結核菌檢測中PCR結核分枝桿菌DNA檢驗結果與常規(guī)痰涂片檢驗結果對比

結核菌檢測中PCR結核分枝桿菌DNA檢驗結果與常規(guī)痰涂片檢驗結果對比【摘要】目的：研究對比結核菌檢測中PCR結核分枝桿菌DNA檢驗結果與常規(guī)痰涂片檢驗結果對比。方法：納入1246例，2021年1月-2021年12月期間，于我院進行結核菌檢測的患者，采集患者的痰液樣本，分別采用PCR結核分枝桿菌DNA檢驗與常規(guī)痰涂片法進行結核菌檢驗，對比檢驗結果，分析PCR結核分枝桿菌DNA檢驗與常規(guī)痰涂片用于結核病早期診斷靈敏度、特異度以及準確度。結果：PCR結核分枝桿菌DNA的陽性檢出率15.08%與常規(guī)痰涂片的9.68%相比明顯更高，P＜0.05（x2=19.168）；PCR用于早期結核診斷的靈敏度98.62%、特異度99.08%以及準確度99.01%與常規(guī)痰涂片的63.30%、93.12%以及88.56%相比均明顯更高，P＜0.05（x2=88.229，x2=57.381，x2=133.728）。結論：對于結核患者而言，進行結核菌檢驗時，采用PCR結核分枝桿菌DNA檢驗靈敏度、特異度以及準確度與常規(guī)痰涂片檢驗相比均更高，可以更加簡便、快速的檢出患者的結核菌感染情況，在結核病的早期診斷中效能更優(yōu)，可以為患者的臨床治療提供可靠依據，臨床應用價值更高?！娟P鍵詞】結核菌檢測;PCR;結核分枝桿菌DNA;常規(guī)痰涂片;微生物檢驗[Abstract]Objective:TocomparetheresultsofPCRMbacteriumtuberculosisandconventionalsputumsmeartest.Methods:Atotalof1246patientstestedfortuberculosisinourhospitalbetweenJanuary2021andDecember2021wereincluded,Thesputumsamplesfrompatientswerecollected,testedbyPCRM.tuberculosisDNAtestandroutinesputumsmearmethod,Comparethetestresults,andanalyzethePCRMycobacteriumtuberculosisDNAtestandconventionalsputumsmearforthesensitivity,specificityofearlyTBdiagnosisandaccuracy.Results:ThepositivedetectionrateofM.tuberculosisinPCRof15.08%wassignificantlyhigherthan9.68%ofconventionalsputumsmear,P＜0.05（x2=19.168）.;ThePCRforearlyTBdiagnosiswas98.62%,99.08%andaccuracyof99.01%comparedwith63.30%,93.12%and88.56%ofconventionalsputumsmear,P＜0.05（x2=88.229，x2=57.381，Conclusion:Fortuberculosispatients,tuberculosistest,usingPCRmycobacteriumtuberculosisDNAtestsensitivity,specificityandaccuracyarehighercomparedwithconventionalsputumsmeartest,canbemoresimpleandrapiddetectionoftuberculosisinfection,betterefficacyintheearlydiagnosisoftuberculosis,canprovidereliablebasisforclinicaltreatment,clinicalapplicationvalueishigher.結核是臨床上較常見的一種傳染性疾病，對于患者的機體健康與生命安全均有著巨大的危害。目前，臨床針對結核病患者的治療，除了常規(guī)的規(guī)范化藥物用藥之外，還需要對其進行消毒隔離處理，以避免結核病菌的進一步傳播，提升疾病康復率[1]。研究顯示，結核分枝桿菌（TB）是肺結核發(fā)病的主要致病菌，因此，臨床診斷結核疾病時，多將標本當中的結核分歧桿菌檢出情況作為重要參考指標，而檢測可疑性結核標本的方法較多，包括常規(guī)涂片、抗酸染色以及結核桿菌基因檢測(PCR）等，這類方法均具有操作簡單，方便快捷等優(yōu)點，而且費用較低，臨床普及度較廣。而近年來，部分研究發(fā)現，PCR結核分枝桿菌DNA檢驗在結核病診斷效能更佳，可有效提升結核菌檢出準確度，但由于相關研究較少，PCR是否能成為結核菌檢測的首選方式仍需進一步探討[2]。基于此，本文納入1246例，2021年1月-2021年12月期間，我院收入疑似為肺結核的患者，對比研究了結核菌檢測中PCR結核分枝桿菌DNA檢驗結果與常規(guī)痰涂片檢驗結果，現報告如下：1.對象與方法1.1研究對象納入1246例，2021年1月-2021年12月期間，于我院進行結核菌檢測的患者，男：819例，女607例；年齡：36-85歲，年齡均值（54.18±3.27）歲；本次研究于我院倫理委員會授權后開展，研究內容已詳細告知患者及（家屬），且均表示自愿參與研究。納入標準：①所有患者均于入院將詳細基本資料納入研究，并開展體征檢測；②對研究涉及的相關檢測操作有良好的耐受度；③病例資料完整，且已錄入數據庫，可隨時調取。排除標準：①主觀原因導致患者不能參與后續(xù)實驗者；②處疾病恢復期或3個月參與過其他實驗者；③患有精神疾病或認知方面有障礙者。1.2方法痰液樣本采集：于清晨，采集患者第一口痰，即晨起之后，讓患者馬上以清水進行漱口，再將第二、第三口痰液分別吐出，采用who推薦的螺旋蓋彈屏收集痰液本樣后，以塑料袋進行密封保存，容器的表面必須對患者的性別、編號等進行明確標注。常規(guī)痰涂片檢驗：將患者咳出的膿性痰收集在干凈的容器中，加蓋密封，及時送檢，檢驗時將痰液均勻涂抹在載玻片表面，烘干之后，采用貝索熱染法染色液進行抗酸染色，之后將玻片放入到顯微鏡下對結核菌進行觀察計數，所有檢驗均需嚴格依據《結核病診斷實驗室檢驗規(guī)程》及試劑說明書要求執(zhí)行。判定標準：若300個視野風，無未發(fā)現抗酸桿菌，即判定為陰性；100個視野內觀察到3-9條抗酸桿菌數，即判斷為陽性，可確診為結核病。PCR結核分枝桿菌DNA檢驗：于痰液樣本內加入4倍體積濃度為4%的Na0H，充分搖勻，于室溫存放30min使其液化后，取0.5-1.5ml置入離心管內，再加入0.5ml的NaOH，于室溫下靜置10min，以15000/min的轉速進行離心處理，持續(xù)5min，去除上清液，加入1ml的無菌生理鹽水進行沉淀，再行5min離心處理，之后再重復洗滌1次，沉淀之后，加入DNA提取液50ul搖勻，進行10min沸水浴，再以10O00r/min的速度進行離心處理，持續(xù)5min，取2ul上清液，采用環(huán)介導等溫擴增技術（LAMP）進行擴增，擴增條件：＜37℃，反應時間為3min；＜93℃，反應時間為1min；90℃，反應時間為5min；60℃，反應時間為40min；循環(huán)40個，反應終止，取Reporter窗口下記錄儀算出的Ct值作為檢驗結果，CT≤36即為陽性。1.3指標觀察對比不同檢驗方法的結核菌陽性檢出率；以培養(yǎng)、藥敏、影像學以及分子生物學檢查等綜合檢驗結果為參照組，對比不同檢驗方法的檢測靈敏度、特異度以及準確度。1.4統計學處理研究相關數據均由SPSS22.00統計學軟件進行分析處理，各項統計學數據處理由于專業(yè)數據統計人員操作，以t、x2值分別代且檢驗計量、計數數據，P＜0.05，即表示差異有統計學意義。結果2.1對比不同檢驗方法的結核菌檢驗結果檢驗結果顯示，PCR結核分枝桿菌DNA檢驗的結核菌陽性檢出率15.08%與常規(guī)痰涂片檢驗的9.68%相比明顯更高，P＜0.05。見表1：表1對比PCR結核分枝桿菌DNA與常規(guī)痰涂片的結核菌檢驗結果（例/%）檢測方法陰性/例陽性/例陽性檢出率/%常規(guī)痰涂片（n=1426）12881389.68PCR（n=1426）121121515.08x2--19.168P--＜0.052.2對比兩種檢驗方法的結核菌檢測效能檢驗結果顯示，PCR結核分枝桿菌DNA檢驗的結核菌檢測靈敏度98.62%、特異度99.08%以及準確度99.01%與常規(guī)痰涂片檢驗的63.30%、93.12%以及88.56%相比均明顯更高，P＜0.05。見表2：表2對比兩種檢驗方法的結核菌檢測效能（例/%）檢測方法靈敏度/例特異度/例準確度/%常規(guī)痰涂片（n=1426）63.30(138/218)93.12(1125/1208)88.56(1263/1426)PCR（n=1426）98.62(215/218)99.08(1197/1208)99.01(1412/1426)x288.22957.381133.728P＜0.05＜0.05＜0.053.討論結核病是一種典型的慢性傳染性疾病，在臨床中十分常見，發(fā)病的后可對患者的健康產生巨大威脅，臨床研究顯示，結核病的發(fā)生的與流行主要是結核分歧桿菌所致，可累有患者多個重要臟器，尤其以肺臟損傷最為常見，在結核病發(fā)病總率中，僅肺結核占比就高達80%-90%，而及時檢出疾病不僅改善患者臨床預后的關鍵，更是防止疾病流行傳播的關鍵[3]。一直以為，臨床用于結核菌檢測的方法主要以常規(guī)痰涂片檢驗為主，此種檢驗培養(yǎng)方式有著較高的特異性，而且操作非常簡單易行，檢驗費用方面也非常低廉。但是，痰涂片法在實際的檢驗處理中，極容易被外界相關因素所干擾，使得痰液標本受到污染，從而影響檢驗結果的準確性，導致假陽性結果的產生。而為了避免臨床檢驗時的假陽性發(fā)生情況，臨床必須對整個工作室進行全面隔離，且所有物品都必須使用一次性用具，從根本上杜絕污染源，以確保最終檢測結果的準確度；此外，該種檢測方法存在一定的人為性主觀因素，容易影響患者的后續(xù)治療[4]。近幾年，隨著現代醫(yī)療技術水平的不斷提升，PCR結核分枝桿菌DNA檢驗方式逐步在臨床上得到應用，并且取得較好的成效，這種更加先進的檢驗技術，不僅操作非常簡便，而檢測準確度非常高，可以更短的時間內確定患者是否受到結核菌感染及感染情況，給臨床結核疾病的確診與治療帶了重大影響[5]。PCR結核分枝桿菌DNA檢驗作為一種全新型的結核檢驗方式，在近年來的諸多研究報道中均表現出了良好的敏感性與特異性，而且在檢驗操作方面列加簡單、快速，已逐步成為臨床檢測結核菌最重要、最有效的方式之一。相較于常規(guī)的痰涂片檢測法，PCR結核分枝桿菌DNA檢驗在諸多方面都表現出了明顯的優(yōu)勢，且除了結核病診斷，在各類感染性疾病、腫瘤以及遺傳性疾病也具有良好的效能，如PCR的檢驗操作更加簡單，而且具有較好的可重復性等[6]。另外，PCR結核分枝桿菌DNA檢驗全過程只需要5-6小時，大大減少了結核菌的檢出時間，從而更早對患者的感染情況進行明確，并及時采取針對性的處理與治療措施，以免疾病的進一步傳播，整體檢測效能更優(yōu)，可以作為臨床診斷結核類疾病的首選方式[7]。本次研究結果也顯示，PCR結核分枝桿菌DNA的陽性檢出率15.08%與常規(guī)痰涂片的9.68%相比明顯更高，P＜0.05（x2=19.168）；PCR用于結核早期診斷靈敏度98.62%、特異度99.08%以及準確度99.01%與常規(guī)痰涂片的63.30%、93.12%以及88.56%相比均明顯更高，P＜0.05（x2=88.229，x2=57.381，x2=133.728），提示結核菌檢測中PCR結核分枝桿菌DNA檢驗無論是的陽性檢出率，還是檢測靈敏度、特異度等方面均更優(yōu)于常規(guī)痰涂片檢驗，表明PCR有著更高的臨床應用的價值與前景。綜上所述，在對結核患者開展結核菌培養(yǎng)檢驗時，采用PCR結核分枝桿菌DNA進行結核檢測與常規(guī)痰涂片檢驗相比準確度更高，且有著更高的檢測靈敏度與特異度，可以更加簡便、快速，且特異性的對患者的結核菌感染情況進行檢測，對于結核疾病早期的診斷與治療觀察均有積極作用，診斷效能更佳，臨床推廣價值更高?！緟⒖嘉墨I】[1]羅嘉韻,余明均,廖衛(wèi)平.結核分枝桿菌利福平耐藥分子藥敏結果與其表型藥敏差異的研究[J].海南醫(yī)學,2022,33(06):725-728.[2]范正超,尹航,劉建震,等.實時熒光定量聚合酶鏈反應技術在腎結核病理診斷中的應用價值[J].河北醫(yī)科大學學報,2022,43(01):39-43.[3]王菊紅,穆麗平.熒光定量PCR檢測結核桿菌DNA的拷貝數與涂片抗酸染色鏡檢陽性程度的相關性研究[J].口岸衛(wèi)生控制,2021,26(06):49-51.[4]林律,平國華,車洋,等.PCR熒光探針技