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實驗報告2019.7.29~2019.9.1實驗報告2019.7.29~2019.9.11PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）1.目的：在物質(zhì)中提取的DNA量較少，之后大量擴(kuò)增，獲得大量目的片段2.原理及過程：熱變性溫度：95度（計算方法：每對AT為2度，CG為4度）過程：DNA雙鏈斷裂形成單鏈復(fù)性溫度：55度過程：引物配對上DNA單鏈延伸溫度：72度過程：DNA酶催化DNA互補(bǔ)鏈的延伸循環(huán)（大約循環(huán)20~30次）PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）1.目的：在物質(zhì)中提取的DNA量較少23.反應(yīng)成分模板DNA、引物、dNTP、Mix緩沖液（DNA聚合酶、鎂離子）、去離子水4.方向：5’~3’5.產(chǎn)生數(shù)量反應(yīng)初期以指數(shù)形式增加，之后進(jìn)入平臺期3.反應(yīng)成分3聚丙烯酰胺凝膠電泳1.配膠、制膠用量：25ml大小的膠需要2.0g的瓊脂糖凝膠固體。若目的DNA片段量過小可增加瓊脂糖凝膠的濃度；相反，若DNA片段過大，可降低瓊脂糖凝膠的濃度方法：配膠用單蒸水溶解，在微波爐中加熱，放置微燙手，再加入核酸染液約20微升，可倒入膠板中等待凝固加樣在一次性手套上將LoadingBuffer與樣液混勻（6×LoadingBuffer為LoadingBuffer：樣液=1：5）聚丙烯酰胺凝膠電泳1.配膠、制膠4保種保種液：25%甘油：將菌液低轉(zhuǎn)速（5000rpm）大約離心2600ml的菌液（2管離心管）50%甘油：將菌液和保重液同體積混合保種貯藏加入600~700微升的保種液，放置在-80度中（保種管、離心管）保存保種保種液：5生物膜的抑膜與解膜抑膜與解膜的定義：抑膜是在細(xì)菌生長的同時加入化合物是細(xì)菌不成膜；解膜是利用化合物降解已存在的細(xì)胞膜。對致病菌的認(rèn)識：枯草芽孢桿菌：陽性菌，形成的細(xì)胞膜在液體與氣體表面，褶皺銅綠假單胞菌：陰性菌，形成的細(xì)胞膜在液體底部金黃色葡萄球菌：陽性菌，形成的細(xì)胞膜在液體底部生物膜的抑膜與解膜抑膜與解膜的定義：抑膜是在細(xì)菌生長的同時加6對成膜條件的嘗試將涂平板的細(xì)菌接入液體培養(yǎng)基（LB）中，搖床24小時左右在酶標(biāo)儀中測量LB中的細(xì)菌數(shù)，將細(xì)菌稀釋到5×10^5，放入24孔板中培養(yǎng)，總體積約1~1.5ml對成膜條件的嘗試7實驗設(shè)計：對照：Msgg培養(yǎng)基+菌液陰性對照：Msgg培養(yǎng)基+菌液+DMSO實驗組：Msgg培養(yǎng)基+菌液+不同濃度梯度的化合物實驗結(jié)果

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