門靜脈高壓癥時細菌移位與內毒素血癥和一氧化氮的關系

門靜脈高壓癥時細菌移位與內毒素血癥和一氧化氮的關系

通過研究大鼠肝前門靜脈高壓的動物模型，在門靜脈高壓下研究了細菌位移、內毒素血癥和一氧化氮（no）之間的關系。材料和方法一、實驗材料1.實驗動物采用本院動物中心提供的SD大鼠,體重250~300g。2.主要試劑和機器硝酸鑭、巧克力麥康凱瓊脂、左旋精氨酸、單-甲基精氨酸(Sigma,USA)。壓力轉換器和透射電子顯微鏡。二、模型4:將左外投射克氏原螯蝦a/d采用門靜脈部分縮窄(PVS)的方法建立門靜脈高壓的動物模型。將大鼠隨機分為4組,每組10只。A組:行假手術,為對照組。除不結扎門靜脈外,其他操作與模型組相同。皮下注射生理鹽水1ml,1次/d,連續(xù)14d;B組:行PVS,皮下注射與A組相同;C組:行PVS,皮下注射1ml左旋精氨酸300mg/kg,1次/d,連續(xù)14d;D組:行PVS,皮下注射1ml單-甲基精氨酸50mg/kg,1次/d,連續(xù)14d。三、腸之分段與培養(yǎng)術后第14天,在氨基甲酸乙酯(6mg/kg)的麻醉下,無菌操作取腸系膜淋巴結和脾,稱重,放入無菌的勻漿器中。測定門靜脈壓力后從下腔靜脈采血,最后取末段回腸約1cm,放入漂洗液中。四、觀察指標和方法1.通過觀察腹部和身體的變化觀察胃腸道瘀血程度,門體側支循環(huán)形成的情況。2.門靜脈壓測量連接塑料管的4號半靜脈針,充以滅菌肝素鹽水。穿刺門靜脈,從多導記錄儀上讀取數(shù)據(jù),以cm?H2O表示。3.培養(yǎng)菌株的制備在放入淋巴結和等重量脾的勻漿器中加入0.5ml無菌的液體培養(yǎng)基,勻漿,取上清放入巧克力麥康凱培養(yǎng)基中,于37℃培養(yǎng)48h。另取1ml血放入血培養(yǎng)瓶中,37℃培養(yǎng)48h,而后行菌落計數(shù)和菌種鑒別。4.血液中毒素的測定采用偶氮顯色鱟試驗方法測定內毒素水平。5.血液中的no2-試驗采用微量比色法。6.透射電鏡觀察將末段回腸標本在含0.1mmol/L二甲砷酸鈉和2%戊二醛中切成1mm3的小塊,放入含鑭的固定液中浸泡、固定、脫水、包埋,超薄切片不染色,透射電鏡下觀察。7.統(tǒng)計評估用方差分析或χ2檢驗及多因素相關分析判定變量之間的關系。結果一、腹部和腹部變化的肉眼觀察PVS各組(B、C和D組)有胃腸道瘀血,腸系膜靜脈擴張,側支循環(huán)形成,脾增大,A組則正常。二、門靜脈壓力術后第14天,PVS各組門靜脈壓力均較A組高,A組為(3.68±0.21)cm?H2O、B組為(5.92±0.18)cm?H2O、C組為(7.05±0.32)cm?H2O、D組為(4.22±0.29)cm?H2O,P值均<0.01,D組較B組的門靜脈壓力低(P<0.05)。三、革蘭陰性細菌、分離和感染對pvs檢出率的影響PVS各組腸系膜淋巴結的細菌檢出率均高于A組(A組:20%;B組:76%;C組:69%;D組:71%,P值均<0.01),PVS各組間檢出率差異無顯著意義(P值均>0.05)。脾和血液培養(yǎng)均為陰性。對檢出的細菌進行菌種鑒定,均為革蘭陰性細菌。菌種和所占比例為:A組:大腸桿菌占70%、變形桿菌占30%;PVS各組:大腸桿菌占33%、腸球菌占15%、變形桿菌占12%、克雷氏菌占20%、假單胞菌占10%。四、組eu/ml,p值比較PVS各組的血內毒素值均比A組高,A組:(0.28±0.08)EU/ml;B組:(0.54±0.08)EU/ml;C組:(0.55±0.06)EU/ml;D組:(0.48±0.07)EU/ml,P值均<0.01。PVS各組之間差異無顯著意義(P值均>0.05)。五、c組與b組PVS各組血NO2-值均顯著高于A組,A組:(5.12±0.29)μmol/L;B組:(9.23±0.19)μmol/L;C組:(10.33±0.27)μmol/L;D組:(7.51±0.18)μmol/L,P值均<0.01,C組與B組之間差異無顯著意義(P>0.05)。D組較B組低(P<0.01)。六、血no2-水平細菌移位率、血內毒素和門靜脈壓力與血NO2-水平呈顯著正相關(r值分別為0.6033、0.6526和0.7251,P值均<0.05)。七、間質細胞的分布PVS各組腸粘膜上皮細胞的微絨毛變得短而稀疏,可見電子致密度高的鑭顆粒沉積在腸粘膜上皮細胞及下面固有層的間質細胞間,呈線條狀分布,線條的粗細不盡相等,呈彎曲或纏繞成不規(guī)則圈網(wǎng)狀;在間質細胞的各種連結處也可見鑭顆粒沉淀;也可見鑭顆粒沿著腸粘膜上皮細胞間分布,見圖1~6。A組則未發(fā)現(xiàn)上述變化。門靜脈高壓可引起細菌位移和內毒素血近年來,腸道細菌移位引起的腸源性感染作為重要的病理現(xiàn)象得到了廣泛的關注。Berg等將細菌移位定義為細菌通過腸粘膜上皮進入固有層然后到腸系膜淋巴結和其他器官。Alexander等進一步提出腸道微生物和細菌產(chǎn)物,如內毒素,都可通過腸粘膜屏障。本研究中腸系膜淋巴結的細菌移位率明顯升高,血中內毒素水平也顯著增加,而脾和血中未檢出細菌,說明在門靜脈高壓狀態(tài)下的腸道改變可引起細菌移位和內毒素血癥。對照組也有一定程度的細菌移位,可能與手術應激有關。腸道粘膜是防止細菌移位和內毒素血癥的主要屏障。目前認為各種理化因素和病理原因造成腸粘膜通透性增強和結構破壞可能是導致發(fā)生移位的基本原因。本研究發(fā)現(xiàn)門靜脈高壓可引起腸粘膜屏障的通透性增高。作為示蹤劑的鑭直徑為4nm,在正常情況下不能進入細胞;當細胞膜通透性改變后,即細胞孔徑增大后才能進入細胞。文獻報道,腸上皮細胞通過刷狀緣的微絨毛吸收或吞噬物質后,通過其底部或與其他細胞的連結處排出,進入固有層細胞,進一步進入微靜脈或小淋巴管。本研究中鑭侵入門靜脈高壓組的固有層,說明屏障通透性已增高。粘膜上皮細胞的微絨毛呈明顯受損的改變,這種改變可能是通透性增強所導致的,使粘膜細胞對外源性抗原的阻礙力下降,使細菌和內毒素易于穿過腸粘膜屏障。本研究結果顯