DNA的粗提取與鑒定（課件）

探究·實踐DNA的粗提取與鑒定DNA的粗提取與鑒定探究·實踐1.可以利用DNA、RNA、蛋白質和脂質在理化性質方面的差異，對它們進行提取。DNA不溶于（冷）酒精，但某些蛋白質溶于酒精。DNA在不同NaCl溶液中的溶解度不同，可溶于2M的NaCl溶液中。2.在一定的溫度下（沸水?。?，DNA遇二苯胺試劑會呈現(xiàn)藍色。實驗原理目的要求1.了解DNA的物理和化學性質，理解DNA粗提取和鑒定的原理。2.學會DNA粗提取的方法以及用二苯胺試劑對DNA進行鑒定。DNA的粗提取與鑒定探究·實踐1.材料：新鮮洋蔥（也可以選擇香蕉、菠菜、菜花和豬肝等作為實驗材料，提取DNA的方法可能稍有不同）、研磨液、體積分數(shù)為95%的酒精、2mol/L的NaCl溶液、二苯胺試劑和蒸餾水等。研磨液和二苯胺試劑的配方如下圖所示。材料用具2.用具：燒杯、量筒、玻璃棒、研缽、紗布、漏斗、試管、試管架、試管夾、酒精燈、石棉網(wǎng)、三腳架、火柴、刀片和天平等。DNA的粗提取與鑒定探究·實踐實驗步驟研磨加酒精析出溶解與鑒定提取上清液洋蔥切碎＋10mL研磨液，充分研磨。研磨不充分，會使DNA分子不能從細胞核中釋放出來，從而影響提取的DNA含量。2.雙層紗布過濾，4℃放置幾分鐘，取上清液。問2：過濾能用濾紙代替嗎？不可以，因為DNA會被吸附到濾紙上而大量損失。問3：上清液中可能含有哪些物質？問1：充分研磨的目的是什么？可能含有DNA、RNA以及蛋白質、脂質、糖類等。3.在上清液中加入體積相等的、預冷的酒精溶液(體積分數(shù)為95%),靜置2～3min,溶液中出現(xiàn)的白色絲狀物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一個方向攪拌,卷起絲狀物,并用濾紙吸去上面的水分;或者將溶液倒入塑料離心管中,在10000r/min的轉速下離心5min,棄上清液,將管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干。問4：冷卻的酒精的作用是什么？（1）抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解；（2）低溫有利于增加DNA分子柔韌性，減少斷裂。這一步的目的是蛋白質溶解在酒精中，DNA不溶于酒精而析出。4．2M的NaCl

5mL＋絲狀物或沉淀物。再加二苯胺試劑4mL混勻，沸水浴5min，冷卻后觀察到藍色（不加DNA做對照）。試管編號A（對照組）B（實驗組）步驟12mol/L的NaC1溶液5mL步驟2不進行任何處理步驟3步驟4沸水浴加熱5min實驗現(xiàn)象溶液不變藍色實驗結論加絲狀物或沉淀物加4mL的二苯胺試劑溶液逐漸變藍DNA在沸水浴的情況下遇二苯胺試劑會被染成藍色實驗設計分析1.你提取出白色絲狀物或沉淀物了嗎？用二苯胺試劑鑒定的結果如何？觀察提取的DNA的顏色，如果不是白色絲狀物，說明DNA中的雜質較多。二苯胺試劑鑒定呈現(xiàn)藍色說明實驗基本成功；如果不呈現(xiàn)藍色，可能的原因有所提取的DNA含量低，或者在實驗操作過程中出現(xiàn)了失誤等。2.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些雜質嗎？本實驗粗提取的DNA可能仍然含有核蛋白、多糖等雜質。結果分析與評價3.與其他同學提取的DNA進行比較，看看實驗結果有何不同，分析產生差異的原因。實驗結果不明顯的可能原因：①材料中的核物質沒有充分釋放出來，如研磨不充分或蒸餾水的量不夠。②加入酒精后搖動或攪拌時過猛，DNA被破壞。③二苯胺最好現(xiàn)用現(xiàn)配，否則二苯胺變成淺藍色，影響鑒定效果。結果分析與評價【進一步探究】

本試驗只是對DNA進行了粗提取，請查閱資料，了解實驗室提取純度較高的DNA的一種方法，并與本實驗中所使用的方法進行比較，總結兩種方法的異同。實驗室提取純度較高的DNA的方法有不少。例如，可以先添加質量分數(shù)為25%的SDS溶液，使蛋白質變性后與DNA分開；隨后，加入氯仿—異丙醇混合液（體積比為24:1），通過離心將蛋白質及其它雜質除去，取清液；可重復上述操作幾次，直至上清液變成透明的粘稠液體