猴頭菇液體培養(yǎng)基的篩選與優(yōu)化

猴頭菇液體培養(yǎng)基的篩選與優(yōu)化

猴頭蘑菇以像猴頭的形狀而聞名。這是一種著名的藥物，具有很高的營養(yǎng)價值和藥物價值。1材料和方法1.1試驗細(xì)菌使用菌種來自北京祥云興隆農(nóng)業(yè)科技發(fā)展有限公司。1.2培養(yǎng)基制備猴頭菇菌種活化采用PDA培養(yǎng)基：葡萄糖20g，瓊脂粉15g，土豆汁200mL，水1000mL,pH自然1.3接種塊大小的確定用接種針挑取供試菌株母種接種塊，接種于PDA試管斜面的中間，接種塊大小0.2×0.2×0.2(cm),25℃下培養(yǎng)10天。以復(fù)壯試管為母種接種于PDA平板的中間，接種塊大小0.3×0.3×0.2(cm),25℃下培養(yǎng)10天，搖瓶使用。1.4凈化設(shè)備的使用YXQ-L375S11型立式壓力蒸汽滅菌器、博訊電熱鼓風(fēng)干燥箱、美的電磁爐、凈化工作臺（100級）、HYG-A全溫?fù)u瓶柜、SH-250生化培養(yǎng)箱等。1.5紡織織物失失率測定先稱好平板和紗布的重量，再用紗布過濾培養(yǎng)結(jié)束的猴頭菇培養(yǎng)液，將上清液用純化水沖洗2～3遍，把紗布和菌絲體放在平板上，一起送入電熱鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)于80℃烘干，稱重。另稱取相同重量的紗布烘干后計算其失水重量。以烘干后總重量減去平板和紗布的重量，再加上紗布失水重量，計算獲得菌絲體干重，即菌絲生物量。1.6碳源篩選、活化與滅制設(shè)5組試驗，分別將2.0%葡萄糖、2.0%白砂糖、2.0%甘薯粉（自制）、2.0%玉米粉、2.0%乳糖等5種碳源添加至碳源篩選基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，分裝于500mL三角瓶中，每瓶分裝200mL，每組試驗設(shè)3個重復(fù)。使用高壓蒸汽滅菌鍋121℃滅菌30min。冷卻至室溫后，用0.6cm打孔器對平板打孔，每瓶接種4個接種塊，于24.5℃150r/min搖床培養(yǎng)8天，測量菌絲體干重。1.7培養(yǎng)基與菌種制備設(shè)4組試驗，分別將0.3%豆粕粉、0.3%麩皮粉、0.3%蛋白胨、0.3%酵母粉等4種氮源添加至氮源篩選基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，分裝于500mL錐形瓶中，每瓶分裝200mL，每組設(shè)3個重復(fù)。使用高壓蒸汽滅菌鍋121℃滅菌30min。冷卻至室溫后，用0.6cm打孔器對平板打孔，每瓶接種4個接種塊，于24.5℃150r/min搖床培養(yǎng)8天，測量菌絲體干重。1.8液體培養(yǎng)基中玉米粉的添加量試驗設(shè)5組試驗，以1.6%白砂糖、0.3%蛋白胨、0.1%KH1.9液體培養(yǎng)基中的糖添加量試驗設(shè)4組試驗，以0.3%玉米粉、0.3%蛋白胨、0.1%KH1.10試驗設(shè)計：試驗設(shè)計使用篩選的3種碳源、3種氮源，以及無機鹽、維生素進(jìn)行正交試驗（表1），共9組試驗，每組試驗設(shè)3個重復(fù)。使用500mL三角瓶，每瓶分裝200mL，采用高壓蒸汽滅菌鍋121℃滅菌30min，冷卻后，每瓶接種4個接種塊，于24.5℃150r/min搖床培養(yǎng)8天，測量菌絲干重。2結(jié)果與分析2.1甘薯粉的病原菌生物量由圖1可知，猴頭菇菌絲能夠分解多種碳源，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加2.0%玉米粉的菌絲生物量最高，為4.7mg/mL，與其他組存在顯著性差異；添加甘薯粉的菌絲生物量次之，為2.3mg/mL，與其他組存在顯著性差異；再次為白砂糖，菌絲生物量為0.3mg/mL，與葡萄糖和乳糖之間無顯著性差異。表明玉米粉和甘薯粉是猴頭菇液體發(fā)酵的適宜碳源。2.2不同酵母、麩皮、豆?jié){粉生物量由圖2可知，酵母粉較有利于猴頭菇菌絲生物量的增加，試驗產(chǎn)生的菌絲生物量為3.5mg/mL；麩皮粉次之，為2.5mg/mL；豆粕粉位居第三，為2.0mg/mL。差異顯著性分析的結(jié)果，蛋白胨組的菌絲生物量較低，與酵母、麩皮、豆粕各組之間存在顯著差異。因此，麩皮粉、酵母粉和豆粕粉是猴頭菇菌絲的良好氮源。2.3加玉米粉添加量菌絲量隨玉米粉添加量的增加而增加（圖3）。其中，1.6%添加量的菌絲生物量最高，為7.9mg/mL;0.8%添加量次之，為7.1mg/mL;0.4%和0.2%添加量分別為4.3mg/mL和3.9mg/mL；不加玉米粉的最差，僅為0.1mg/mL，添加0.2%玉米粉是未添加的39倍。通過觀察，玉米粉添加量為1.6%的搖瓶培養(yǎng)液通透性較差，推測玉米粉含量過高較易糊化。因此建議玉米粉添加量不要超過3%。試驗中采用白砂糖、葡萄糖、乳糖的通透性雖高，但獲得菌絲體很少；甘薯粉和玉米粉通透性雖差但菌絲量高，推測因菌絲體的培養(yǎng)需要附著物，玉米粉和甘薯粉140目為顆粒物，能起到這種作用。試驗表明，在1.6%的添加量范圍內(nèi)，玉米粉添加量與菌絲生物量呈正相關(guān)關(guān)系。2.4．2添加量的影響由圖4可見，菌絲量隨白砂糖含量增加而增多。添加3.2%的白砂糖，菌絲生物量最高，達(dá)7.5mg/mL，與其他添加量之間存在顯著差異；2.4%和1.6%添加量，分別為4.8mg/mL和4.4mg/mL，差異不顯著；0.8%添加量的菌絲生物量最低，為3.3mg/mL。說明在相同條件下在3.2%添加量范圍內(nèi)，白砂糖添加量與菌絲生物量呈正相關(guān)關(guān)系。2.4不同碳源和氮源對猴頭菇液體發(fā)酵的影響正交試驗的結(jié)果與猴頭菇液體培養(yǎng)的菌絲體干重見表2。極差R結(jié)果反映4個影響因子順序依次為A碳源>B氮源>C無機鹽>D維生素。說明碳源和氮源是影響猴頭菇液體發(fā)酵和培養(yǎng)的主要因子。試驗中以玉米粉、酵母粉作為猴頭菇液體培養(yǎng)基的碳源和氮源的菌絲生物量較高。通過正交試驗，得到猴頭菇液體培養(yǎng)基的最優(yōu)配方組合A3B3C2D3，即玉米粉2.0%、酵母粉0.3%、KH3討論3.1液體培養(yǎng)基的原料猴頭菇培養(yǎng)可以使用多種碳源和氮源，其中復(fù)合碳源（玉米粉和甘薯粉）作為液體培養(yǎng)基碳源的菌絲生物量較高，玉米粉又優(yōu)于甘薯粉。推測菌絲體的培養(yǎng)需要附著物，玉米粉和甘薯粉可以起到這種作用。培養(yǎng)基中添加部分白砂糖和葡萄糖作為前期的碳源會更好。酵母粉、麩皮粉、豆粕粉是猴頭菇液體培養(yǎng)基的良好氮源，培養(yǎng)基中菌球分布均勻，大小一致。這與有機氮源營養(yǎng)豐富，氨基酸種類齊全密切相關(guān)。蛋白胨的菌絲量不如酵母粉、麩皮粉、豆粕粉，這可能與