RocheLightCycler中文操作說明

LightCycler?480中文操作闡明羅氏醫(yī)學儀器企業(yè)/應用科學部門February目錄一.啟動機器與軟件3二.軟件設定---啟動新試驗5三.樣品編輯9四.成果分析12五.匯報18六.數據轉移至其他計算機(數據輸出與輸入)19七.使用者管理19

一．啟動機器與軟件啟動機器機器主開關位于機器右后方。機器正面兩個警示燈代表機器狀態(tài)。待警示燈(右)由閃爍橘色燈轉變成穩(wěn)定橘色燈，警示燈(左)由橘色轉變成綠色(約三分半鐘)，表達機器已經啟動完畢。左警示燈右警示燈機器狀態(tài)橘*閃爍*橘*閃爍*正在初始化綠橘機器啟動完畢96/384孔盤尚未放入綠橘*閃爍*96/384孔盤正在放入中綠綠機器啟動完畢96/384孔盤已經放入綠*閃爍*綠*閃爍*試驗進行中按壓機器正面上唯一的按鈕，放入已經封膜完畢之96或384孔盤。放置完畢后，左右兩警示燈都展現綠色。啟動軟件啟動計算機，并以對的的使用者名稱與密碼登入Windows。Username:OPERATORPassword:LC480啟動LightCycler480軟件，并輸入對的的使用者與密碼。

二．軟件設定--啟動新試驗設定新試驗軟件啟動后，會進入主畫面。點選“NewExperiment”。出現試驗設定窗口。任何時候需要回主畫面的話，點選畫面右邊的按鈕。設定試驗若要套用設定好的試驗環(huán)節(jié)(Template)，請?zhí)?.。在試驗設定畫面上方，先選擇合適的DetectionFormat。選項包括:此外可再點選“Customize”勾選所需的濾片組合。輸入反應體積:96wellplate范圍為10-100ul，而384wellplate范圍為5-20ul。設定試驗環(huán)節(jié)(Program)設定program，包具有Pre-incubation,Amplification(PCR),Meltingcurve(optional)與Cooling。運用『+』與『－』增長或刪除環(huán)節(jié)。設定循環(huán)數目(Cycle)與分析模式。一般Amplification(PCR)program設定成『Quantification』，而MeltingCurveprogram設定成『MeltingCurve』。設定詳細溫度變化(根據不一樣試驗措施與設計而有所不一樣)點選各個program即可設定詳細溫度變化環(huán)節(jié)，請根據產品闡明書來設定，運用『+』與『－』增長或刪除環(huán)節(jié)。需要設定的參數包括Target(℃)目的溫度，AcquisitionMode(熒光偵測模式)，Hold(hh:mm:ss)停留時間。RampRate(℃/s)為升降溫速度，范圍如下：RampRate(℃/s)HeatingupCoolingdown96-wellBlock1.0–4.4℃/s1.0–2.2℃/s384-wellBlock1.0–4.8℃/s1.0–2.5℃/s若設定溫度低于50℃，請把RampRate調整成1.5℃/s(96well)或2.0℃/s(384well)。將試驗環(huán)節(jié)儲存成『Template』以便下次進行套用。點選左下角“SaveAsTemplate”即可把此環(huán)節(jié)儲存起來。若要進行套用時，請直接點選窗口左下角“ApplyTemplate”，選擇欲套用之試驗環(huán)節(jié)即可。設定完畢后點選“StartRun”開始進行試驗。跳出檔案儲存窗口，請輸入欲儲存之文獻名稱。試驗進行中會進入另一種Data窗口，窗口下方按鍵功能如下：EndProgram:結束此Program,進入下一種Program。+10Cycles:實時增長循環(huán)數目。AbortRun:立即結束此試驗，請注意，若按此鍵，則本次試驗的成果將不儲存。

三．樣品編輯將樣品分群點選窗口左邊的“SubsetEditor”。點選“New”新增新的群組，并將其命名。運用鼠標選用此群組之樣品位置，點選窗口右下角“Apply”，此時被選用的樣品位置會展現實心的藍色，如下圖。以此方式依序將所有樣品群組編輯完畢。樣品必須分群才可以獨立分析，不過樣品與否分群并不影響樣品的Cp值。

編輯樣品名稱點選窗口左邊的“SampleEditor”。輸入每個位置之樣品名稱(Name)與反復(Repl.Of)。若要更迅速輸入，可直接在左邊的圖上點選欲編輯之樣品：若A1,A2與A3為三反復，在A2與A3Repl.Of字段上都填上A1即為三反復。在編輯過程中，可運用『Ctrl』+『C』復制文字，『Ctrl』+『V』貼上文字。根據試驗分析模式，編輯AbsQuant(絕對定量)，RelQuant(相對定量)，或Genotyping分頁，設定SampleType。絕對定量(AbsQuant)：『Unknown』:未知濃度樣品『Standard』:已知濃度原則品

相對定量(RelQuant)：『Target』:目的基因『Reference』:參照基因『Calibrator』:Control樣品『Standard』:已知濃度的樣品『Unknown』:未知濃度樣品其他分析模式之分頁在此不贅述，請自行參照LightCycler480InstrumentOperator’sManual。若設定成『Standard』之樣品請輸入濃度。若想要將此樣品編輯儲存成Template，可點選窗口左下角“SaveAsTemplate”即可，下次試驗時可點選“ApplyTemplate”進行套用。

四．成果分析點選左邊的“Analysis”，選用分析模式，并選擇所需分析之群組，如下圖：3.2.1.3.2.1.分析模式闡明AbsQuant/2ndDerivativeMax絕對定量(自動法)AbsQuant/FitPoints絕對定量(手動法)ColorCompensation色差校正(多色試驗校正用)GeneScanning基因掃描(合用于HighResolutionMeltingCurve,HRM分析)Genotyping基因分型(合用于HybProbe之基因分型試驗)RelativeQuantification相對定量TmCallingTm分析絕對定量(AbsoluteQuantification)點選下方的“Calculate”即可得到樣品之Cp與原則曲線。各個樣品之Cp各個樣品之Cp值與濃度重複樣品平均後之重複樣品平均後之Cp值與濃度,並自動計算標準差數值之數據輸出:在數值分析表上按鼠標右鍵，點選“Export”即可輸出成.txt檔案格式?？芍苯右訫icrosoftExcel軟件啟動。圖形輸出:在圖形上按鼠標右鍵，點選“Export”即可輸出成多種圖形檔案格式。原則曲線儲存:點選窗口下方StdCurve之“Saveasexternal”，輸入適合檔名后即可儲存在數據庫中。相對定量(RelativeQuantification)在選擇相對定量分析后，出現下面窗口：ReferenceSampleLocation:若Reference(Housekeepinggene)之樣品在同一盤上請選擇“In-Run”，否則請選擇“External”可輸入另一次試驗的數據一起分析。提議將AutoPair打勾讓計算機自動將樣品配對。進入『Target』與『Reference』分頁，右下角顯示“Eff=2”表達將目的基因與參照基因的PCR效率以2.0來計算。若需要校正目的基因與參照基因之PCR效率，則需要輸入原則曲線。在『Target』與『Reference』分頁之右下角，輸入(import)原則曲線。Useinrun：輸入(import)同一盤上之原則曲線。Useexternal：輸入(import)之前已儲存于數據庫中之原則曲線。點選『Pairing』分頁，檢查計算機自動配對成果與否對的。其中，紅色表達Unknown樣品，綠色表達Calibrator樣品。若欲外加配對，則可直接以鼠標點選樣品后按“Add”即可增長配對。點選『Results』分頁，點選“Calculate”即可得到計算成果。數值和圖形輸出與絕對定量相似。(請參照絕對定量)基因分型(Genotyping)進入基因分型的窗口中。窗口右下角可設定分類方式AutoGroup：自動分組In-run：原則品包括在本次試驗中External：原則品在之前已儲存之試驗中點選“Calculate”即可得到分型成果。

Tm分析(TmCalling)進入Tm分析窗口確認波峰數目選擇檢測模式點選“Calculate＂即可得到每個樣品之Tm值。

五．匯報(Report)將分析后成果儲存后即可點選匯報鍵。數據儲存匯報勾選想要展現的匯報內容。點選“Generate”即可產生匯報。點選“PDF”即可將此匯報儲存成.pdf檔案格式。

六．數據轉移至其他計算機(數據輸出與輸入)數據輸出點選(navigator