中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶檢驗(yàn)的診斷意義

中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶檢驗(yàn)的診斷意義摘要】目的討論中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶檢驗(yàn)的診斷意義。方法對(duì)采集到的樣本進(jìn)行檢驗(yàn)。結(jié)論中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶的臨床檢驗(yàn)結(jié)果對(duì)細(xì)菌感染性疾病和病毒感染性疾病的鑒別、婦科疾病的鑒別診斷具有一定的參考價(jià)值，但對(duì)于除了結(jié)核性腦膜炎和病毒性腦膜炎患者以外的其他腦膜炎患者的疾病診斷提供重要依據(jù)?！娟P(guān)鍵詞】中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶檢驗(yàn)診斷中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（neutrophilicalkalinephos-phatase，NAP）是一種中性粒細(xì)胞胞內(nèi)水解酶，屬一種含鋅的金屬酶類，它主要見(jiàn)于成熟中性粒細(xì)胞、網(wǎng)狀細(xì)胞和吞噬細(xì)胞。其他細(xì)胞（嗜酸性、嗜堿性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨核細(xì)胞、漿細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板中）皆為陰性反應(yīng)。有研究表明，NAP活性隨中性粒細(xì)胞發(fā)育成熟有遞增的趨勢(shì)。一、 檢驗(yàn)方法臨床測(cè)定中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶的方法有組織細(xì)胞經(jīng)化學(xué)染色后，在光鏡下按Kapl0五級(jí)半定量法和測(cè)其酶活力的生化定量法。目前臨床上NAP染色仍常采用Gomeri鈣-鉆法（硫化鉆染色法），NAP陽(yáng)性率為鏡檢l00個(gè)成熟中性粒細(xì)胞，計(jì)數(shù)其中陽(yáng)性反應(yīng)的細(xì)胞數(shù)，以％表示。NAP積分計(jì)算方法為鏡檢100個(gè)成熟中性粒細(xì)胞，若全部細(xì)胞充滿硫化鉆顆粒，呈黑色團(tuán)塊，甚至蓋核則判為"++++”，計(jì)4分；若胞漿內(nèi)充滿黑色顆粒，但顆粒之間有空隙，或者是胞漿內(nèi)有3/4面積充滿了致密的黑色顆粒沉淀則判為“+++”，計(jì)3分；若胞漿面積的l/2呈黑色或灰黑色顆粒沉淀（或者是全胞漿呈均勻灰色，無(wú)顆粒）則判為“++”，計(jì)2分，若胞漿面積的l/4呈黑色，或灰黑色顆粒沉淀，或者是全胞漿呈均勻淺灰色，無(wú)明顯顆粒則判為“+”，計(jì)1分；若胞漿內(nèi)無(wú)灰色或黑色沉淀則計(jì)0分。正常人NAP陽(yáng)性率和積分都較低，一般陽(yáng)性率為4%?56%，積分為7?51分。由于NAP染色所采用的Gomeri鈣-鉆法是一種酶促反應(yīng)，且此酶反應(yīng)所需時(shí)間長(zhǎng)，受技術(shù)因素影響大（如試劑pH、標(biāo)本保存溫度與時(shí)間、溫浴時(shí)間等），如在某些環(huán)節(jié)掌握不當(dāng)，往往可致染色失敗，所以不同的實(shí)驗(yàn)室有不同的正常值，各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)找出穩(wěn)定的操作方法，以排除其影響因素，根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)條件而建立參考范圍且實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)注意質(zhì)量控制。另外，測(cè)定NAP的標(biāo)準(zhǔn)操作程序中要求采集新鮮血液標(biāo)本直接制備血涂片進(jìn)行染色，但由于目前多數(shù)醫(yī)院已使用抗凝全血標(biāo)本進(jìn)行全血細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查，故有人對(duì)新鮮血標(biāo)本和抗凝全血標(biāo)本進(jìn)行對(duì)比研究，發(fā)現(xiàn)利用EDTA抗凝全血制備的血涂片進(jìn)行中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色，其陽(yáng)性率及積分均與新鮮血的染色結(jié)果接近，而用枸櫞酸鈉抗凝血和肝素抗凝血標(biāo)本染色結(jié)果與新鮮血標(biāo)本有非常大的差異，故建議臨床上可用EDTA抗凝血替代新鮮血制備血涂片進(jìn)行中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色。但是也有研究表明，EDTA-K2對(duì)NAP有明顯的抑制作用，且標(biāo)本保存時(shí)間愈長(zhǎng)影響愈大，加上不同保存溫度對(duì)NAP結(jié)果也有較大影響，所以就要求我們盡量使用新鮮標(biāo)本，最好在30min內(nèi)涂片染色，或者4°C冰箱保存，盡快涂片，否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。當(dāng)各種原因（大量糖皮質(zhì)激素的應(yīng)用、細(xì)菌感染等）導(dǎo)致中性粒細(xì)胞活化后，其中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶活性增加，導(dǎo)致堿性磷酸酶染色陽(yáng)性率和積分升高，因此它可以作為中性粒細(xì)胞功能的標(biāo)志酶之一。NAP活性改變受到體內(nèi)多種因素的影響或調(diào)節(jié)，如腎上腺皮質(zhì)激素、ACTH、雌性激素、糖代謝、鋅離子、基因等。二、 臨床意義（一） 細(xì)菌感染性疾病和病毒感染性疾病的鑒別對(duì)于臨床上考慮感染性疾病的患者，除外了影響檢驗(yàn)NAP結(jié)果的因素外，若NAP陽(yáng)性率和積分升高，則考慮為細(xì)菌感染性疾病，若NAP陽(yáng)性率和積分減低則提示為病毒感染性疾病。但是有研究發(fā)現(xiàn)，腎綜合征出血熱患者在發(fā)熱期NAP明顯升高，至恢復(fù)期明顯降低，但仍高于正常。這是由于有文獻(xiàn)報(bào)道腎綜合征出血熱病毒可侵犯人體內(nèi)臟的血管內(nèi)皮細(xì)胞和實(shí)質(zhì)細(xì)胞，造成各種血細(xì)胞中顆粒改變，致使NAP活性增加，推斷腎綜合征出血熱患者的NAP活性升高可能與病毒感染、病毒血癥造成血細(xì)胞反應(yīng)代謝增加或激素的變化有關(guān)。（二） 婦科疾病的鑒別診斷盆腔包塊或腹痛的鑒別診斷感染性炎癥的婦科疾病NAP積分顯著增高，如盆腔炎、盆腔膿腫、巴氏腺膿腫。因此臨床上對(duì)于盆腔包塊性質(zhì)不明或腹痛原因不明的女性患者，若測(cè)得其NAP積分大于100分時(shí)，應(yīng)高度懷疑盆腔炎、盆腔膿腫等感染性疾病。由于有研究發(fā)現(xiàn)子宮肌瘤患者NAP積分也明顯高于正常對(duì)照，其差異有顯著意義，所以對(duì)于NAP升高的婦科患者，應(yīng)通過(guò)婦科B超檢查快速明確有無(wú)子宮肌瘤的可能。其他婦科疾病如卵巢囊腫、功血、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌和宮頸癌等，雖然NAP積分也可高于正常值，但其升高不明顯。妊娠婦女末梢血中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶活性有研究發(fā)現(xiàn)，妊娠婦女末梢血NAP活性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的明顯升高，但是當(dāng)患者出現(xiàn)妊高征或合并感染時(shí)，其NAP活性升高的會(huì)更加明顯。因此正常妊娠婦女NAP活性的增高，不能認(rèn)為是病理表現(xiàn)，而是一種正常的生理反應(yīng)。但是當(dāng)妊娠婦女的NAP活性顯著增高時(shí)，則較大程度上提示有病理性的可能，應(yīng)考慮是否存在妊高征或合并感染。由于NAP活性的檢測(cè)具有操作方便和方法可靠的特點(diǎn)，所以對(duì)于妊娠婦女進(jìn)行NAP活性的檢查，對(duì)預(yù)防疾病具有一定的實(shí)用價(jià)值。糖尿病患者中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶活性由于糖尿病患者血中的中性粒細(xì)胞的黏附、趨化、吞噬和殺菌能力均不足，將其與葡萄糖和胰島素一起培養(yǎng)可恢復(fù)其趨化性提示中性粒細(xì)胞功能與糖代謝有關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病患者，無(wú)論是1型糖尿病還是2型糖尿病，其NAP活性明顯升高。這是因?yàn)?型糖尿病患者空腹及餐后胰島素分泌不足，2型糖尿病患者胰島素分泌相對(duì)不足及胰島素分泌第一時(shí)相減弱都會(huì)出現(xiàn)物質(zhì)代謝紊亂，導(dǎo)致糖原合成減低，分解代謝加速，致使外周組織為了適應(yīng)粒細(xì)胞吞噬和代謝所需，粒細(xì)胞糖酵解加強(qiáng)，引起細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶（SOD）的相對(duì)增高，由于糖原的不斷消耗，粒細(xì)胞分解加速，NAP活性增強(qiáng)。另外，由于NAP是一種含鋅的金屬酶，有人認(rèn)為NAP活性與細(xì)胞鋅含量有關(guān)，鋅是NAP的激活劑，主要靠胃腸黏膜內(nèi)鋅載體蛋白吸收，糖尿病患者蛋白質(zhì)代謝呈負(fù)氮平衡，影響鋅載體蛋白合成，進(jìn)而影響腸道對(duì)鋅離子的吸收，導(dǎo)致尿鋅增高，血及發(fā)鋅含量降低，由于腸鋅吸收障礙，攝入的鋅離子通過(guò)胞飲作用進(jìn)入粒細(xì)胞激活NAP，使其活性升高。（三） 腦脊液NAP的測(cè)定對(duì)于各種腦膜炎患者，進(jìn)行腦脊液的NAP活性測(cè)定對(duì)于鑒別診斷是十分有意義的?；撔阅X膜炎患者其腦脊液的NAP活性明顯升高，而結(jié)核性腦膜炎和病毒性腦膜炎患者其腦脊液的NAP活性無(wú)明顯變化。三、總結(jié)中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶的臨床檢驗(yàn)結(jié)果對(duì)細(xì)菌感染性疾病和病毒感染性疾病的鑒別、婦科疾病的鑒別診斷具有一定的參考價(jià)值，但對(duì)于除了結(jié)核性腦膜炎和病毒性腦膜炎患者以外的其他腦