實驗三動物性食品生物性污染的檢驗

實驗三動物性食品生物性污染的檢驗第1頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月一.生物性污染的來源微生物污染(microorganismpollution)寄生蟲污染(parasiticalpollution)昆蟲污染(insecticalpollution)第2頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月PathogensSpoilageOrganismsVirusesBacteriumFoodborneInfectionMicroorganismsUnpleasantsmellandtasteFungi第3頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月內源性污染外源性污染外源性生物性污染是動物性食品微生物污染的主要途徑第4頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月二.生物性污染的評價指標菌落總數細菌總數大腸菌群值（MPN）致病菌檢測(PCR法)其他第5頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗目的掌握動物性食品菌落總數、大腸菌群測定及常見致病菌PCR檢測的原理、步驟和方法了解動物性食品菌落總數的衛(wèi)生標準，進行衛(wèi)生判定第6頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月1.鮮乳的微生物學檢驗菌落總數的測定檢驗處理24±2h或48±2h36±1℃報告菌落記數每皿加入適量營養(yǎng)瓊脂選擇3個適宜稀釋度，吸取1ml加入滅菌平皿作成幾個倍數的稀釋液第7頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月注意事項無菌操作稀釋度的選擇平均菌落數在30-300之間的稀釋度為宜；每個稀釋度作兩個平皿記數要求30-300＞300＜30＞300或＜30第8頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月2.鮮乳大腸菌群值的測定第9頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月報告根據證實為大腸菌群陽性的管數，查MPN檢索表，報告每100mL(g)檢樣中大腸菌群的最可能數。判定標準第10頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月3.常見致病菌的快速檢測

——SE的PCR檢測原理以擴增的DNA分子為模板，以一對分別與模板互補的寡核苷酸片段為引物，在DNA聚合酶的作用下，按半保留復制的機制沿著模板鏈延伸直至完成新的DNA合成。不斷重復這一過程，可使目的DNA片段得到擴增。因為新合成的DNA也可以作為模板，因而PCR可使DNA的合成量呈指數增長。第11頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月PCR的基本成分模板DNA特異性引物(SEF14)熱穩(wěn)定DNA聚合酶dNTP二價陽離子緩沖液過程(高溫變性、低溫退火、中溫延伸)第12頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月引物設計

利用引物設計軟件Primer5.0針對SEF14主要結構亞單位sefA的基因序列設計引物:上游引物UsefA為5′-ATGCGTAAATCAGCATCTG-3′；下游引物LsefA為5′-TTAGTTTTGATACTGCTGAAC-3′第13頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月樣品處理（模板制備）以12000rpm離心5min,上清液即含基因組DNA待檢肉樣乳1g/mL以9mL增菌液混合研碎，制成食品勻漿液37℃振蕩培養(yǎng)3小時取樣液1mL以2000rpm離心2min,取上清液以8000rpm離心5min,沉淀以50uL懸浮沸水浴10min后迅速置冰浴5min第14頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月反應體系10×Buffer2.5uLdNTP2.0MgCl22.0上游引物（20uM）1uL下游引物（20uM）1uL模板2uLTaqDNAPolymerase0.25滅菌ddH2Oupto25uL第15頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月反應參數1.Initialdenature95℃5min2.Denature95℃60s3.Anealing47℃60s4.Elongation72℃60sReturnto2for30cycle5.Finalelongation72℃10minKeep4℃5min第16頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月瓊脂糖凝膠電泳電泳條件：argrose1%U80VT50minPCR產物+