實(shí)驗(yàn)三-微生物菌落制片技術(shù)

實(shí)驗(yàn)三微生物菌落制片技術(shù)一、目的要求

1

．學(xué)習(xí)并掌握放線菌形態(tài)的制片方法．2．學(xué)習(xí)并掌握霉菌的制片方法。二、基本原理

放線菌扦片法：將放線菌接種在瓊脂平板上，扦上滅菌蓋玻片后培養(yǎng)，使放線菌菌絲沿著培養(yǎng)基表面與蓋玻片的交接處生長而附著在蓋玻上。觀察時(shí)，輕輕取出蓋玻片，置于載玻片上直接鏡檢。這種方法可觀察到放線菌自然生長狀態(tài)下的特征，而且便于觀察不同生長期的形態(tài)。霉菌載玻片培養(yǎng)法：無菌操作將培養(yǎng)基瓊脂薄層置于載玻片上，接種后蓋上蓋玻片培養(yǎng)物，霉菌即在載玻片和蓋玻片之間的有限空間內(nèi)沿蓋玻片橫向生長。培養(yǎng)一定時(shí)間后，將載玻片上的培養(yǎng)物置顯微鏡下觀察。這種方法既可以保持了霉菌自然生長狀態(tài)，還便于觀察不同發(fā)育期的培養(yǎng)物。三、器材

菌種

鏈霉菌；曲霉，青霉，根霉培養(yǎng)基

馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基儀器或其他用具

滅菌平皿、載玻片、蓋玻片、U形玻棒，接種環(huán)，解剖刀，鑷子，20%的甘油，顯微鏡等。四、操作步驟

1.放線菌扦片法

倒平板

取融化并冷至約50

℃

的高氏1

號瓊脂約20mL

倒平板，凝固待用；

接種用接種環(huán)挑取菌種斜面培養(yǎng)物在瓊脂平板上劃線接種。

扦片以無菌操作用鑷子將滅菌的蓋玻片以大約45

°角扦入瓊脂內(nèi)，扦片數(shù)量可根據(jù)需要而定。

培養(yǎng)將扦片平板倒置，28

℃

培養(yǎng)3

～5d

。

鏡檢

用鑷子小心拔出蓋玻片，擦去背面培養(yǎng)物，將有菌的一面朝上放在載玻片上，直接鏡檢。注意1劃線要細(xì)密些,以利扦片；2扦片要扦在接種線上；2霉菌載玻片培養(yǎng)法

培養(yǎng)小室的滅菌

瓊脂塊的制作取已滅菌的馬鈴薯培養(yǎng)基6～7mL注入另一滅菌的平皿中，使之凝固成薄層。用解剖刀切成0.5～1cm2的瓊脂快，并將其移至上述培養(yǎng)室中的載玻片上（每片放兩塊）。

接種用尖細(xì)的接種針挑取少量的孢子接種于瓊脂快的邊緣上，用無菌操作鑷子將蓋玻片覆蓋在瓊脂快上。

培養(yǎng)先在平皿的濾紙上加3～5ml滅菌的20%甘油，蓋上皿蓋，28℃培養(yǎng)。

鏡檢根據(jù)需要可在不同的培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)取出載玻片置低倍鏡下觀察，必要時(shí)換高倍鏡。注意1制作過程應(yīng)注意無菌操作；2接種量要少，盡可能將分散的孢子接種在瓊脂塊邊緣上，否則培養(yǎng)后菌絲過于稠密影響觀察；3觀察時(shí),宜用略暗光線；先用低倍鏡找到適當(dāng)視野，再換高倍鏡觀察。五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

簡述曲霉、青霉、根霉的菌落顏色及特征。六、思考題1試比較教材中所列三種培養(yǎng)和觀察放線菌方法的優(yōu)