環(huán)境三致物的生物檢測

環(huán)境三致物的生物檢測

環(huán)境三致物：指能致畸、致癌、致突變的物質DNA基因染色體的作用檢測DNA損傷，DNA損傷修復等檢測三致物對基因突變，包括正向突變和回復突變染色體畸變試驗；微核試驗；SCE試驗特點：時間短、成本低、結果可靠整理ppt項目九

蠶豆根尖微核監(jiān)測技術

一、蠶豆根尖微核技術的原理

讓我們復習一下細胞有絲分裂的過程吧整理ppt整理ppt有絲分裂各時期整理ppt植物細胞的有絲分裂整理ppt有絲分列各期圖像整理ppt項目九

蠶豆根尖微核監(jiān)測技術

一、蠶豆根尖微核技術的原理

蠶豆根尖細胞在進行有絲分裂過程中，染色體經常發(fā)生斷裂，但一般情況下，斷裂可以自行愈合，如果受到有害因子的攻擊，染色體就不能愈合，甚至增加斷裂，形成染色體片段，這些染色體片段由于缺乏著絲點而不能到達細胞的兩極，而留在細胞質中，一旦新細胞核形成，這些片段就形成大小不同的小核，即微核。因此，我們可以根據(jù)微核率的高低說明誘變物的強弱。

整理ppt項目九蠶豆根尖微核監(jiān)測技術二、受試生物材料

松滋青皮豆，或其他蠶豆品種1.蠶豆浸種催芽

25℃，浸泡26～30h

浸種

催芽：用紗布松松包裹吸漲的種子置解剖盤內，保持濕度，在25℃的溫箱中催芽12～30h。待種子初生根露出2～3mm，再選取發(fā)芽良好的種子，放入鋪滿薄層濕脫脂棉的解剖盤內，仍在25℃下催芽36～48h，當大部分種子的初生根長至2～3cm時，即可用于處理

三、試驗步驟整理ppt項目九蠶豆根尖微核監(jiān)測技術2.處理根尖

每一處理選取6～8粒初生根生長良好，根長一致的種子，放入盛有被測液的培養(yǎng)皿中，讓被測液浸泡住根尖即可，用自來水（或蒸餾水）作對照處理，方法相同。處理時間為4～6h。

3.根尖細胞恢復培養(yǎng)

將處理后的種子，用自來水（或蒸餾水）浸洗3次，每次2～3min，然后把洗凈的種子再放入濕脫脂棉盤中，按前述培養(yǎng)條件恢復培養(yǎng)22～24h整理ppt項目九蠶豆根尖微核監(jiān)測技術4.根尖細胞的固定

將恢復后的種子，從根尖頂端切下lcm長幼根放入青霉素空瓶中，加卡諾氏液固定24h5.孚爾根（Feulgen）染色

(1)固定好的幼根，在青霉素瓶中用蒸餾水浸洗2次，每次5min(2)吸凈殘水，再加5mol/LHCI將幼根泡住，連瓶放入28℃水浴鍋中水解幼根25min左右，至幼根被軟化即可

(3)用蒸餾水浸洗幼根2次，每次5min整理ppt項目九蠶豆根尖微核監(jiān)測技術(4)在暗室或遮光的條件下加席夫（Schiff）試劑，染色1～4h

(5)除去染液，用SO2洗滌液浸洗幼根2次，每次5min(6)用蒸餾水浸洗1次，5min(7)將幼根放入新?lián)Q的蒸餾水中，置4℃的冰箱內保存，可供隨時制片之用。

6.制片

45%醋酸壓片法整理ppt項目九蠶豆根尖微核監(jiān)測技術7.鏡檢及微核識別標準

◆大小是主核大小的1/3以下，并與主核分離；◆形狀為圓形、橢圓形或不規(guī)則形；◆著色與主核相當或稍淺

每一處理觀察3個根尖，每個根尖隨機計數(shù)1000個細胞中的微核數(shù)

整理ppt項目九蠶豆根尖微核監(jiān)測技術五、實驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計處理和污染程度的劃分

（一）數(shù)據(jù)處理

1.按以下公式計算各測試樣品（包括對照組）的微核千分率（MCN‰）

MCN‰=某測試點（或對照組）觀察到的MCN數(shù)某測試點（或對照組）觀察到的細胞數(shù)×100％2.如果被監(jiān)測的樣品不多，可直接用各樣品MCN率平均值與對照比較（t檢驗），從差異的顯著性判斷水質污染與否

整理ppt項目九蠶豆根尖微核監(jiān)測技術3.如果被檢測的樣品較多，可先用方差分析（F檢驗）看各樣品的MCN‰平均值與對照的差異顯著性。

（二）結果評價

1.利用“MCN‰”進行評價

<10‰ 無污染10‰～18‰ 輕污染18‰～30‰ 中污染>30‰ 重污染

整理ppt項目九蠶豆根尖微核監(jiān)測技術2.利用“污染指數(shù)”

進行評價