牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制與滅菌

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制與滅菌第1頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月一、復(fù)習(xí)二、實驗：配培養(yǎng)基與滅菌三、斜面的劃線培養(yǎng)四、倒平板的操作五、平板劃線培養(yǎng)2第2頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月一、復(fù)習(xí)3第3頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月4第4頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月《微生物培養(yǎng)與檢驗》主要課程內(nèi)容1.微生物營養(yǎng)需求2.微生物形態(tài)3.微生物純化、分離4.微生物培養(yǎng)、篩選與保存5.微生物檢驗5第5頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月課程內(nèi)容微生物吃什么？1微生物長的什么樣？2如何得到微生物？3如何保存微生物？4我很愛吃熟食（豬頭肉），但是聽說熟食微生物超標(biāo)，這是怎么檢測的？56第6頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月規(guī)則：1.上課不遲到：第1、5節(jié)課，提前10min到教室

2.下課前，自己的實驗物品歸類，該清洗的清洗，該收拾的收拾

3.值日生負(fù)責(zé)擦黑板、掃地、擦桌；為大家做好服務(wù)工作

4.上課時間請不要玩手機(jī)

7第7頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月安全操作與標(biāo)準(zhǔn)操作8第8頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月（一）微生物培養(yǎng)基的制備（二）微生物的消毒滅菌（三）認(rèn)識微生物培養(yǎng)所需的儀器設(shè)備微生物吃什么？19第9頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月（一）微生物培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基：是人工配制的、適合微生物生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)物質(zhì)。滿足微生物生長發(fā)育的水分、C，N，生長因子，P，S，Na，Ca等適宜的酸堿度、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位，合適的滲透壓10第10頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月根據(jù)物理狀態(tài)劃分培養(yǎng)基分液體、半固體和固體3種液體培養(yǎng)基有各種肉湯培養(yǎng)基，主要用于細(xì)菌擴(kuò)大培養(yǎng)；半固體培養(yǎng)基含0.4%瓊脂，主要用于保存細(xì)菌固體培養(yǎng)基含15%~20%瓊脂，主要用于分離細(xì)菌11第11頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月培養(yǎng)基的配制原則1.選擇適宜的營養(yǎng)物質(zhì)實驗室中常用：不同微生物所需培養(yǎng)基各不同牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基細(xì)菌高氏一號放線菌麥芽汁培養(yǎng)基酵母菌察氏培養(yǎng)基霉菌12第12頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月2.營養(yǎng)物質(zhì)的濃度及配比合適3.控制pH條件細(xì)菌和放線菌：pH7.0~7.5酵母菌和霉菌：pH4.5~6.04.控制氧化還原電位5.原料來源的選擇盡量利用廉價且易獲得的原料作為培養(yǎng)基成分13第13頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月6.滅菌處理避免雜菌污染，要對所用器械及工作場所進(jìn)行消毒與滅菌培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌，一般培養(yǎng)基0.1MPa，121.3℃15~30min14第14頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）微生物的消毒滅菌滅菌指利用物理和化學(xué)的方法殺滅或除去物料及設(shè)備中一切生命物質(zhì)的過程。消毒是指用物理或化學(xué)的方法殺死物料、容器、器具內(nèi)外的病原微生物，一般只能殺死營養(yǎng)細(xì)胞而不能殺死芽孢。消毒不一定能達(dá)到滅菌的要求，而滅菌則可達(dá)到消毒的目的無菌15第15頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月消毒滅菌方法：（一）干熱滅菌法（二）濕熱滅菌法（三）過濾除菌（四）紫外線殺菌（五）藥物殺菌16第16頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月（一）干熱滅菌法1.火焰滅菌法2.熱空氣滅菌法140~160℃2~3h17第17頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）濕熱滅菌法1.高壓蒸汽滅菌法121℃20~30min2.常壓蒸汽滅菌法3.常壓間歇滅菌法18第18頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月（三）過濾除菌薄膜濾菌器0.22μm和0.45μm19第19頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月（四）紫外線殺菌240~280nm波段紫外線殺菌力較強(qiáng)多以253.7nm作為紫外線殺菌波長特點：穿透力弱超凈工作臺：20第20頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月（五）藥物殺菌1.酒精2.新潔爾滅21第21頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月（三）認(rèn)識微生物培養(yǎng)所需的儀器設(shè)備1.培養(yǎng)平板22第22頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月2.試管與棉塞23第23頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月3.接種環(huán)，涂布棒24第24頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月4.高溫高壓蒸汽滅菌鍋25第25頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月p42高壓蒸汽滅菌請回顧滅菌鍋的操作方法26第26頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月1）用之前檢查水位及水質(zhì)。若水質(zhì)不好，需換水2）放置滅菌物品，勿過滿；瓶子滅菌，瓶蓋擰松3）蓋上鍋蓋，相對的兩個螺帽一起擰4）啟動加熱，同時打開放氣閥；檢查安全閥是否關(guān)上。調(diào)整溫度時間121℃15min。5）待排氣閥冒出大量熱氣并持續(xù)約2~5min后排盡冷空氣后，再將其關(guān)閉；6）滅菌結(jié)束，待壓力下降至0，可打開放氣閥，之后開蓋。注意防止?fàn)C傷7）固體物品可進(jìn)行干燥；液體物品冷卻后擰緊。盡量避免二次污染。27第27頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月5.鼓風(fēng)干燥箱28第28頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月6.超凈工作臺29第29頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月每次使用前，先用75%酒精（或新潔爾滅）擦洗臺面，并提前用紫外線滅菌燈照射15~30min處理凈化工作區(qū)內(nèi)積存的微生物；關(guān)閉滅菌燈后應(yīng)啟動風(fēng)機(jī)使之運轉(zhuǎn)2min后再進(jìn)行培養(yǎng)操作；工作區(qū)內(nèi)不應(yīng)存放不必要的物品，以保持潔凈氣流流型不受干擾；使用完畢應(yīng)及時清理工作臺面上的物品并用酒精擦拭臺面使之始終保持潔凈。30第30頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月7.微量移液器的使用31第31頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月今天的工作：1.固體物品的滅菌2.配制培養(yǎng)基并進(jìn)行滅菌3.學(xué)習(xí)倒平板4.學(xué)習(xí)斜面培養(yǎng)基制作5.超凈臺的準(zhǔn)備6.劃線接種7.滅菌效果檢查32第32頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月開始實驗1.固體物品：1）平皿（6只/組）2）試管與棉塞/塑料封口（6只/組）的包扎3）滅菌藍(lán)色、黃色和白色槍頭將以上物品放入滅菌鍋中進(jìn)行滅菌121℃20min33第33頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月2.培養(yǎng)基：培養(yǎng)基分液體、半固體和固體3種液體培養(yǎng)基有各種肉湯培養(yǎng)基，主要用于細(xì)菌擴(kuò)大培養(yǎng)；半固體培養(yǎng)基含0.4%瓊脂，主要用于保存細(xì)菌固體培養(yǎng)基含15%~20%瓊脂，主要用于分離細(xì)菌34第34頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏3g蛋白胨10gNaCl5g瓊脂15-20gpH7.4-7.6，加水至1000mL；若需分裝，需先融化，搖勻后分于121℃高壓滅菌15~20min備用用途：普通細(xì)菌常用的培養(yǎng)基（1）固體培養(yǎng)基配置35第35頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月請大家配制：請大家查看“營養(yǎng)瓊脂”的成分與配制說明，每組配置牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基150mL于錐形瓶中請大家先寫出1L的配方，然后再寫出150mL的配方36第36頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月配制完畢，將配制好的培養(yǎng)基裝入錐形瓶內(nèi)，瓶口塞上棉塞，用牛皮紙/報紙包扎瓶口，標(biāo)注好組別，進(jìn)行高溫高壓蒸汽滅菌37第37頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月（2）液體培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基中不含瓊脂牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液牛肉膏3g蛋白胨10gNaCl5gpH7.4-7.6，加水至1000mL于121℃高壓滅菌15~20min備用用途：普通細(xì)菌常用的培養(yǎng)基38第38頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月請大家查詢LB培養(yǎng)基配方每組配置LB液體培養(yǎng)基50mL于錐形瓶中，包扎好瓶口（紗布+牛皮紙/報紙）后滅菌請大家先寫出1L的配方，然后再寫出50mL的配方39第39頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月1.固體物品的滅菌√2.配制培養(yǎng)基并進(jìn)行滅菌√3.學(xué)習(xí)斜面培養(yǎng)基制作4.學(xué)習(xí)倒平板5.超凈臺的準(zhǔn)備6.劃線接種7.滅菌效果檢查40第40頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月3.如何倒平板（1）超凈工作臺的準(zhǔn)備將超凈工作臺臺面用酒精棉球擦干凈；關(guān)上門后，紫外燈打開，滅菌15-30min滅菌結(jié)束，打開風(fēng)機(jī)41第41頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月2.加熱融化培養(yǎng)基（若為剛滅菌結(jié)束未凝固的培養(yǎng)基，則略）將培養(yǎng)基放入微波爐內(nèi)加熱融化，注意觀察，不要加熱時間過長或溫度過高，以免液體濺出。42第42頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月4.倒平板超凈工作臺滅菌完畢，關(guān)紫外燈，打開風(fēng)機(jī)；超凈工作臺門不能開太高，約20cm即可；用新潔爾滅棉球擦拭工作臺和手；將酒精燈瓶外擦干凈，轉(zhuǎn)移入工作臺；將已融化的培養(yǎng)基瓶身擦干凈，轉(zhuǎn)移入工作臺；待培養(yǎng)基冷卻至50°C左右（不燙手為原則，但是不可冷卻過度），倒平板。43第43頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月平板要求：平板平整，無凸起；平板無“掛壁”；培養(yǎng)基布滿整個平皿倒平板操作視頻44第44頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月平板倒制結(jié)束，靜置，待凝固使用45第45頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月4.學(xué)習(xí)斜面培養(yǎng)基制作取無菌試管，倒入1/3高度的培養(yǎng)基，塞上蓋子，斜靠，使得斜面長度3~4cm，待凝固后使用46第46頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月請大家先制備4個試管的斜面培養(yǎng)基，然后將剩余培養(yǎng)基用于制備平板47第47頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月1.固體物品的滅菌√2.配制培養(yǎng)基并進(jìn)行滅菌√3.學(xué)習(xí)斜面培養(yǎng)基制作√4.學(xué)習(xí)倒平板√5.超凈臺的準(zhǔn)備√6.滅菌效果檢查7.劃線接種48第48頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月6.滅菌效果檢查49第49頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月生化培養(yǎng)箱為微生物培養(yǎng)提供恒溫設(shè)備（固體培養(yǎng)基）50第50頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月7.平板劃線法：取一接種環(huán)細(xì)菌，左手持平皿將蓋口微開，用沾有細(xì)菌的接種環(huán)在瓊脂平板上劃直線；接種環(huán)火焰滅菌，待冷卻，再用接種環(huán)在頂端邊緣劃線處沾取標(biāo)本繼續(xù)劃線，如此劃4~5次，劃畢加蓋。并用蠟筆在皿底玻璃上寫明接種菌名