臨床初級基礎(chǔ)檢驗學(xué)課件

臨床基礎(chǔ)檢驗學(xué)重點：末梢血采集方法和血涂片制備技術(shù)。難點：各種抗凝劑的優(yōu)缺點和使用選擇。內(nèi)蒙古民族大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院趙文海臨床基礎(chǔ)檢驗學(xué)重點：末梢血采集方法和血涂1緒論一、臨床檢驗（clinicallaboratorytechnologyorscience）又稱實驗診斷學(xué)，就是通過實驗室的各種檢查方法，包括感官檢查、理學(xué)檢查、化學(xué)檢查、顯微鏡檢查以及自動化儀器檢查等，對病人的血液、體液、分泌物和排泄物等標本進行檢查、分析，以獲得病原、病理變化及臟器功能狀態(tài)等資料。緒論一、臨床檢驗（clinicallabora2二、臨床檢驗在醫(yī)學(xué)中的作用

1、為準確診斷、及時治療提供依據(jù)臨床檢驗的結(jié)果是支持診斷、鑒別診斷、甚至確定診斷的主要依據(jù)。例：anemia依據(jù)：血中紅細胞和血紅蛋白量減少leukemia依據(jù)：血象和骨髓象腎臟有實質(zhì)性損傷的依據(jù)尿液中出現(xiàn)蛋白、細胞管型問：tumor？二、臨床檢驗在醫(yī)學(xué)中的作用1、為準確診斷、及時治療提供依據(jù)32、為分析病情、觀察療效、判斷預(yù)后提供依據(jù)在疾病過程中，血液、體液、分泌物和排泄物也會隨之發(fā)生相應(yīng)的變化3、為預(yù)防疾病提供資料如血象和腫瘤細胞學(xué)的普查等2、為分析病情、觀察療效、判斷預(yù)后提供依據(jù)在疾病過程中，血液4三、臨床檢驗的一般方法1、目視檢查直接觀察標本：顏色、透明度、性狀，有無凝塊或寄生蟲2、理學(xué)檢查液體的相對密度、血液比粘度、紅細胞沉降率、紅細胞比積等病理變化3、化學(xué)檢查定性和定量檢測標本化學(xué)成分的病理變化4、顯微鏡檢查觀察有型成分的數(shù)量和形態(tài)5、自動化儀器檢查電子技術(shù)、程序控制的發(fā)展三、臨床檢驗的一般方法1、目視檢查直接觀察標本：顏色、透明度5四、學(xué)習(xí)臨床檢驗的目的和要求1、理論聯(lián)系實踐2、操作要求3、檢驗結(jié)果必須和臨床表現(xiàn)結(jié)合4、檢驗人員的醫(yī)德四、學(xué)習(xí)臨床檢驗的目的和要求1、理論聯(lián)系實踐2、操作要求3、6第一章一般性操作技術(shù)血液學(xué)檢查：反應(yīng)造血系統(tǒng)本身、機體全身或局部病變有助于疾病的診斷及療效、預(yù)后的觀察只能反應(yīng)疾病某一方面的情況，不能認為是病程的全部反應(yīng)；不同個體，對同一影響有不同的反應(yīng)，或也可對不同影響產(chǎn)生相同的反應(yīng)第一章一般性操作技術(shù)血液學(xué)檢查：反應(yīng)造血系統(tǒng)本身7一、血液標本的采集1、毛細血管采血法部位：中指或無名指尖內(nèi)側(cè)，半歲以下拇指或足部，特殊人員視情況而定。b.所用器材：采血針、吸管c.采血步驟及注意事項一、血液標本的采集1、毛細血管采血法部位：中指或無名指尖內(nèi)側(cè)82、靜脈采血法部位：主要是肘靜脈。還可以在：手背部手腕部等幼兒可采用頸外靜脈采血。采血器材：一次性注射器，檢驗用真空定量采血裝置c.采血步驟及注意事項2、靜脈采血法部位：主要是肘靜脈。還可以在：手背部手腕部等采9兩種采血方法的優(yōu)缺點比較毛細血管靜脈血缺點限制了重復(fù)實驗和追加實驗，標本量少，局部炎癥可得假結(jié)果，組織液可混入不同抗凝劑的使用，改變血液性質(zhì)，影響有形成分的形態(tài)優(yōu)點價廉、快速、操作簡便，標本可直接測定標本代表性大，無組織液影響，適于臨床研究，可重復(fù)實驗和追加其他實驗兩種采血方法的優(yōu)缺點比較毛細血管靜脈血缺點限制了重復(fù)實驗和追10二、常用血液標本抗凝劑

及其使用選擇1、檸檬酸鈉（枸櫞酸鈉）a.抗凝原理：螯合鈣離子使用方法配成109mmol/L的濃度和血液1：9106mmol/L的濃度和血液1：4化學(xué)名：3-羥基-3-羧基戊二酸（三鈉鹽）c.適用范圍：止血學(xué)檢驗、血沉、輸血保養(yǎng)液（毒性?。┒?、常用血液標本抗凝劑

及其使用選擇1、檸檬酸鈉（枸櫞酸鈉）112.草酸鈉（乙二酸的鈉鹽）a.抗凝原理：草酸鈣沉淀b.使用方法草酸鈉0.1mol/L和血液1：9c.適用范圍：止血學(xué)檢驗2.草酸鈉（乙二酸的鈉鹽）a.抗凝原理：草酸鈣沉淀b123.雙草酸鹽抗凝劑a.抗凝原理：草酸鈣沉淀使用方法：草酸鉀0.8g,草酸銨1.2g（100ml）與血液1：10（80°C以下烘干）適用范圍：紅細胞檢驗（紅細胞比積、計數(shù)）不適于血小板計數(shù)和白細胞分類計數(shù)3.雙草酸鹽抗凝劑a.抗凝原理：草酸鈣134.肝素（含硫酸基團的粘多糖）抗凝原理：低濃度時抑制因子Ⅸa、Ⅷ和PF3之間的作用，加強抗凝血酶Ⅲ滅活絲氨酸蛋白酶，從而阻止凝血酶形成，還能抑制凝血酶的自我催化及抑制因子Ⅹ的作用；高濃度時阻斷凝血酶和纖維蛋白的反應(yīng)。

b.適用方法：1g/L濃度的肝素鈉與血液1：104.肝素（含硫酸基團的粘多糖）抗凝原理14優(yōu)點：抗凝能力強、不影響血細胞體積、不易溶血、能耐高溫。適用范圍：紅細胞檢驗（紅細胞計數(shù)、血紅蛋白測定、紅細胞比積）和多種生化分析優(yōu)點：抗凝能力強、不影響血細胞體積、不易適用范圍：紅細胞155.乙二胺四乙酸（EDTA）鹽a.抗凝原理：螯合鈣離子b.使用方法：15g/L濃度EDTA和血液1：10適用范圍：對血細胞形態(tài)影響小---血小板計數(shù)；影響血小板聚集和白細胞吞噬功能---不易做止血學(xué)檢驗及血小板功能檢驗。

5.乙二胺四乙酸（EDTA）鹽a.抗凝原理：16物理方法抗凝：

脫纖維蛋白：將血液注入有玻璃珠的器皿中，轉(zhuǎn)動，纖維蛋白纏繞凝固于玻璃球，從而防止血成凝塊。適用于免疫學(xué)檢驗和紅斑性狼瘡細胞檢查。物理方法抗凝：17三、血涂片的制備技術(shù)血涂片的用途：血細胞形態(tài)學(xué)檢驗、網(wǎng)織紅、異常

寄生蟲檢驗。2.血涂片制備步驟：（手工推片法）三、血涂片的制備技術(shù)血涂片的用途：血細胞形態(tài)學(xué)檢驗、網(wǎng)織18將推玻片向1的方向稍抽回，當血液充滿推玻片的寬度后，以一定均勻的速度向2的方向滑動。將推玻片向1的方向稍抽回，當血液充滿推玻片的寬度后，以一定均193.血涂片質(zhì)量評價：均勻、厚薄、頭體尾、邊緣、兩側(cè)注意：血滴大，速度快、角度大----血膜厚3.血涂片質(zhì)量評價：均勻、厚薄、頭體尾、邊緣、兩側(cè)注20臨床初級基礎(chǔ)檢驗學(xué)課件21四、細胞染色技術(shù)

染料---生物學(xué)染色劑：將生物組織細胞和病原體染色，在顯微鏡下觀察結(jié)構(gòu)。（一）、染料（天然染料和人工染料）發(fā)色基團和助色基團使生物學(xué)染色劑產(chǎn)生顏色和被染組織親合。四、細胞染色技術(shù)

染料---生物學(xué)染色劑：將生物組織細胞22堿性染料：為陽離子染料，能接受質(zhì)子，染細胞核的染料。如亞甲藍、天青。酸性染料：為陰離子染料，能釋放質(zhì)子。主要有熒烷-氧雜蒽染料和偶氮染料兩類，能結(jié)合細胞的堿性成分并染色，如血紅蛋白、嗜酸性顆粒成分等。3.復(fù)合染料：同時具有陰、陽離子型的染料如瑞氏染料堿性染料：為陽離子染料，能接受質(zhì)子，染細胞核酸性染料：為陰離23（二）、細胞染色原理：一般以它們的物理現(xiàn)象和/或化學(xué)現(xiàn)象為依據(jù)1.物理作用：毛細管現(xiàn)象、滲透、吸收、吸附作用等化學(xué)作用：a.染料的化學(xué)成分：助色基團的存在，堿性染料在溶媒中為陽離子型，易與組織和細胞內(nèi)帶負電荷的酸性物質(zhì)結(jié)合；而酸性染料在溶媒中為陰離子型，與帶正電荷的堿性物質(zhì)結(jié)合。（二）、細胞染色原理：一般以它們的物理現(xiàn)象和/或化學(xué)1.24b.蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)：蛋白質(zhì)中的氨基酸含有不同數(shù)量的氨基（-NH2）和羧基（-COOH），同時還有其他活性基團。在游離狀態(tài)時，-NH2獲得一個H+變成帶正電的-NH3+，而-COOH失去一個H+變成帶負電的-COO-。分別與不同染料結(jié)合。c.周圍環(huán)境的酸堿度：如環(huán)境pH＜pI（pI為等電點），則蛋白質(zhì)帶正電，結(jié)合酸性染料；反之，pH＞pI，則結(jié)合堿性染料。b.蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)：蛋白質(zhì)中的氨基酸含有不25（三）、細胞染色法的類型1.普通染色法：經(jīng)物理和/或化學(xué)作用的吸附、結(jié)合2.熒光染色法：熒光染料，熒光顯微鏡3.細胞活體染色法：活體染料如燦爛甲酚藍等4.細胞化學(xué)染色法：用化學(xué)反應(yīng)顯示細胞內(nèi)某種成分。細胞免疫化學(xué)染色法（應(yīng)用單克隆抗體技術(shù)、酶標記技術(shù)）

（三）、細胞染色法的類型26五、瑞氏染色法（一）、染色原理分兩相進行，第一相是酸性伊紅與細胞中的堿性物質(zhì)如血紅蛋白、嗜酸性顆粒結(jié)合；堿性染料天青B與細胞中的酸性物質(zhì)如核染色質(zhì)、特異中性顆粒、血小板結(jié)合。第二相是天青B和伊紅結(jié)合在適宜條件下形成紫色的天青B-伊紅復(fù)合物，結(jié)果使白細胞核染色質(zhì)成紫色（瘧原蟲的染色質(zhì)成紅色），中性粒細胞的顆粒及血小板顆粒區(qū)成紫色。五、瑞氏染色法（一）、染色原理27（二）、試劑1.Wright染液瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml甲醇：有強大的脫水力，可將細胞固定為一定形態(tài)，并使蛋白質(zhì)沉淀為顆粒狀、網(wǎng)狀等結(jié)構(gòu)，增加細胞與染料接觸表面積，提高對染料的吸附作用，增強染色效果。磷酸鹽緩沖液（PBS）：磷酸二氫鉀（無水）0.3g，磷酸氫二鈉（無水）0.2g,蒸餾水加到1000ml。配好后用磷酸鹽溶液校正pH，塞緊瓶口備用。（二）、試劑磷酸鹽緩沖液（PBS）：磷酸二氫鉀（無水）0.328染色方法：a.用蠟筆在血膜兩頭劃線，平放于染色架上。b.加瑞氏染液覆蓋血膜，固定1min。c.滴加等量或稍多的緩沖液，混勻，染色5-10分鐘。d.用清水沖洗，待干后鏡檢。染色方法：29注意事項：

a.血膜要干透后才能染色，否則染色時易脫落b.染色時間與染液濃度、室溫及細胞多少有關(guān)，一般染液淡、染色時間長些效果好。c.染液不能過少，以防蒸發(fā)沉淀。d.沖洗時不能先倒掉染液，應(yīng)以流水沖，防染料沉著。沖洗時間也不能長。e.染色過淡，可復(fù)染。f.染色過深可用水沖洗或浸泡，還可用甲醇脫色注意事項：30臨床初級基礎(chǔ)檢驗學(xué)課件31六、姬姆薩染色法