(gè)平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域

的劃線上都不間斷地長(zhǎng)滿了菌，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無(wú)菌落，其他劃線上有菌落。

造成劃線無(wú)菌落可能的操作失誤有o

（4）為探究苯磺隆的降解機(jī)制，將該菌種的培養(yǎng)液過(guò)濾離心，取上清液做圖乙所示實(shí)驗(yàn)。該

實(shí)驗(yàn)的假設(shè)是,該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是否合理？為什么？

答案（1）氮源和無(wú)機(jī)鹽只有能利用苯磺隆的微生物能正常生長(zhǎng)繁殖（2）細(xì)胞分裂素母

液（3）接種環(huán)①接種環(huán)灼燒后未冷卻；②劃線未從第一區(qū)域末端開(kāi)始

（4）目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白質(zhì)不合理，缺少空白對(duì)照

解析（1）微生物生長(zhǎng)繁殖需要的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽四類(lèi)。根據(jù)題

意可知，土壤中某些微生物有降解苯磺隆的能力，該實(shí)驗(yàn)的目的是探索其降解機(jī)制，因此，

需要分離出有降解苯磺隆能力的土壤中的某些微生物，故選擇培養(yǎng)時(shí)為了排除其他碳源的干

擾，培養(yǎng)基中唯一碳源只能是苯磺隆。（2）與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基需

要添加生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，用于調(diào)節(jié)植物細(xì)胞再分化；這些植物激素一般需要事先單獨(dú)配

制成母液保存?zhèn)溆谩＃?）純化菌株時(shí)，通常使用的劃線工具是無(wú)菌接種環(huán)。劃線的平板培養(yǎng)

后，發(fā)現(xiàn)第一劃線區(qū)域的劃線上不間斷地長(zhǎng)滿了菌，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無(wú)菌落,

而其他劃線上有菌落。造成此現(xiàn)象的原因可能有兩個(gè)：一是接種環(huán)灼燒后未冷卻，菌種接觸

到高溫的接種環(huán)而死亡；二是劃第二劃線區(qū)域第一條線時(shí)未從第一區(qū)域末端開(kāi)始。（4）根據(jù)

圖乙所示實(shí)臉中的上清液加入蛋白酶溶液推測(cè)，實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖翘骄磕康木晔欠衲芊置诮到獗?/p>

磺隆的蛋白質(zhì)，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)不合理之處是缺少不加蛋白酶溶液、其他條件同圖乙的空白對(duì)照。

7.研究被石油污染過(guò)的土壤中細(xì)菌數(shù)量，并從中篩選出能分解石油的細(xì)菌。為了分離和純

化高效分解石油的細(xì)菌，科研人員利用被石油污染過(guò)的土壤進(jìn)行如圖A所示的實(shí)驗(yàn)。

取樣泅-

定石油;

的含證」

石油污

染過(guò)的

上堞①制?、跀U(kuò)大③無(wú)機(jī)液體體培養(yǎng)翦

細(xì)菌懸培養(yǎng)培喬蔚+石?石油恒祖母點(diǎn)日整

液油震蕩培養(yǎng)培養(yǎng)受鷲忠

圖A油震蕩培養(yǎng)

圖B

（1）配制好的培養(yǎng)基通?？梢允褂梅缇?。與步驟②中培養(yǎng)基成分相比,

步驟③中培養(yǎng)基成分的最大區(qū)別是0

（2）接種細(xì)菌常用的方法有，

若經(jīng)過(guò)④過(guò)程后獲得的結(jié)果為圖B所示，則所操作方法如圖所示。

（3）步驟⑤后取樣測(cè)定石油含量的目的是____________________________________________

對(duì)步驟⑤某瓶中細(xì)菌計(jì)數(shù)的方法有兩種，-種方法是,其菌落數(shù)可代表活

菌數(shù)；另一種方法是，該方法需要借助一塊特殊的我玻片，其名稱(chēng)為

答案（1）高壓蒸汽滅菌石油是唯一碳源（2）平板劃線法和稀釋涂布平板法甲（3）篩選

出分解石油能力最好的細(xì)菌稀釋涂布平板法顯微鏡直接計(jì)數(shù)（血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法）

血細(xì)胞計(jì)數(shù)板（血球計(jì)數(shù)板）

解析（1）培養(yǎng)基滅菌用高壓蒸汽滅菌，為篩選出能分解石油的細(xì)菌，所以石油是唯一碳源。

（2）接種細(xì)菌常用的方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。圖B為平板劃線法，如圖甲所示.

（3）步驟⑤進(jìn)一步操作是為篩選出分解石油能力最好的細(xì)菌，微生物計(jì)數(shù)可用稀釋涂布平板

法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)法（血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法）。

考點(diǎn)40微生物在傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)中的應(yīng)用

■真題重溫___________________________

1.判斷下列有關(guān)傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的敘述

（1）在果酒發(fā)酵后期擰開(kāi)瓶蓋的間隔時(shí)間可延長(zhǎng)Q012?江蘇，21A）（J）

⑵在家庭中用鮮葡萄制作果酒時(shí)，讓發(fā)酵裝置接受光照并放在45℃處（2010?北京，

1AD）（X）

（3）在果酒和果醋制作過(guò)程中，果酒的制作過(guò)程是在缺氧條件下，而果醋整個(gè)制作過(guò)程一直

處于有氧條件下（201。江蘇，7AC改編）（X）

（4）與果醋、果酒制作相比，腐乳的制作所需要的適宜溫度最高，所用菌種為乳酸菌（2011?江

蘇，3AC改編）（X）

（5）在腐乳制作過(guò)程中必須有能產(chǎn)生蛋白酶的微生物參與，所用豆腐的含水量為70%左右，

水分過(guò)多腐乳不易成形（2008?江蘇，17AB改編）（V）

2.（2013?江蘇，14）某研究性學(xué)習(xí)小組以櫻桃番茄為材料進(jìn)行果酒、果醋發(fā)酵實(shí)驗(yàn)。下列相

關(guān)敘述正確的是（）

A.酵母菌是嗜溫菌，所以果酒發(fā)酵所需的最適溫度較高

B.先供氧進(jìn)行果醋發(fā)酵，然后隔絕空氣進(jìn)行果酒發(fā)酵

C.與人工接種的發(fā)酵相比，自然發(fā)酵獲得的產(chǎn)品品質(zhì)更好

D.適當(dāng)加大接種量可以提高發(fā)酵速率、抑制雜菌生長(zhǎng)繁殖

答案D

解析醋酸菌是嗜熱菌，果醋發(fā)酵所需的最適溫度較高，A錯(cuò)誤；進(jìn)行果酒、果醋發(fā)酵實(shí)驗(yàn),

要先隔絕空氣進(jìn)行果酒發(fā)酵，再供氧進(jìn)行果醋發(fā)酵，B錯(cuò)誤；人工接種的菌種品質(zhì)更好，且

不容易存在雜菌污染，故比自然發(fā)酵獲得的產(chǎn)品品質(zhì)更好，C錯(cuò)誤；適當(dāng)加大接種量，讓菌

體快速形成優(yōu)勢(shì)菌群，可以抑制雜菌生長(zhǎng)，提高發(fā)酵速率，D正確。

3.（2013?新課標(biāo)全國(guó)I,39）回答下列有關(guān)泡菜制作的習(xí)題：

（1）制作泡菜時(shí)，所用鹽水需煮沸，其目的是o為了縮短制作時(shí)間，有人還會(huì)在

冷卻后的鹽水中加入少量陳泡菜液，加入陳泡菜液的目的是。

（2）泡菜制作過(guò)程中，乳酸發(fā)酵的過(guò)程即為乳酸菌進(jìn)行的過(guò)程。該過(guò)程發(fā)

生在乳酸菌細(xì)胞的中。

（3）泡菜制作過(guò)程中影響亞硝酸鹽含量的因素有、和等。

（4）從開(kāi)始制作到泡菜品質(zhì)最佳這段時(shí)間內(nèi)，泡菜液逐漸變酸。這段忖間內(nèi)泡菜壇中乳酸菌

和其他雜菌的消長(zhǎng)規(guī)律是,原因是o

答案（1）殺滅雜菌增加乳酸菌數(shù)量（2）無(wú)氧呼吸細(xì)胞質(zhì)（3）溫度腌制時(shí)間食鹽用

量（4）乳酸菌數(shù)量增多，雜菌數(shù)量減少乳酸菌比雜菌更為耐酸

解析根據(jù)泡菜制作過(guò)程中乳酸菌的來(lái)源、呼吸類(lèi)型、呼吸產(chǎn)物所引起的環(huán)境變化回答相應(yīng)

問(wèn)題，還要注意每步操作的目的以及一些相關(guān)物質(zhì)的變化。

■知能回歸

微生物在傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)中的應(yīng)用

項(xiàng)目?jī)?nèi)容果酒和果醋的制作腐乳制作泡菜制作

果酒：酵母菌果醋：

作用菌類(lèi)毛霉乳酸菌

醋酸菌

（1）酵母菌在無(wú)氧條件

下將葡萄糖氧化成乙毛霉將蛋白質(zhì)、脂肪乳酸菌將糖轉(zhuǎn)化為乳

原理

醇；（2）醋酸菌在有氧分解成小分子有機(jī)物酸

條件下將乙醇氧化為

醋酸

大白菜、花椰菜等新

原料選擇新鮮葡萄（或蘋(píng)果）豆腐

鮮干凈的蔬菜

挑選汕噂

前萄一沖洗f

讓豆腐上長(zhǎng)出毛霉f選材]

.榨汁.制泡菜：啪小+一

配制鹽水」

實(shí)驗(yàn)流程酒精借酸加鹽腌制一加鹵湯裝

發(fā)解一發(fā)解

11瓶f密封腌制一裝壇一發(fā)酵一成品

果酒果障

①材料選擇與處理；①材料用量；②防止

①泡菜壇的選擇；②

操作注意事項(xiàng)②防止發(fā)酵液污染，雜菌污染；③控制溫

腌制條件（無(wú)氧）

控制好發(fā)酵條件度及酒精含量

都是天然的發(fā)酵，利用了微生物新陳代謝過(guò)程中代謝產(chǎn)物的作用或直

共同點(diǎn)

接獲取代謝產(chǎn)物

典題特訓(xùn)

1.下列有關(guān)傳統(tǒng)果酒、果醋發(fā)酵和腐乳制作的比較正確的是（）

A.果酒、腐乳發(fā)酵的主要微生物屬于真核生物，果醋發(fā)酵菌種屬于原核生物

B.果酒制成后只需將裝置轉(zhuǎn)移至溫度較高的環(huán)境中即可制作果醋

C.果酒和果醋發(fā)酵在無(wú)氧環(huán)境下進(jìn)行，腐乳發(fā)酵在有氧條件下進(jìn)行

D.果酒、果醋和腐乳制作過(guò)程利用的都是微生物胞內(nèi)酶

答案A

解析果酒發(fā)酵的微生物是酵母菌，為真核生物，腐乳發(fā)酵的微生物是毛霉，為真核生物，

果醋發(fā)酵的微生物為醋酸菌，為原核生物，故A正確；果酒制成后轉(zhuǎn)移至較高溫度的環(huán)境

中，還需要通入氧氣，才可以制作果醋，故B錯(cuò)誤；果酒發(fā)酵在無(wú)氧條件下進(jìn)行，而果醋

和腐乳發(fā)酵都需要有氧條件，故C錯(cuò)誤；制作果酒、果醋利用的是微生物的胞內(nèi)酶，腐乳

利用的是微生物的胞外酶（主要是毛霉分泌的蛋白酶和脂肪酶），故D錯(cuò)誤。

2.利用如圖裝置制作果酒和果醋，下列敘述正確的是（）

A.制作果酒時(shí)應(yīng)關(guān)閉閥b,適時(shí)打開(kāi)閥a幾秒鐘

B.制作果酒時(shí)如果關(guān)閉閥a,打開(kāi)閥b,會(huì)導(dǎo)致爆瓶

C.制作果醋時(shí)需打開(kāi)閥a通氣，打開(kāi)閥b排氣

D.制作果醋時(shí)把發(fā)酵裝置放到25℃環(huán)境中比較適宜

答案A

解析圖示裝置中，閥a控制排氣，閥b控制進(jìn)氣，所以制作果酒時(shí)應(yīng)關(guān)閉閥b,適時(shí)打開(kāi)

閥a幾秒鐘以排出產(chǎn)生的氣體；如果關(guān)閉閥a,打開(kāi)b,產(chǎn)生的氣體不能排出，會(huì)使發(fā)酵液

從右側(cè)導(dǎo)管排出，不會(huì)導(dǎo)致爆瓶；制作果醋時(shí)，打開(kāi)閥a是為了排氣，打開(kāi)閥b是為了通氣;

制作果醋時(shí)發(fā)酵裝置應(yīng)放到30~350c環(huán)境中比較適宜。

3.下列關(guān)于腐乳制作的敘述中，錯(cuò)誤的是()

A.毛霉可利用蛋白能將蛋白質(zhì)分解成小分子肽和氨基酸

B.豆腐胚表面有毛霉、青霉、曲霉等微生物，它們之間存在競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系

C.腐乳的前期制作溫度應(yīng)控制在15~18℃環(huán)境條件下

D.加入較多的香辛料既能調(diào)味又能縮短腐乳成熟的時(shí)間

答案D

解析制作腐乳主要是利用毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶和脂肪酶將豆腐內(nèi)的蛋白質(zhì)分解成

小分子肽和氨基酸，脂肪分解成甘油和脂肪酸，從而改變豆腐的成分和口味；豆腐胚表面長(zhǎng)

有毛霉、青霉、曲霉等微生物，它們都利用豆腐內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)來(lái)維持生命活動(dòng)，因而存在競(jìng)爭(zhēng)關(guān)

系；毛霉生長(zhǎng)的適宜溫度是15~18℃;加入較多的香辛料能調(diào)味，殺菌防腐，酒精含量越

高，對(duì)蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延長(zhǎng)。

4.用酵母菌使葡萄汁產(chǎn)生葡萄酒，當(dāng)酒精含量達(dá)到12%?16%時(shí)，發(fā)酵就停止了。有關(guān)敘

述不正確的是()

A.酒精對(duì)酵母菌有毒害作用，后期細(xì)胞生命活動(dòng)減弱

B.產(chǎn)生酒精的同時(shí)也有CO2生成，所以發(fā)酵過(guò)程中需擰松瓶蓋放氣

C.產(chǎn)物積累使pH值下降，同時(shí)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)減少，種群數(shù)量下降

D.氧氣過(guò)少導(dǎo)致其無(wú)法呼吸，細(xì)胞中即無(wú)法合成ATP

答案D

解析酒精具有消毒的作用，對(duì)酵母菌同樣有毒害作用，A正確；產(chǎn)生酒精的同時(shí)也有CO2

生成，所以發(fā)酵過(guò)程中需擰松瓶蓋放氣，B正確；酒精發(fā)酵過(guò)程中，產(chǎn)物積累使pH值發(fā)生

改變，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)減少，種群數(shù)量下降，C正確；酒精發(fā)酵是在無(wú)氧條件下，不需要氧氣，D

錯(cuò)誤。

5.某生物興趣小組的同學(xué)利用新鮮蘋(píng)果榨取果汁并制作果酒，筒要流程如下：

新鮮蘋(píng)果一清洗干凈一去掉果核一榨汁機(jī)榨汁一果汁

一發(fā)醉果灑

從成品果酒中分離酵母菌一擴(kuò)大培養(yǎng)f固定化酵母細(xì)胞J

(I)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，有同學(xué)發(fā)現(xiàn)榨取的果汁非常渾濁，解決的方法是。

(2)分離酵母菌應(yīng)使用培養(yǎng)基，固定化酵母細(xì)胞常采用法。

(3)酵母菌的酒精發(fā)酵過(guò)程一般控制在溫度范圍最適合酵母菌繁殖，請(qǐng)簡(jiǎn)要說(shuō)明理

由。

(4)在酸性條件下，可用來(lái)檢測(cè)發(fā)酵產(chǎn)物中是否有酒精產(chǎn)生。若想進(jìn)一步

檢測(cè)所得果酒中酵母菌的密度，可采用法。

（5）果汁為酵母菌的生長(zhǎng)和繁殖提供的營(yíng)養(yǎng)成分是。

（6）發(fā)酵完成后，生物興趣小組同學(xué)制作的果酒品質(zhì)非常好。為了方便后續(xù)年級(jí)使用，可將

菌液保存。

答案（1）用果膠酶處理（2）選擇包埋（3）18?25℃在此溫度下，酶的活性最強(qiáng)，代謝

最旺盛（4）重鋁酸鉀稀釋涂布平板（5）碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽和生長(zhǎng)因子等（6）轉(zhuǎn)移

到甘油中，與甘油充分混合后，放在一20°C的冷藏箱中

解析（1）果膠是植物細(xì)胞壁以及胞間層的主要組成成分之一，若發(fā)現(xiàn)榨取的果汁非常渾濁，

用果膠酶處理，可使果汁變得澄清。（2）分離酵母菌應(yīng)使用選擇培養(yǎng)基，因?yàn)榧?xì)胞比酶分子

大，故制備固定化細(xì)胞時(shí)常采用包埋法。（3）酵母菌進(jìn)行酒精發(fā)酵的適宜溫度是18~25°C,

（4）果汁發(fā)酵后，可以用重輅酸鉀來(lái)檢驗(yàn)是否有酒精生成，在酸性條件下，重輅酸鉀與酒精

反應(yīng)呈灰綠色，稀釋涂布平板法能用于酵母菌的計(jì)數(shù)0（5）微生物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有碳源、氮源、

水、無(wú)機(jī)鹽和生長(zhǎng)因子等，故果汁為酵母菌的生長(zhǎng)和繁殖提供的營(yíng)養(yǎng)成分是碳源、氮源、水、

無(wú)機(jī)鹽和生長(zhǎng)因子等。（6）長(zhǎng)期保存菌種應(yīng)將菌種轉(zhuǎn)移到甘油中，與甘油充分混合后，放在

-20C的冷藏箱中.

6.葡萄糖經(jīng)酒精發(fā)酵可以產(chǎn)生葡萄酒，進(jìn)一步經(jīng)醋酸發(fā)酵可以產(chǎn)生葡萄醋，請(qǐng)利用相關(guān)的

知識(shí)回答問(wèn)題：

⑴從將葡萄汁裝入發(fā)酵瓶到酒精發(fā)酵完畢的過(guò)程中，酵母菌進(jìn)行的細(xì)胞呼吸方式是

（2）甲、乙兩位同學(xué)將葡萄榨成汁后分別裝入相應(yīng)的發(fā)酵瓶中，在溫度等適宜的條件下進(jìn)行

發(fā)酵，如下圖所示。

①在排氣口要通過(guò)一個(gè)長(zhǎng)而彎曲的膠管與瓶身連接，其目的是。

②請(qǐng)找出圖中實(shí)驗(yàn)操作的錯(cuò)誤：甲圖中的錯(cuò)誤是,乙圖中的錯(cuò)誤是

（3）為了提高果酒的品質(zhì)，更好地抑制其他微生物的生長(zhǎng)，常常加入人工培養(yǎng)的酵母菌。為

了分離純化酵母菌，最簡(jiǎn)便的接種方法是?

（4）若果汁中混雜有醋酸菌，在果酒發(fā)酵旺盛時(shí)，醋酸菌（能/不能）將果汁中的糖發(fā)

酵形成醋酸，其原因是?

答案（1）有氧呼吸、無(wú)氧呼吸（2）①防止空氣中的微生物污染發(fā)酵瓶②甲：未夾住發(fā)酵

瓶的進(jìn)氣管乙：瓶中發(fā)酵液過(guò)多，淹沒(méi)了排氣管在瓶?jī)?nèi)的管口（3）平板劃線法（4）不能

果酒發(fā)酵時(shí)的缺氧環(huán)境能抑制醋酸菌生長(zhǎng)，果酒發(fā)酵的最適溫度也低于醋酸菌生長(zhǎng)的最適溫

度

解析（1）利用葡萄汁制作葡萄酒，裝入發(fā)酵瓶后，一開(kāi)始酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，迅速增加

數(shù)量，隨著氧氣消耗，后期進(jìn)行無(wú)氧呼吸，產(chǎn)生酒精。（2）為防止空氣中的微生物污染發(fā)酵

瓶，在排氣口要通過(guò)一個(gè)長(zhǎng)而彎曲的膠管與瓶身連接。甲圖中未夾住發(fā)酵瓶的進(jìn)氣管，這樣

酵母菌會(huì)一直進(jìn)行有氧呼吸，不能產(chǎn)生酒精；乙圖中瓶中發(fā)酵液過(guò)多，淹沒(méi)了排氣管在瓶?jī)?nèi)

的管口，這樣不能排出氣體，可能會(huì)排出發(fā)酵液。（3）分離純化酵母菌，常用的接種方法是

平板劃線法。（4）醋酸菌進(jìn)行有氧呼吸，若果汁中混雜有醋酸菌，在果酒發(fā)酵旺盛時(shí)，果酒

發(fā)酵時(shí)的缺氧環(huán)境能抑制醋酸菌生長(zhǎng)，同時(shí)果酒發(fā)酵的最適溫度也低于醋酸菌生長(zhǎng)的最適溫

度，所以醋酸菌不能將果汁中的糖發(fā)酵形成醋酸。

7.腐乳是我國(guó)古代勞動(dòng)人民創(chuàng)造出的一種經(jīng)過(guò)微生物發(fā)酵的大豆食品。下面是腐乳制作的

流程示意圖：

讓豆腐上長(zhǎng)出毛霉f加鹽脆制一加鹵湯裝瓶f密封腌制

（1）現(xiàn)代科學(xué)研究表明，許多種微生物參與了豆腐的發(fā)酵，其中起主要作用的是毛霉，毛霉

是一種狀真菌。

（2）腐乳制作的原理是。

（3）傳統(tǒng)的制作過(guò)程中，豆腐塊上生長(zhǎng)的毛霉來(lái)自。而現(xiàn)代的腐乳

生產(chǎn)是在嚴(yán)格的無(wú)菌條件下，將優(yōu)良的毛霉菌種接種在豆腐上，這樣可以

（4）加鹽的作用是和o

⑸鹵湯是由酒及各種香辛料配制而成的，加酒的作用是和

答案（1）絲（2）毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基

酸，脂肪酶能將脂肪水解成甘油和脂肪酸（3）空氣中的毛霉抱子避免其他菌種的污染，

保證產(chǎn)品的質(zhì)量（4）析出豆腐中的水分，使豆腐變硬抑制微生物的生長(zhǎng)，避免豆腐腐敗

變質(zhì)

（5）抑制微生物的生長(zhǎng)使腐乳具有獨(dú)特的風(fēng)味

解析（1）毛霉是一種絲狀真菌。（2）腐乳的制作原理是毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐

中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸，脂肪酶能將脂肪水解成甘油和脂肪酸。（3）傳統(tǒng)的

腐乳制作過(guò)程中，不接種微生物，只能來(lái)自空氣中的毛霉抱子；現(xiàn)代的腐乳生產(chǎn)在無(wú)菌條件

下進(jìn)行操作，可以防止雜菌污染，保證產(chǎn)品質(zhì)量。（4）制作腐乳的過(guò)程中，加鹽的作用有兩

方面：析出豆腐中的水分，使豆腐變硬；抑制微生物的生長(zhǎng)，避免豆腐腐敗變質(zhì)。（5）鹵湯

中加酒的作用有兩方面：抑制微生物的生長(zhǎng)和使腐乳具有獨(dú)特的風(fēng)味。

考點(diǎn)41植物有效成分的提取

■真題重溫

1.判斷下列關(guān)于植物有效成分提取的敘述（2011?海南，30和2008?寧夏，37改編）

（1）薄荷油是揮發(fā)性物質(zhì)，提取薄荷油時(shí)應(yīng)選用干薄荷葉作原料，可采用水蒸氣蒸儲(chǔ)法提取

（X）

⑵用萃取法提取薄荷油時(shí)，采用的溶劑是乙酸，原理是薄荷油易溶于有機(jī)溶劑乙醛中

（J）

（3）萃取法提取胡蘿卜素的主要步驟是：干燥、粉碎、萃取、濃縮、過(guò)濾（X）

（4）在胡蘿卜顆粒的加熱干燥過(guò)程中，溫度過(guò)高和時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致胡蘿卜素分解（V）

（5）提取的胡蘿卜素可通過(guò)紙層析法進(jìn)行鑒定，在鑒定過(guò)程中不需要對(duì)照（X）

2.（2013?山東，34）胡蘿卜素是一種常用的食用色素，可分別從胡蘿卜或產(chǎn)胡蘿卜素的微生

物菌體中提取獲得，流程如下：

解母菌R酵母薄R薄體離心

的篩選—的培養(yǎng)—裂解—沉淀、》一號(hào)日

胡蘿卜一粉碎一干燥/定

（1）篩選產(chǎn)胡蘿卜素的酵母菌R時(shí)，可選用或平板劃線法接種。采用

平板劃線法接種時(shí)需先灼燒接種環(huán)，其目的是。

（2）培養(yǎng)酵母菌R時(shí),培養(yǎng)基中的蔗糖和硝酸鹽可分別為酵母菌R的生長(zhǎng)提供

和。

（3）從胡蘿卜中提取胡蘿卜素時(shí)，干燥過(guò)程應(yīng)控制好溫度和以防止胡蘿卜

素的分解；萃取過(guò)程中宜采用方式加熱以防止溫度過(guò)高；萃取液濃縮前需

進(jìn)行過(guò)濾，其目的是o

（4）紙層析法可用于鑒定所提取的胡蘿卜素。鑒定過(guò)程中需用胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品作為

答案（1）稀釋涂布平板法殺滅接種環(huán)上的微生物（2）碳源氮源（3）干燥時(shí)間水浴加

熱濾去萃取液中的不溶物（4）（實(shí)驗(yàn)）對(duì)照

解析（1）接種微生物的方法主要是稀釋涂布平板法和平板劃線法，接種過(guò)程為了避免其他

雜菌的污染，要做無(wú)菌操作，所以接種前需對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌。（2）蔗糖主要提供碳源，當(dāng)

然也可以作為能源物質(zhì)，硝酸鹽含氮元素，可提供氮源。（3）溫度過(guò)高、干燥時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)

致胡蘿卜素分解；由于萃取劑往往有揮發(fā)性，直接加熱時(shí)揮發(fā)出來(lái)的有機(jī)溶劑遇明火易爆炸;

萃取后需將原料中不溶于萃取劑的成分濾去。（4）提取出來(lái)的胡蘿卜素往往不是純的，用胡

蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品主要起一個(gè)對(duì)照的作用。

■知能回歸

1.植物芳香油三種提取方法的比較

提取方法實(shí)驗(yàn)原理適用范圍

利用水蒸氣將揮發(fā)性較強(qiáng)的植物芳香

水蒸氣蒸適用于提取玫瑰油、薄荷油等揮發(fā)性較

油攜帶出來(lái)，形成油水混合物，冷卻后，

儲(chǔ)法強(qiáng)的芳香油

混合物又會(huì)重新分出油層和水層

適用于柑橘、檸檬等易焦糊原料中芳香

壓榨法通過(guò)機(jī)械加壓,壓榨出果皮中的芳香油

油的提取

有機(jī)溶劑使芳香油溶解在有機(jī)溶劑中，蒸發(fā)溶劑適用范圍廣,要求原料的顆粒要盡可能

萃取后就可獲得芳香油細(xì)小，能充分溶解在有機(jī)溶劑中

2.實(shí)驗(yàn)流程設(shè)計(jì)

(1)玫瑰精油提取的實(shí)驗(yàn)流程

鮮玫瑰花+清水(1:4)一水蒸氣蒸儲(chǔ)一油水混合物船分離油層力聯(lián)募除水過(guò)濾，玫瑰油。

(2)橘皮精油提取的實(shí)驗(yàn)流程

石灰水浸泡橘皮一漂洗一壓榨f過(guò)濾一靜置一再次過(guò)濾一橘皮油。

(3)提取胡蘿卜素的實(shí)驗(yàn)流程

胡蘿卜一粉碎一干燥一萃取一過(guò)濾一濃縮~胡蘿卜素。

■典題特訓(xùn)

1.如圖1是在發(fā)酵罐內(nèi)利用三胞布拉氏霉發(fā)酵生產(chǎn)B-胡蘿卜素過(guò)程中，菌體生物量及快胡

蘿卜素產(chǎn)量隨時(shí)間變化的曲線圖。圖2是樣品層析結(jié)果及與小胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)樣品的比對(duì)。

請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

S

?—菌體-B-胡您

7OA卜素產(chǎn)量

生物時(shí)色帶

艮I—..

Q4

生61

5OA色帶n—??

物QA

4色帶?一??

量2O

(?

g2O

/A

LO

)—A

O

-

o0

255075100125150175200樣品標(biāo)準(zhǔn)樣

發(fā)解時(shí)何(h)

圖1

(1)發(fā)酵罐內(nèi)三抱布拉氏霉培養(yǎng)基按物理形態(tài)分應(yīng)為,玉米粉和豆餅為微

生物的生長(zhǎng)分別主要提供。在接入菌種前，應(yīng)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行

,以避免雜菌污染。

(2)圖1中，菌體的最快增長(zhǎng)出現(xiàn)在第h,菌體的生物量到達(dá)最大值后下降，其原因

是，

為保證連續(xù)的生產(chǎn)，應(yīng)采取的措施是?

(3)0-胡蘿卜素常用的提取方法為法，實(shí)驗(yàn)表明，石油酸的提取效果遠(yuǎn)好于

丙酮和酒精，原因是

(4)將萃取的胡蘿卜素樣品與小胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)樣進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果如圖2。從圖中分析可知，色

帶為快胡蘿卜素。

答案(1)液體培養(yǎng)基碳源和氮源高壓蒸汽滅菌(2)100營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)缺乏，有害代謝產(chǎn)物

積累連續(xù)加入新的培養(yǎng)液，同時(shí)排出代謝產(chǎn)物(3)有機(jī)溶劑萃取石油酸為水不溶性有

機(jī)溶劑，萃取效果好(4)1

解析(1)發(fā)酵罐內(nèi)三抱布拉氏霉培養(yǎng)基按物理形態(tài)分應(yīng)為液體培養(yǎng)基，玉米粉和豆餅為微

生物的生長(zhǎng)分別主要提供碳源和氮源。在接入菌種前，應(yīng)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，以避

免雜菌污染。

(2)圖1中，菌體的最快增長(zhǎng)出現(xiàn)在第100h,菌體的生物量到達(dá)最大值后下降，其原因是營(yíng)

養(yǎng)物質(zhì)缺乏，有害代謝產(chǎn)物積累，為保證連續(xù)的生產(chǎn)，應(yīng)采取的措施是連續(xù)加入新的培養(yǎng)液,

同時(shí)排出代謝產(chǎn)物。

(3)提取小胡蘿卜素常用的方法為有機(jī)溶劑萃取法，實(shí)驗(yàn)表明，石油醒的提取效果遠(yuǎn)好于丙

酮和酒精，原因是石油醒為水不溶性有機(jī)溶劑，萃取效果好。

2.檸檬油是植物芳香油中的一種，它是一種廣譜性的殺蟲(chóng)劑，可殺死蚊子、蒼蠅、螳螂和

臭蟲(chóng)等傳染疾病的害蟲(chóng)，以及危害糧食、蔬菜的常見(jiàn)害蟲(chóng)，包括幼蟲(chóng)、蛹等，被稱(chēng)為一種綠

色殺蟲(chóng)劑。提取檸檬油的操作步驟如圖。請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)流程圖回答下列問(wèn)題：

檸檬果皮[A]甲

水洗一-浸泡一?漂洗—*裝料一壓榨一糊狀「

和噴淋用出液

檸椽靜置一野一?」

一分液—

精油分層周心1—1

(1)新鮮的檸檬果皮中含有大量的和水分，如果直接壓榨，出油率較低。

(2)壓榨是個(gè)機(jī)械加壓過(guò)程，要求既要將原料壓緊，防止原料滑脫，又要將

擠壓出來(lái)。

(3)A是,目的是破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，分解果膠，防止壓榨時(shí)果皮滑脫，提高

。B過(guò)程一般加入相當(dāng)于檸檬果皮質(zhì)量0.25%的小蘇打和5%的硫酸鈉，其目的是

使檸檬油易與水分離，并調(diào)節(jié)pH至o

(4)C過(guò)程為用過(guò)濾，目的是除去固體物和殘?jiān)?/p>

(5)檸檬油是食品、化妝品和香水配料的優(yōu)質(zhì)原料，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，提取檸檬油不采

取水中蒸饋的原因是：水中蒸饋會(huì)導(dǎo)致的問(wèn)題。檸檬果皮精油的提取適

宜采用法。

答案（1）果蠟、果膠（2）油分（3）石灰水出油率7?8（4）普通布袋（5）原料焦糊和有

效成分水解壓榨

解析（1）新鮮的檸檬果皮中含有大量的果蠟、果膠、水分，會(huì)影響出油率。（2）壓榨過(guò)程要

將原料壓緊，防止滑脫，將油分?jǐn)D壓出來(lái)。（3）為了提高出油率，壓榨前，需要將橘皮用石

灰水浸泡，這樣可以破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，降低壓榨液的黏稠度，過(guò)濾時(shí)不會(huì)堵塞篩眼。（4）圖中C

過(guò)程為過(guò)濾，用普通布袋，可以除去固體物和殘?jiān)?。?）水中蒸餡時(shí)，檸檬油中有效成分會(huì)

水解，也容易發(fā)生原料焦糊問(wèn)題，因此宜采用壓榨法.

3.回答下列有關(guān)植物有效成分提取的問(wèn)題。

（1）提取玫瑰精油可用法，對(duì)裝有玫瑰花瓣和水的蒸儲(chǔ)瓶加熱，可在錐形瓶

中收集到油水混合物，再向油水混合物中加入，可以使油水混合物分層，通過(guò)分液

漏斗獲取油層，此時(shí)油層中還有一定水分，一般還要加入一定量的吸水。

⑵用壓榨法提取橘皮精油，為防止壓榨時(shí)滑脫，提高出油率，可以將橘皮干燥去水后用

浸泡再壓榨；在壓榨液中加入小蘇打和硫酸鈉的目的是。

（3）胡蘿卜素不易揮發(fā)，一般考慮法提取，在乙醇、丙酮、石油醒、乙酸乙酯、乙

酸、苯、四氯化碳中，最適合用于提取胡蘿卜素。整個(gè)過(guò)程不用明火加熱是為了

，蒸儲(chǔ)瓶上加裝冷凝回流裝置是為了o

答案（1）水蒸氣蒸儲(chǔ)（蒸儲(chǔ)）NaCl無(wú)水硫酸鈉

（2）石灰水促進(jìn)油和水的分離（3）萃取石油酸防止引起燃燒或爆炸防止加熱時(shí)有機(jī)

溶劑揮發(fā)

解析（1）提取玫瑰精油可用水蒸氣蒸餡法；收集油水混合物后，向其中加入NaCl,可促進(jìn)

油水混合物分層；油層中的水分可以用無(wú)水硫酸鈉吸收。

（2）提取橘皮精油時(shí)，將橘皮干燥去水后用石灰水浸泡，可以防止壓榨時(shí)滑脫，提高出油率；

在壓榨液中加入小蘇打和硫酸鈉的目的是促進(jìn)