蛋白質(zhì)分離純化

蛋白質(zhì)分離純化實用文檔第1頁蛋白質(zhì)分離純化（一）材料1、選材2、破碎3、混合物分離（二）粗分級（三）細(xì)分級（四）結(jié)晶實用文檔第2頁樣品前處理1、生物樣品選擇和處理

樣品選擇：有效成份含量高、起源豐富、保持新鮮、試驗條件恒定、取材工藝簡單、有綜合利用價值等。

處理：包括清除脂肪、結(jié)締組織等。2、細(xì)胞破碎：機(jī)械破碎法、物理學(xué)辦法、化學(xué)法、酶學(xué)法3、抽提（extraction）：是指在一定條件下，用合適溶劑和辦法，使有效成份充足溶解到溶劑過程。實用文檔第3頁蛋白質(zhì)分離辦法根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度差異分離—沉淀技術(shù)根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小差異分離根據(jù)蛋白質(zhì)荷電差異分離根據(jù)蛋白質(zhì)與某些物質(zhì)吸附差異—吸附分離利用生物分子專一性結(jié)合特性—親和層析實用文檔第4頁根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度差異分離—沉淀技術(shù)可逆沉淀：等電點沉淀、鹽析法、有機(jī)溶劑沉淀不可逆沉淀：熱變性沉淀、重金屬鹽沉淀、有機(jī)酸沉淀實用文檔第5頁1、根據(jù)溶解度不一樣（1）鹽析（saltingout）

1）定義：在稀鹽溶液中，蛋白質(zhì)溶解度隨鹽濃度增加而升高這種現(xiàn)象稱為鹽溶（saltingin），但當(dāng)鹽濃度增加到一定量時，其溶解度又逐漸下降，直到某一濃度時便從溶液中沉出，即為鹽析（saltingout）。

2）原理

Saltingin：蛋白質(zhì)吸附某種離子→蛋白質(zhì)彼此排斥，而蛋白質(zhì)與水互相作用加強(qiáng)→溶解度提升。

Saltingout：大量中性鹽加入→破壞蛋白質(zhì)分子表面水活膜，減少水活度，蛋白質(zhì)表面電荷被中和→蛋白質(zhì)互相聚集而析出。

3）鹽析中最常用鹽是：

(NH4)2SO4、Na2SO4、MgSO4，尤其以(NH4)2SO4為最佳。

原因：(NH4)2SO4溶解度大而溫度系數(shù)小，分離效果好，能保持蛋白質(zhì)天然構(gòu)象，且價廉可得，這是蛋白質(zhì)粗提純一種最常用辦法。實用文檔第6頁（2）等電點沉淀法

1）pH偏離pI時，蛋白質(zhì)帶相同符號凈電荷而互相排斥→蛋白質(zhì)溶解度大。

2）pH=pI時，蛋白質(zhì)凈電荷為0→蛋白質(zhì)聚集沉淀

3）等電點沉淀法缺陷：沉淀不完全。（3）有機(jī)溶劑沉淀法

1）原理：有機(jī)溶劑能減少溶液電解常數(shù)，從而增加蛋白質(zhì)分子上不一樣電荷引力，造成溶解度減少；另外，有機(jī)溶劑與水作用，能破壞蛋白質(zhì)水化膜。

2）注意：高濃度有機(jī)溶劑易引發(fā)蛋白質(zhì)變性失活，操作必須在低溫下進(jìn)行，并在加入有機(jī)溶劑時注意攪拌均勻以避免局部濃度過大。實用文檔第7頁2、根據(jù)分子大小不一樣（1）透析和超濾

1）透析（Dialysis）：

就是利用蛋白質(zhì)分子不能通過半透膜（Semipermeablemembrane）而小分子能夠自由透過性質(zhì)，使蛋白質(zhì)與小分子物質(zhì)分開。

作用：脫鹽、無機(jī)離子和小分子物質(zhì)等。

透析膜：動物膜、羊皮紙、火棉膠、賽璐玢或其他材料等。實用文檔第8頁透析——只用于除鹽類和小分子雜質(zhì)實用文檔第9頁透析——只用于除鹽類和小分子雜質(zhì)實用文檔第10頁2）超濾（ultrafiltration）：

是利用壓力和離心力，借助于超濾膜將不一樣分子量物質(zhì)分離技術(shù)。

Ultrafiltration功能：純化和濃縮（同PEG，聚乙二醇）。

Ultrafiltration膜：丙烯氰、醋酸纖維素、硝酸纖維素和尼龍等。實用文檔第11頁超出濾——除小分子雜質(zhì)，分離、濃縮蛋白質(zhì)加壓蛋白質(zhì)溶液半透膜支持膜柵板超濾液實用文檔第12頁（2）凝膠層析又叫分子篩層析。分子篩是具有三維空間網(wǎng)狀構(gòu)造物質(zhì)，有天然，也可人工合成。根據(jù)網(wǎng)孔不一樣可制成不一樣規(guī)格。具有條件：1、惰性，2、水不溶性，3、能高度水化。常用分子篩：葡聚糖凝膠（Sephadex）

型號：G200、G150、G100、G75、G50、G25、G15

分離大蛋白質(zhì)、小蛋白質(zhì)，除鹽瓊脂糖凝膠（瑞典Sepharose、美國Bio-GelA）

孔徑大，用于分離大分子物質(zhì)

聚丙烯酰胺凝膠（Bio-GelP）實用文檔第13頁原理：1、分子量大物質(zhì)不能進(jìn)入凝膠粒子內(nèi)部，隨洗脫液從凝膠粒子之間空隙擠落下來，因此大分子物質(zhì)遷移速度快；2、小分子物質(zhì)要通過凝膠網(wǎng)孔進(jìn)入凝膠粒子內(nèi)部，因此小分子物質(zhì)遷移速度慢。實用文檔第14頁實用文檔第15頁實用文檔第16頁實用文檔第17頁實用文檔第18頁（3）密度梯度離心原理：不一樣顆粒之間存在沉降系數(shù)差時，在一定離心力作用下，顆粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不一樣區(qū)域上形成區(qū)帶辦法。實用文檔第19頁密度梯度離心滴加樣品4%8%12%16%20%塑料離心管蔗糖密度梯度（介質(zhì)還可用：氯化銫、甘油等）蔗糖濃度%分子量由小—————

大實用文檔第20頁3、根據(jù)帶電性質(zhì)不一樣電泳法離子交換層析實用文檔第21頁（1）電泳法類型：1、區(qū)帶電泳紙電泳、醋酸纖維素薄膜電泳、粉末電泳、細(xì)絲電泳、凝膠電泳。凝膠電泳包括：瓊脂糖凝膠、淀粉凝膠、硅膠凝膠、聚丙烯酰胺凝膠。聚丙烯酰胺凝膠包括：垂直板電泳、盤狀電泳、等電聚焦電泳、梯度電泳、免疫電泳。2、自由界面電泳：支持物為溶液，很少用。實用文檔第22頁垂直板電泳實用文檔第23頁垂直板電泳實用文檔第24頁垂直板電泳實用文檔第25頁聚丙烯酰胺凝膠電泳

聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺（簡稱Acr）單體和少許交聯(lián)劑甲叉雙丙烯酰胺（簡稱Bis）通過化學(xué)催化劑（過硫酸銨），四甲基乙二胺（TEMED）作為加速劑或光催化聚合作用形成三維空間高聚物。聚合后聚丙烯酰胺凝膠形成網(wǎng)狀構(gòu)造。具有濃縮效應(yīng)、電荷效應(yīng)、分子篩效應(yīng)。

實用文檔第26頁連續(xù)系統(tǒng)：電泳體系中緩沖液pH值及凝膠濃度相同，帶電顆粒在電場作用下，主要靠電荷和分子篩效應(yīng)。不連續(xù)系統(tǒng)：緩沖液離子成份，pH，凝膠濃度及電位梯度均不連續(xù)性，帶電顆粒在電場中泳動不但有電荷效應(yīng)，分子篩效應(yīng)，還具有濃縮效應(yīng)，因而其分離條帶清楚度及辨別率均較前者佳實用文檔第27頁在濃縮膠中三個主要作用角色：

實用文檔第28頁濃縮效應(yīng)：

實用文檔第29頁SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳蛋白質(zhì)在電場中遷移率取決于它所帶凈電荷以及分子大小和形狀等原因。加入SDS（十二烷基磺酸鈉）和少許巰基乙醇，則蛋白質(zhì)分子遷移率主要取決于它分子量，而與本來所帶電荷、分子形狀無關(guān)。SDS是變性劑，它能破裂蛋白質(zhì)分子中氫鍵和疏水作用。巰基乙醇打開二硫鍵，因此使蛋白質(zhì)分子處于伸展?fàn)顟B(tài)。此時SDS以其烴鏈與蛋白質(zhì)分子側(cè)鏈結(jié)合成復(fù)合物，大約每兩個氨基酸殘基結(jié)合一種SDS分子。實用文檔第30頁SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳造成：1、由于SDS是陰離子，使多肽表面覆蓋負(fù)電荷遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出蛋白質(zhì)分子原有電荷量，消除了本來電荷差異。2、變化了蛋白質(zhì)單體分子構(gòu)象，不一樣蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物短軸長度都相同，長軸長度隨其分子量大小成正比變化。實用文檔第31頁SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳由于不一樣蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物具有相同荷質(zhì)比，并具有相同構(gòu)象，因而有如下公式：lgM=K1—K2μR

（K1、K2為常數(shù)，μR為相對遷移率）實際測定期，以幾個標(biāo)準(zhǔn)單體蛋白質(zhì)分子量對數(shù)值對其μR作圖，根據(jù)樣品μR值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上就可查出其分子量。實用文檔第32頁實用文檔第33頁SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳實用文檔第34頁實用文檔第35頁等電聚焦（Isoelectricfocusing）(1)以不一樣蛋白質(zhì)等電點差異分離。(2)凝膠中具有蛋白質(zhì)樣品和載體兩性電解質(zhì)。(3)載體兩性電解質(zhì)：

a是一系列物質(zhì)混合物。此混合物各組分等電點要互不相同，但又不能相差太大（小數(shù)點后2位）；最常用為3.0-10.0范圍，尚有3.0-7.0、5.0-10.0。b混合物中各物質(zhì)在等電點時要有足夠大電導(dǎo)，以確保能次序排列；c混合物中各物質(zhì)在等電點時要有足夠大緩沖能力，組成組分為多氨基、多羧基脂肪族化合物；d要求各組分分子量要小，易于與蛋白質(zhì)分離。實用文檔第36頁等電聚焦（Isoelectricfocusing）

通電后，在介質(zhì)中由于H+與OH-相向移動，形成了從3.0-10.0一系列pH梯度。當(dāng)載體兩性電解質(zhì)移動到各自等電點時，就停頓移動，不帶電荷，并維持pH梯度（電導(dǎo)、緩沖能力）。即：pH梯度由H+與OH-建立，而由載體兩性電解質(zhì)來維持。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)移動到對應(yīng)pH值處，結(jié)束。注意事項：1、時間相對長對分離有利；2、也可用來測定蛋白質(zhì)等電點。實用文檔第37頁等電聚焦（Isoelectricfocusing）實用文檔第38頁實用文檔第39頁等電聚焦（Isoelectricfocusing）實用文檔第40頁（2）離子交換層析以離子交換劑為固定相，根據(jù)流動相中組分離子與交換劑上平衡離子進(jìn)行可逆交換時結(jié)協(xié)力大小差異而進(jìn)行分離一種層析辦法。基本原理：

離子交換層析是根據(jù)多種離子或離子化合物與離子交換劑結(jié)協(xié)力不一樣而進(jìn)行分離純化。離子交換層析固定相是離子交換劑，它是由一類不溶于水惰性高分子聚合物基質(zhì)通過一定化學(xué)反應(yīng)共價結(jié)合上某種電荷基團(tuán)形成。實用文檔第41頁離子交換劑能夠分為三部分：高分子聚合物基質(zhì)、電荷基團(tuán)和平衡離子。電荷基團(tuán)與高分子聚合物共價結(jié)合，形成一種帶電可進(jìn)行離子交換基團(tuán)。平衡離子是結(jié)合于電荷基團(tuán)上相反離子，它能與溶液中其他離子基團(tuán)發(fā)生可逆交換反應(yīng)。平衡離子帶正電離子交換劑能與帶正電離子基團(tuán)發(fā)生交換作用，稱為陽離子交換劑；平衡離子帶負(fù)電離子交換劑與帶負(fù)電離子基團(tuán)發(fā)生交換作用，稱為陰離子交換劑。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)處于不一樣pH條件下，其帶電情況也不一樣。實用文檔第42頁離子交換層析實用文檔第43頁實用文檔第44頁實用文檔第45頁離子交換層析吸附本質(zhì)：非共價連接常用吸附劑：結(jié)晶磷酸鈣、硅膠脫附方式：1、變化蛋白質(zhì)帶電狀態(tài)；2、變化環(huán)境溶液pH、離子強(qiáng)度等。實用文檔第46頁4、根據(jù)配體特異性不一樣親和層析(AffinityChromatography)是利用生物分子間專一親和力而進(jìn)行分離一種層析技術(shù)。親和層析是分離純化蛋白質(zhì)、酶等生物大分子最為特異而有效層析技術(shù)，分離過程簡單、迅速，具有很高辨別率，在生物分離中有廣泛應(yīng)用。實用文檔第47頁親和層析基本原理：

生物分子間存在很多特異性互相作用，如我們熟悉抗原－抗體、酶－底物或抑制劑、激素－受體等等，它們之間都能夠?qū)Ｒ欢赡娼Y(jié)合，這種結(jié)協(xié)力就稱為親和力。親和層析分離原理簡單說就是通過將具有親和力兩個分子中一種固定在不溶性基質(zhì)上，利用分子間親和力特異性和可逆性，對另一種分子進(jìn)行分離純化。實用文檔第48頁被固定在基質(zhì)上分子稱為配體，配體和基質(zhì)是共價結(jié)合，組成親和層析固定相，稱為親和吸附劑。親和層析時首先選擇與待分離生物大分子有親和力物質(zhì)作為配體，例如分離酶能夠選擇其底物類似物或競爭性抑制劑為配體，分離抗體能夠選擇抗原作為配體等等。并將配體共價結(jié)合在合適不溶性基質(zhì)上，如常用Sepharose－4B等。將制備親和吸附劑裝柱平衡，當(dāng)樣品溶液通過親和層析柱時候，待分離生物分子就與配體發(fā)生特異性結(jié)合，從而留在固定相上；而其他雜質(zhì)不能與配體結(jié)合，仍在流動相中，并隨洗脫液流出，這樣層析柱中就只有待分離生物分子。通過合適洗脫液將其從配體上洗脫下來，就得到了純化待分離物質(zhì)。實用文檔第49頁實用文檔第50頁實用文檔第51頁小結(jié)粗分級一般采取鹽析、等電點沉淀、有機(jī)溶劑分級等辦法；細(xì)分級一般采取層析法，包括凝膠層析、離子交換層析、吸附層析、親和層析等辦法。必要時，還可采取電泳法，包括等電聚焦等作為蛋白質(zhì)提純步驟。實用文檔第52頁蛋白質(zhì)分子中氨基酸序列確定蛋白質(zhì)測序，主要指是蛋白質(zhì)一級構(gòu)造測定，包括組成蛋白質(zhì)多肽鏈數(shù)目，多肽鏈氨基酸種類、數(shù)目及排列次序。測序要求

●1樣品必須純（>97%以上）；●2懂得蛋白質(zhì)分子量；●3懂得蛋白質(zhì)由幾條肽鏈組成；●4測定蛋白質(zhì)氨基酸組成，并根據(jù)分子量計算每種氨基酸個數(shù)；●5測定水解液中氨量，計算酰胺含量。實用文檔第53頁蛋白質(zhì)分子量測定最小分子量測定法如Mb含F(xiàn)e為0.335%，則M=55.8/0.335%=16700。這就是最小分子量。其實，真實分子量是最小分子量n倍，n指Fe數(shù)目，Mbn=1，因此M=16700；而Hb用其他辦法測得分子量為68000，則說Hb含4個Fe原子。實用文檔第54頁蛋白質(zhì)分子量測定滲入壓法M=CRT/π實用文檔第55頁蛋白質(zhì)分子量測定超離心法沉降平衡法：樣品溶液在分析池中經(jīng)低速長時間離心，分析池內(nèi)樣品濃度分布達(dá)成熱力學(xué)平衡時，根據(jù)分析池內(nèi)樣品濃度分布能夠求算分子量。實用文檔第56頁蛋白質(zhì)分子量測定凝膠過濾法經(jīng)驗公式：lgM=K1-K2Ve（K1、K2為常數(shù)）用幾個已知蛋白質(zhì)，測其Ve，再對lgM作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線。再測定未知蛋白質(zhì)Ve，可得M。實用文檔第57頁蛋白質(zhì)分子量測定SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳lgM=K1—K2μR

（K1、K2為常數(shù)，μR為相對遷移率）實用文檔第58頁氨基酸平均分子量為128，測得某蛋白質(zhì)分子量約為5646.由此推斷該蛋白質(zhì)具有肽鏈條數(shù)和氨基酸個數(shù)依次是？氨基酸脫水縮合形成肽鏈，再形成蛋白質(zhì)。每兩個氨基酸脫掉一種水分子（就像5個手指頭，有4個手指縫同樣），倘若一種肽鏈，則有X個氨基酸，就會脫掉（X-1）個水；若兩個肽鏈，則有X個氨基酸，就會脫掉（X-2）個水。。。依此類推假設(shè)：氨基酸個數(shù)為X個，肽鏈有y條，則，脫掉水分子個數(shù)為（X-y）個列式：128x-18（x-y）=5646110x+18y=5646110x=5646-18y由于肽鏈個數(shù)都有限，因此，y數(shù)字從1開始試著帶進(jìn)去，看什么時候，x能得到整數(shù)解（由于無論氨基酸還是水都不也許是小數(shù)個）例如：當(dāng)y=1時，x=51.16,現(xiàn)實中不也許，因此，成果排出再試著帶入y=2時，x=51，整數(shù)解，符合實際情況，因此，答案應(yīng)為2和51實用文檔第59頁測定步驟1多肽鏈拆分。由多條多肽鏈組成蛋白質(zhì)分子，必須先進(jìn)行拆分。幾條多肽鏈借助非共價鍵連接在一起，稱為寡聚蛋白質(zhì)，如，血紅蛋白為四聚體，烯醇化酶為二聚體；可用8mol/L尿素或6mol/L鹽酸胍處理，即可分開多肽鏈(亞基)。2測定蛋白質(zhì)分子中多肽鏈數(shù)目。通過測定末端氨基酸殘基摩爾數(shù)與蛋白質(zhì)分子量之間關(guān)系，即可確定多肽鏈數(shù)目。3二硫鍵斷裂。幾條多肽鏈通過二硫鍵交聯(lián)在一起，可在8mol/L尿素或6mol/L鹽酸胍存在下，用過量巰基乙醇處理，使二硫鍵還原為巰基，然后用烷基化試劑保護(hù)生成巰基，以避免它重新被氧化。實用文檔第60頁4測定每條多肽鏈氨基酸組成，并計算出氨基酸成份分子比或多種殘基數(shù)目用6mol/L鹽酸或4mol/L硫酸在105-110℃條件下進(jìn)行水解，反應(yīng)時間約20小時，色氨酸被沸酸完全破壞；具有羥基氨基酸如絲氨酸或蘇氨酸有一小部分被分解；天冬酰胺和谷氨酰胺側(cè)鏈酰胺基被水解成了羧基。用5mol/L氫氧化鈉煮沸10-20小時，色氨酸在水解中不受破壞，其他氨基酸都受到不一樣程度破壞。5分析多肽鏈N-末端和C-末端

N末端分析法（Sanger法；Edman法；DNS-Cl；氨肽酶法），C末端分析法（肼解法；羧肽酶法；硼氫化鋰法）。在肽鏈氨基酸次序分析中，最主要是N-端氨基酸分析法。氨肽酶：能催化多肽鏈游離N端（氨基末端），由外向里，把肽鏈氨基酸逐一切下。較常用氨肽酶是亮氨酸氨肽酶。特殊氨肽酶有僅作用于N末端為脯氨酸脯氨酸亞氨肽酶以及只作用于三肽氨基三肽酶等。實用文檔第61頁Sanger法N末端分析實用文檔第62頁Edman降解法實用文檔第63頁DNS-Cl法實用文檔第64頁C末端分析肼解法：測定C-末端最常用辦法。將多肽溶于無水肼中，100℃下進(jìn)行反應(yīng)，成果羧基末端氨基酸以游離氨基酸狀釋放，而其他肽鏈部分與肼生成氨基酸肼。假如羧基末端氨基酸側(cè)鏈?zhǔn)菐в絮０啡缣於０泛凸劝滨０?，則肼解時不能產(chǎn)生游離羧基末端氨基酸羧肽酶水解法：羧肽酶能夠?qū)Ｒ恍缘厮怍然┒税被?。羧肽酶A能夠切割C端除了Lys、Arg、Pro氨基酸，羧肽酶B能夠切割C端Lys或Arg，但假如倒數(shù)第二個氨基酸為Pro兩種羧肽酶均不能作用。實用文檔第65頁6多肽鏈斷裂成多種肽段。采取兩種或多種不一樣斷裂辦法將多肽樣品斷裂成兩套或多套肽段或肽碎片，并將其分離開來。主要有化學(xué)法和酶解法兩類。1)化學(xué)法

(1)溴化氰法是最抱負(fù)化學(xué)辦法，能選擇性斷裂甲硫氨酸所在肽鍵。實用文檔第66頁（2）羥胺法羥胺在pH9下能專一性地裂解Asn-Gly肽鍵，弱酸性條件下裂解Asn-Leu，Asn-Ala肽鍵。實用文檔第67頁2）酶解法用蛋白水解酶進(jìn)行水解，具有較高專一性，并且水解產(chǎn)率較高，因此能夠選擇多種不一樣專一性酶進(jìn)行專一性斷裂。實用文檔第68頁7測定每個肽段氨基酸次序

Edman降解法：目前用于次序分析最主要辦法。實用文檔第69頁8確定肽段在多肽鏈中次序。

利用兩套或多套肽段氨基酸次序彼此間交錯重合，拼湊出整條多肽鏈氨基酸次序。糜蛋白酶水解：Ala·Phe+Gly·Lys·Asn·Tyr+Arg·Trp+His·Val胰蛋白酶水解：Ala·Phe·Gly·Lys+Asa·Tyr·Arg+Trp·His·Val實用文檔第70頁9確定原多肽鏈中二硫鍵位置

一般采取胃蛋白酶處理沒有斷開二硫鍵多肽鏈，再進(jìn)行對角線電泳實用文檔第71頁實用文檔第72頁某一多肽（1）經(jīng)完全水解后得Gly，Ala，Val2，Leu2，Ile，Cys4，Asp2，Glu4，Ser2，Tyr2；（2）FDNB處理后用酸水解得到DNP-Gly；（3）C-未端分析得到Asp．（4）部分水解得到下列小肽：a．Cys，Cys，Ala，Ser；b．Glu，Asp，Tyr；c．Glu，Glu，Cys；d．Glu，Leu，Glu；e.Cys，Asp；f．Tyr，Cys；g.Ala，Ser，Val，Cys；h．Glu，Cys，Cys；i.Val，Cys，Ser，Leu，Tyr；j．Leu，Tyr，Glu；k．Gly，Ile，Val，Glu，Glu；請寫出這條多肽氨基酸排列次序。

實用文檔第73頁Gly-Ile-Val-Glu-Glu-Cys-Cys-Ala-Ser-Val-Cys-Ser-Leu-Tyr-Glu-Leu-Glu-Asp-Tyr-Cys-Asp思緒：k-c-h-a-g-i-j連續(xù)下來，都是兩個重合。一般排序時，有兩個重合就比較確定了。背面d-b-f-e都只重合一種殘基，不太好確定，好在剩下氨基酸已經(jīng)不多，又懂得e在最后，算一算，試幾次就行了。實用文檔第74頁蛋白質(zhì)純度判定多種細(xì)分級辦法都能夠用于純度判定常用多種電泳法，比較權(quán)威有：等速電泳、梯度電泳、等電聚焦電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳。沉降分析和擴(kuò)散分析測定沉降系數(shù)和擴(kuò)散系數(shù)。溶解度恒定法