固相萃取-高效液相色譜法同時測定禽肉中磺胺類藥物殘留量

固相萃取-高效液相色譜法同時測定禽肉中磺胺類藥物殘留量

氨基丙烯酸藥物是一種合成抗菌藥物，以氨基丙烯酸為基本化學(xué)結(jié)構(gòu)。具有廣闊的抗菌性、穩(wěn)定性、價格低廉、使用簡單、能耗低等優(yōu)點(diǎn)。換句話說，它在動物和水的營養(yǎng)中得到廣泛的應(yīng)用，對控制和治療動物疾病起到了重要作用。但由于磺胺類藥物存在嚴(yán)重副作用,人體食用磺胺類超標(biāo)的食品后,藥物進(jìn)入人體產(chǎn)生富集,人體中長期存在磺胺類藥物會導(dǎo)致許多細(xì)菌對磺胺類藥物產(chǎn)生耐藥性,會導(dǎo)致尿路障礙、腎臟功能損害,引起過敏反應(yīng),有皮疹,藥熱等,還可以造成對血液系統(tǒng)的傷害等諸多不良反應(yīng),因此磺胺類藥物成為目前無公害畜產(chǎn)品和水產(chǎn)品藥物殘留的必檢項(xiàng)目。所以建立有效快速的禽肉中磺胺類藥物的檢測方法具有現(xiàn)實(shí)意義。本方法采用固相萃取-高效液相色譜法建立快速,靈敏的檢測禽肉中磺胺類藥物含量的測定方法,該方法經(jīng)過反復(fù)實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明:磺胺分離效果好,檢測時間短,重現(xiàn)性好,精密度高,試驗(yàn)所得回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差都比較理想。1實(shí)驗(yàn)部分1.1磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)品甲醇和乙睛為色譜純。水為超純水。正已烷、正丙醇均為分析純,重蒸餾使用。磷酸、無水硫酸鈉等均為分析純。堿性氧化鋁SPE柱。微孔濾膜0.45μm?；前奉愃幬飿?biāo)準(zhǔn)品:磺胺嘧啶(SD)、磺胺間甲氧嘧啶(SMM)、磺胺地索幸(SDM)、磺胺二甲嘧啶(SM2)、磺胺甲氧嗪(SMP)、磺胺甲惡唑(SMZ)、磺胺喹惡啉(SQ)均購于中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。7種磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確稱取適量的標(biāo)準(zhǔn)品,分別用少量甲醇溶解,在用流動相配成需要的混合標(biāo)準(zhǔn)曲線。1.2設(shè)備和設(shè)備美國WATERS-1525型高效液相色譜儀,配有WATERS-2487紫外檢測器。超聲提取儀。振蕩器。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀等。1.3u3000沉淀物的提取稱取5.000g絞碎的試料,置于50mL的聚丙烯離心管中,加無水硫酸鈉7g和乙睛25ML,用超聲振蕩提取并振蕩30min。用3000r/min離心5min。上清液移至分液漏斗中,加入25mL正乙烷,振搖2min后,靜止5min,分離乙睛層。在用25mL乙睛將沉淀物重復(fù)提取1次,乙睛層經(jīng)同一份正乙烷分配,合并乙睛層于100mL雞心瓶中,加入正丙醇5mL,50℃減壓濃縮至近干。用5mL乙腈+水(95+5)溶解殘留物過堿性氧化鋁SPE柱,不收集、用乙腈+水(95+5)5mL洗滌雞心瓶,并過SPE柱,吹去柱內(nèi)滯留的液體。用5mL乙腈+水(75+25)洗脫待測物至10mL容量瓶中,用0.017moL/L磷酸定容至10mL,用0.45μm微孔濾膜過濾,收集濾液作為試液,上機(jī)測定。1.4磷酸+乙腈梯度洗脫色譜柱:菲羅門C18反相柱,250mm×4.6mm,粒徑5μm。流動相:0.017mol/L磷酸+乙腈梯度洗脫。流速:1mL/min檢測波長:270nm進(jìn)樣量:20μL2結(jié)果與討論2.1色譜圖在上述的色譜條件下,得到標(biāo)準(zhǔn)溶液,從圖1中可知,在所采用的色譜條件下,目標(biāo)組分得到了很好的分離。2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的比較對系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行HPLC測定,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線,從表1可以看出7種藥物在0.05～1.0μg/ml之間均有良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)R均較為理想。2.3回收率及精密度在不含磺胺類藥物的樣品中進(jìn)行添加標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行回收率和精密度實(shí)驗(yàn),樣品分別添加0.050、0.100、0.200、0.250、0.500μg/ml5個濃度水平的磺胺藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液,搖勻后,按照樣品前處理法進(jìn)行提取和凈化,高效液相色譜測定。從表2看出其中5個添加水平回收率為81.6%～95.1%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為。回收率值相對較高,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差較低,方法的重現(xiàn)性較好。3磺胺類藥物的回收率對不同禽肉的樣品,在不同的濃度條件下進(jìn)行了不同水平的添加,分別進(jìn)行了7種磺胺類藥物的添加回收率實(shí)驗(yàn),