中山大學(xué) 實驗室安全與論文寫作復(fù)習(xí)綱要

《實驗室安全基礎(chǔ)知識》復(fù)習(xí)資料猩猩整理版實驗室安全基礎(chǔ)知識說明：本資料包括倫照榮老師前面三個課件95%的文字和小部分圖片，便于復(fù)習(xí)和查找資料用，文中如有錯漏，以課件為準(zhǔn)！第一章實驗室生物安全概要病原體研究很重要,但是危害實驗人員!!!1941年,調(diào)查顯示美國發(fā)生74例實驗室相關(guān)的布魯氏桿菌感染二戰(zhàn)期間,日本在中國進行細(xì)菌戰(zhàn)的同時,其工作人員也有上萬人感染,數(shù)千人死亡!1976年統(tǒng)計,英國醫(yī)學(xué)實驗室的工作人員獲得結(jié)核感染比普通人高5倍1979年,前蘇聯(lián)生物武器研究基地炭疽桿菌泄露造成64人死亡2003年,新加坡臺灣以及中國大陸都有明確的實驗室感染SARS的病例,以及隨后對周圍環(huán)境的危害提倡實驗室生物安全勢在必行!!實驗室感染的直接原因：1微生物氣溶膠傳播2接種時出錯,注入體內(nèi)3被動物咬傷4注射器噴濺5離心機事故實驗室生物安全的重點任務(wù)是:實驗室感染的控制實驗室對周圍環(huán)境影響的控制對實驗室和感染性材料的管理控制國內(nèi)外關(guān)于實驗室安全的相關(guān)規(guī)定WHO于1983年出版的《實驗室生物安全手冊》是第一本具有國際適用性的實驗室生物安全手冊WHO于1993年又組織了7個國家和WHO的生物安全專家及官員編寫和發(fā)布了《實驗室生物安全手冊》第二版WHO于2004年完成了第三版《實驗室生物安全手冊》的發(fā)布，內(nèi)容上更全面、更科學(xué)、更具時代感美國在不斷的研究中于1999年發(fā)布了第四版的《微生物和生物醫(yī)學(xué)實驗室的生物安全》及２００２年《涉及重組ＤＮＡ研究的生物安全南（ＮＩＨ指南）》加拿大于１９９６年已發(fā)布第二版《實驗室生物安全指南》歐洲：歐盟法規(guī)、英國的《生物因子危害程度及防護分類》、德國〈病原體分類〉、法國與比利時和荷蘭的〈感染因子的危害等級分類〉、瑞士〈基于對人和環(huán)境危險性的生物因子分類〉等都在安全問題上進行了具體的規(guī)定2003年了SARS給中國的實驗室生物安全拉響了警鐘?。?！2004年5月GB19489—2004《實驗室生物安全通用要求》作為國家強制性標(biāo)準(zhǔn)正式頒布，在實驗室生物安全管理、公共衛(wèi)生體系和認(rèn)證認(rèn)可體系建設(shè)上是一件具有重要意義的大事，它標(biāo)志著我國實驗室生物安全管理進入了科學(xué)、規(guī)范的發(fā)展的新階段。第二章實驗室生物安全基本原則基本概念病原體：可使人、動物或植物致病的生物因子。危險廢棄物：有潛在生物危險、可燃、易燃、腐蝕、有毒、放射和起破壞作用的，對人、環(huán)境有害的一切廢棄物。氣溶膠：懸浮于氣體介質(zhì)中的粒徑一般為0.001μm-100μm固態(tài)或液態(tài)微小粒子形成的相對穩(wěn)定的分散體系。一級防護屏障：實驗室的生物安全柜和個人防護裝備等共同構(gòu)成的防護屏障，用以減少或消除危害性生物因子的暴露。二級防護屏障：實驗室的設(shè)施結(jié)構(gòu)和通風(fēng)系統(tǒng)等共同構(gòu)成的防護屏障，除了保護實驗室人員，還能保護周圍社區(qū)的人或動物免受生物因子意外擴散所造成的感染。生物安全實驗室（BSL）：通過規(guī)范的實驗室設(shè)計建造、實驗室設(shè)備的配置、個人防護裝備的使用，通過嚴(yán)格遵從標(biāo)準(zhǔn)化的工作操作程序和管理規(guī)程等綜合措施，確保操作生物危險因子的工作人員不受實驗對象的傷害，確保周圍環(huán)境不受其污染的實驗室。微生物危害等級1.危害等級Ⅰ（低個體危害，低群體危害）不會導(dǎo)致健康工作者和動物致病的細(xì)菌、真菌、病毒、寄生蟲等生物因子。2.危害等級Ⅱ（中等個體危害，有限群體危害）能引起人或動物發(fā)病，但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會引起嚴(yán)重危害的生物因子。3.危害等級Ⅲ（高個體危害，低群體危害）能引起人類或動物嚴(yán)重疾病，或造成嚴(yán)重經(jīng)濟損失，但通常不能因偶然接觸而在個體間傳播，或能使用抗生素、抗寄生蟲藥治療的生物因子。4.危害等級Ⅳ（高個體危害，高群體危害）能引起人類或動物非常嚴(yán)重疾病，一般不能治愈，容易直接或簡接或偶然接觸而在個體間傳播。生物安全水平危害等級生物安全水平實驗室類型實驗室操作安全設(shè)備Ⅰ級基礎(chǔ)實驗室—一級生物安全水平基礎(chǔ)的教學(xué)研究GMT不需要;開放實驗臺Ⅱ級基礎(chǔ)實驗室—二級生物安全水平初級衛(wèi)生服務(wù);診斷研究GMT加防護服生物危險標(biāo)志開放實驗臺,此外需BSC用于防護可能生成的氣溶膠Ⅲ級屏障實驗室—三級生物安全水平特殊的診斷研究在二級生物安全防護水平上增加特殊防護服準(zhǔn)入制度定向氣流BSC和/或其他所有實驗室工作所需要的基本設(shè)備Ⅳ級高度屏障實驗室—四級生物安全水平危險生物因子研究在三級生物安全防護水平上增加氣鎖入口外出淋浴污染物品的特殊處理Ⅲ級BSC或Ⅱ級BSC并穿著正壓服,雙開門高壓滅菌器(穿過墻體),過濾空氣實驗室生物安全保障措施要認(rèn)識到實驗室防護與實驗室安全雖然相關(guān)，但二者并不等同使用和貯存病原體或毒素的區(qū)域應(yīng)控制人員的出入明確在實驗區(qū)有人員明確被帶入實驗區(qū)的物質(zhì)明確被帶出實驗區(qū)的物質(zhì)制定應(yīng)急措施制定事故報告方案第三章生物安全實驗室一級生物安全水平實驗室BSL-1適用于具有以下特征的生物因子的操作：已知不會導(dǎo)致健康工作者和動物致病的細(xì)菌、真菌、病毒和寄生蟲等，并且對實驗室工作人員和環(huán)境的潛在危害性最小。進入BSL-1實驗室的工作人員要通過實驗室操作程序的特殊培訓(xùn)，并由一位受過微生物學(xué)及相關(guān)科學(xué)一般培訓(xùn)的實驗室工作人員監(jiān)督管理。BSL-1實驗室標(biāo)準(zhǔn)微生物操作準(zhǔn)則：

1.實驗正在進行或正在操作組織和標(biāo)本時，實驗室主任應(yīng)限制人員進入實驗室。

2.操作潛在危險物和摘下手套后要洗手，離開實驗室之前也要洗手。

3.工作區(qū)內(nèi)禁止吃東西、喝水、抽煙、操作隱形眼鏡、使用化妝品及儲存食物。在實驗室戴隱形眼鏡的人員應(yīng)佩戴護目鏡和防護面具。食物要儲存在工作區(qū)外的專用柜子或冰箱里。4.嚴(yán)格禁止用嘴吸移液管，要使用機械吸液裝置。5.制定尖銳物品的安全操作規(guī)范。

6.所有的實驗操作步驟盡可能小心，減少氣溶膠或飛濺物的形成。

7.工作日結(jié)束后，應(yīng)實行終末消毒處理。如有任何潛在危險物濺出時，工作臺表面應(yīng)立即凈化消毒處理。

8.所有培養(yǎng)基、保存物和其它系統(tǒng)管理的廢棄物，在處理之前應(yīng)使用經(jīng)審定批準(zhǔn)的凈化方法（如：高壓滅菌法）進行凈化處理。

9.實驗室應(yīng)具備防止昆蟲和嚙齒類動物在實驗室孳生的防護設(shè)備。一級屏障1.操作屬于生物安全一級的生物因子一般不需要特殊防護裝置和設(shè)備，如生物安全柜。

2.實驗服、實驗袍或?qū)嶒炛品?，防止便服被污染或?/p>

3.如果手部皮膚破損或起疹時應(yīng)戴上手套；要配備可替換的膠乳手套。

4.操作中遇到可能有微生物或其它有毒害物質(zhì)飛濺出來時，應(yīng)佩戴保護性眼罩。二級屏障1.BSL-1實驗室應(yīng)該有控制進入的門。

2.每個實驗室應(yīng)配備一個洗手用的洗滌槽。

3.實驗室的設(shè)計應(yīng)使實驗室易于清潔，不適合鋪設(shè)地毯。

4.實驗臺面應(yīng)是防水的，并且能夠耐受中等程度的熱、有機溶劑、酸堿及其它用于凈化處理臺面和設(shè)備的化學(xué)藥品。

5.實驗室器材設(shè)施應(yīng)能支持預(yù)期的承重和使用需要。桌凳、柜子和設(shè)備之間的間距應(yīng)便于清掃。二級生物安全水平實驗室BSL-2實驗室布局應(yīng)分清潔區(qū)、半污染區(qū)和污染區(qū)，人流、物流、信息流應(yīng)有效分隔。BSL-2設(shè)計要求：1.首先要符合BSL-1實驗室建筑設(shè)計和設(shè)施要求2.實驗室門宜帶鎖、可自動關(guān)閉。實驗室的門應(yīng)有可視窗。3.實驗室出口應(yīng)有在黑暗中可明確辨認(rèn)的標(biāo)識。4.實驗室宜有不少于每小時3～4次的通風(fēng)換氣次數(shù)。5.應(yīng)通風(fēng)，如使用窗戶自然通風(fēng)，應(yīng)有防蟲紗窗。6.應(yīng)有足夠的存儲空間擺放物品以方便使用。在實驗室工作區(qū)域外還應(yīng)當(dāng)有供長期使用的存儲空間7.在實驗室工作區(qū)域外應(yīng)有存放個人衣物的條件8.在實驗室門口應(yīng)有生物安全二級實驗室標(biāo)識。防護設(shè)備1.應(yīng)在實驗室內(nèi)配備生物安全柜。2.應(yīng)設(shè)洗眼設(shè)施，必要時應(yīng)有應(yīng)急噴淋裝置。3.在實驗室所在的建筑物內(nèi)應(yīng)配備高壓蒸汽滅菌器。三級生物安全水平實驗室BSL-3是一個按特殊要求建造的實驗室，適合操作、研究會引起嚴(yán)重的、可能致死的疾病的病原微生物。整個實驗室完全密封，室內(nèi)氣壓比室外低40帕斯卡，處于負(fù)壓狀態(tài)，從而避免實驗室內(nèi)部的可能含有病源微生物的氣體跑到外面而造成污染。操作準(zhǔn)則：

1．實驗器材應(yīng)避免使用玻璃制品和銳器。2．所有的實驗、檢測操作都必須在指定區(qū)域內(nèi)進行3．菌毒種的使用嚴(yán)格執(zhí)行菌毒種有關(guān)管理規(guī)定，責(zé)任人簽訂責(zé)任書，做到雙人雙鎖保管4．實驗中不得不使用玻璃制品和銳器時，應(yīng)通過鑷子等工具夾取，盡量避免直接用手接觸。5．必須使用螺口可密閉的離心管或試管進行離心6．實驗動物放在負(fù)壓飼養(yǎng)箱內(nèi)飼養(yǎng)，每天至少觀察1—2次，做好觀察記錄7.完成每一項試驗（感染性材料的操作、動物解剖）或轉(zhuǎn)換實驗區(qū)時都應(yīng)更換第二層手套，摘下的手套應(yīng)立即置于盛有消毒劑的容器中。8.每次實驗、檢測工作結(jié)束后，工作人員應(yīng)對涉及的所有工作區(qū)域、儀器設(shè)備和試驗臺面進行清潔整理和消毒處置。四級生物安全水平實驗室BSL-4四級生物安全水平實驗室是為進行與危害等級Ⅳ的微生物相關(guān)的工作而設(shè)計的，根據(jù)所使用的生物安全柜的類型和穿著防護服的不同，可以分為安全柜型、正壓服型和混合型實驗室。在建設(shè)和投入使用前，應(yīng)充分咨詢有運作類似設(shè)施經(jīng)驗的機構(gòu)，其運作應(yīng)在國家有關(guān)部門的管理之下進行。動物實驗室設(shè)施動物實驗室的生物安全防護（ABSL）設(shè)施參照BSL-1—BSL-4實驗室的要求，此外還應(yīng)考慮對動物呼吸、排泄、毛發(fā)、抓咬、掙扎、逃逸、動物實驗、動物飼養(yǎng)、動物尸體及排泄物的處置等過程產(chǎn)生的潛在生物危害的防護。動物實驗設(shè)施水平危害等級防護水平實驗室操作和安全設(shè)施Ⅰ級ABSL-1限制出入，穿戴防護服和手套Ⅱ級ABSL-2ABSL-1的操作加：生物危害警告標(biāo)志?？僧a(chǎn)生氣溶膠的操作應(yīng)使用Ⅰ級或Ⅱ級BSC。廢棄物和飼養(yǎng)籠舍在清洗前先清除污染Ⅲ級ABSL-3ABSL-2的操作加：準(zhǔn)入控制。所有操作均在BSC內(nèi)進行，并穿著特殊防護服Ⅳ級ABSL-4ABSL-3的操作加：嚴(yán)格限制出入。進入前更衣。配備Ⅲ級BSC或正壓防護服。離開時淋浴。所有廢棄物在清除出設(shè)施前需先清除污染第四章危害評估生物安全工作的核心是危害評估，也指風(fēng)險評估。當(dāng)實驗室活動涉及感染或潛在感染因子時，對某一個特定的操作程序或?qū)嶒炦M行危害評估，可以幫助正確選擇生物安全水平，評估職業(yè)性疾病風(fēng)險、采取相應(yīng)安全防護措施、減少所危險性時間發(fā)生。（評估的意義）危害評估的影響因素病原體的致病性傳播途徑病原體的穩(wěn)定性病原體的感染力量病原體的濃度感染性物質(zhì)的來源動物研究結(jié)果基因技術(shù)實驗室操作預(yù)防措施或治療方法醫(yī)療監(jiān)督其他

危害評估的范圍含有已知感染性病原體的物質(zhì)含有未知感染性病原體的物質(zhì)含有遺傳修飾微生物的物質(zhì)可能含有（或沒有）未知感染性病原體的物質(zhì)動物研究其他應(yīng)用(包括操作人本身)第五章實驗室危害第一節(jié)化學(xué)品的危害可以根據(jù)危險性貨物運輸規(guī)定或化學(xué)品本身所具有的危害和危害程度來對危害性化學(xué)品進行定義和分類?？梢愿鶕?jù)化學(xué)藥品其反應(yīng)性、不穩(wěn)定性、燃燒性或健康危害程度來進行分類?？梢愿鶕?jù)其毒性作用進行分類。暴露途徑：吸入：化學(xué)品可能引起刺激性、致敏性、變態(tài)反應(yīng)性、呼吸道的疾病或癌癥接觸：皮膚接觸時可能引起化學(xué)燒傷、眼結(jié)膜炎或全身性中毒食入：危險性化學(xué)品可能經(jīng)口吸入或污染食物和飲料而意外食入通過損傷皮膚：危險性化學(xué)品可能經(jīng)皮膚切口、擦傷或針刺傷口進入體內(nèi)第二節(jié)壓縮氣體和液化氣的危害容器貯存要求壓縮氣體鋼瓶和液化氣容器安全地固定在墻上或堅固的實驗臺上，以確保鋼瓶不會因為自然災(zāi)害而移動運輸時必須戴好蓋帽，并用手推車運送大量儲備用鋼瓶應(yīng)存放在與實驗室有一定距離的適當(dāng)設(shè)施內(nèi)。不應(yīng)放置在散熱器、明火或其他熱源或會產(chǎn)生電火花的電器附近，也不應(yīng)置于陽光下直曬小型、單次使用的氣體鋼瓶不得焚燒第三節(jié)火的危害火災(zāi)的通常原因：1.超負(fù)荷用電；2.電器保養(yǎng)不良，例如電纜的絕緣層破壞或損壞3.供氣管或電線過長4.儀器設(shè)備在不使用時未關(guān)閉電源5.使用不是專為實驗室環(huán)境設(shè)計的儀器設(shè)備6.明火7.供氣管老化銹蝕8.易燃、易爆品處理或保存不當(dāng)9.不相容化學(xué)品沒有正確隔離10.在易燃物品或蒸氣附近有能產(chǎn)生火花的設(shè)備11.通風(fēng)系統(tǒng)不當(dāng)或不充分滅火器的類型和應(yīng)用范圍種類應(yīng)用范圍不宜應(yīng)用范圍水紙、木質(zhì)纖維電路和電器火災(zāi)、易燃液體、金屬燃燒CO2易燃液體和氣體、電火災(zāi)堿金屬、紙開粉易燃液體和氣體、堿金屬、電路和電器火災(zāi)可重復(fù)使用的儀器和設(shè)備，因為其殘渣難以清除干凈泡沫易燃液體電火災(zāi)第四節(jié)電的危害實驗室成員應(yīng)該了解的危險情況：1、電器接近潮濕物體表面2、使用過長的軟線3、電線絕緣性能差并已老化4、由于使用適配器使電路過載5、可能產(chǎn)生電火花的電器接近易燃物質(zhì)及其蒸氣6、電器在無人看管時處于通電狀態(tài)7、電器著火時使用錯誤類型的滅火器第五節(jié)電離輻射的危害電離輻射能造成皮膚損傷、脫發(fā)、貧血、胃腸系統(tǒng)損傷及白內(nèi)障和癌癥等疾病;也會造成染色體損害或基因突變等遺傳疾病輻射區(qū)域1只能在指定區(qū)域使用放射活性物質(zhì)2只允許必要的工作人員參與3使用個人防護設(shè)備（包括實驗室工作服、安全眼鏡以及一次性手套）4監(jiān)測實驗人員的輻射暴露實驗區(qū)域1使用溢出盤，內(nèi)襯一次性吸收材料2限制放射性核素的用量3在輻射區(qū)域、工作區(qū)域以及放射性廢氣物區(qū)設(shè)置輻射源的隔離防護裝置4輻射容器用輻射標(biāo)志進行標(biāo)記5工作結(jié)束后，用輻射計測量工作區(qū)域、防護服和手的輻射情況6使用經(jīng)適當(dāng)保護的運輸容器放射性廢棄物區(qū)域1要經(jīng)常從工作區(qū)域清除放射性廢棄物2要正確記錄放射性材料的使用和處理情況3要篩查超過劑量限度材料的劑量測定記錄4要制定并經(jīng)常性操練應(yīng)急反應(yīng)計劃5應(yīng)急反應(yīng)中首先要幫助受傷人員6要徹底清潔受污染區(qū)域7如果可能，從安全辦公室請求協(xié)助8書寫并保存事故報告第五章生物安全柜級別類型排風(fēng)方式循環(huán)空氣比例%柜內(nèi)氣流窗口進風(fēng)平均風(fēng)速m/s保護對象Ⅰ級--可向室內(nèi)排風(fēng)--亂流≥0.4使用者、環(huán)境Ⅱ級A1型可向室內(nèi)排風(fēng)70單向流≥0.4使用者、受試樣品和環(huán)境A2型可向室內(nèi)排風(fēng)70單向流≥0.5B1型不可向室內(nèi)排風(fēng)30單向流≥0.5B2型不可向室內(nèi)排風(fēng)——單向流≥0.5Ⅲ級——不可向室內(nèi)排風(fēng)0單向流或亂流無工作窗口，當(dāng)一只手套筒取下時，手套口平均風(fēng)速≥0.7主要是使用者和環(huán)境，有時兼顧受試樣品第一節(jié)Ⅰ級生物安全柜設(shè)計最簡單，最早得到認(rèn)可的生物安全柜，目前仍然被廣泛應(yīng)用；一般被用做特殊的密封設(shè)備或可能產(chǎn)生氣溶膠的操作過程。雖然Ⅰ級生物安全柜能夠為人員和環(huán)境提供保護，也可以用于操作放射性核素和揮發(fā)性有毒化學(xué)品，但是因為空氣直接從正面的開口處吹到工作臺面上，因此不能對操作對象提供切實可靠的保護。第二節(jié)Ⅱ級生物安全柜Ⅱ級生物安全柜不但提供個體保護，而且能保護工作臺面的物品不受污染；有四種不同類型—A1型，A2型，B1型，B2型不同于Ⅰ級生物安全柜，能讓HEPA過濾的無菌空氣流過臺面可用與BSL2和BSL3的感染性物質(zhì)，配備防護復(fù)還可以操作BSL4水平A1型在風(fēng)機和HEPA之間是正壓的，稱為正壓污染區(qū)；如果污染區(qū)發(fā)生泄露，污染性氣溶膠會安全柜內(nèi)逃逸，直接對實驗室和操作著產(chǎn)生危害。A2型最廣泛使用；原理與A1型相似氣體完全排到室外，如果HEPA泄露，不會污染實驗室，但是污染外部環(huán)境B1型可以用于以微量揮發(fā)性有毒化學(xué)品和痕量放射性核素為輔助劑的微生物實驗B2型所有流入和下降的氣體都通過HEPA過濾排到外面環(huán)境，在安全柜內(nèi)沒有再循環(huán)的氣體，因此是Ⅱ級生物安全柜中最安全的。Ⅱ級生物安全柜—A型和B型比較生物安全柜類型Ⅱ級A型Ⅱ級B型是否存在正壓污染區(qū)A1有，A2無無操作面活動窗結(jié)構(gòu)開啟固定型或垂直推拉型操作面開口高度/mm160-250操作區(qū)層流風(fēng)速/m.s-1≥0.23循環(huán)風(fēng)比例%70B1-30，B2-0排風(fēng)方式A1室內(nèi)，A2室外室外

操作對象

病原體

危險度1級-3級

危險度1級-3級重組遺傳基因

BSL1-BSL3

BSL1-BSL3化學(xué)至癌物

A1不可，A2可以（低濃度時）

可以（低濃度時）放射性物質(zhì)

A1不可，A2可以（低濃度時）

可以（低濃度時）揮發(fā)性溶劑

A1不可，A2可以（低濃度時）

可以第三節(jié)Ⅲ級生物安全柜用于操作危險等級為4級的對象，可提供高水平的個體保護；所有柜體為金屬焊接，并且采用完全封閉設(shè)計；實驗操作完全通過前窗的手套進行；尤其適用于致命因子的操作用于操作危險等級為4級的對象，可提供高水平的個體保護；所有柜體為金屬焊接，并且采用完全封閉設(shè)計；實驗操作完全通過前窗的手套進行；尤其適用于致命因子的操作第四節(jié)生物安全柜的使用1.緩慢移動原則為了避免影響正常的氣流狀態(tài)，柜內(nèi)操作動作應(yīng)該盡量平緩；2.物品平行擺放原則避免回風(fēng)過程中交叉污染，呈一字型排開；避免堵塞后部回風(fēng)隔柵；將所需物品放入，避免頻繁進出安全柜，影響氣流穩(wěn)定性；3.避免震動原則盡量避免震動儀器（如離心機、震蕩儀）的使用，會使HEPA脫落影響內(nèi)部潔凈度；4.不同樣品柜內(nèi)移動原則柜內(nèi)兩種及以上物品需要移動時，一定要遵循低污染性物品向高污染性物品移動的原則。第六章病原體及其生物安全水平第一節(jié)概述操作一種特定的病原體或者動物，選擇恰當(dāng)?shù)纳锇踩饺Q于：病原體或病毒的毒力、致病性、生物穩(wěn)定性、傳播途徑、傳染性；實驗室的性質(zhì)或職能；設(shè)計病原體的操作步驟和方法；病原體的地方流行性；有效的疫苗和治療方法的可用性。第二節(jié)細(xì)菌病原體炭疽桿菌實驗室危害：1、可以存在于血液、傷口滲出物、腦脊液、胸水和痰液中2、完整或破損的皮膚直接或間接接觸3、意外的胃腸道外接種，4、以及接觸有傳染性的氣溶膠都是對實驗室人員的主要危害。預(yù)防措施：除了經(jīng)常做臨床樣本或培養(yǎng)的人員，不推薦所有實驗室人員免疫疫苗；在動物疾病診斷實驗室中，建議對所有操作病原體的人員，所有在培養(yǎng)處理間工作的人員，以及所有對受感染的動物進行操作的人員進行免疫！百日咳博德特氏菌百日咳博德特氏菌是引起百日咳的致病菌，全世界分部，是一種典型的兒童疾病，但也已日益變得與成人疾病有關(guān)。實驗室危害：病原體主要存在于呼吸道分泌物中，但未見在血液和組織中存在；傳播方式通過呼吸途徑；最大的潛在危害是在操作該病原體的培養(yǎng)物或濃縮懸浮液時產(chǎn)生的氣溶膠。推薦的預(yù)防措施：采用BSL-2級水平的操作以及ABSL-2的動物培養(yǎng)；采用生物安全柜、安全離心杯和特殊的安全離心機；大規(guī)模操作建議使用BSL-3操作技術(shù)布氏桿菌屬最常見的實驗室相關(guān)性細(xì)菌感染?。?！包括牛布氏桿菌、犬布氏桿菌、羊布氏桿菌和豬布氏桿菌對抗原的過敏性也是一種危害個別病例是因為接觸實驗室感染或自然感染的動物或其他組織引起的實驗室危害:病原體存在于血液、腦脊液和精液，有時也可以存在于尿液；實驗室感染主要由于皮膚接觸大量生長的布氏桿菌或者吸入了細(xì)菌培養(yǎng)物以及傳染性的臨床樣本而感染；經(jīng)口吸入，意外的胃腸道外接種，濺入眼、鼻和口中也曾導(dǎo)致感染。推薦的預(yù)防措施：對于操作含有或可能含有致病性布氏桿菌的人類或動物的臨床樣本工作，采用BSL-2級水平的操作技術(shù)對于致病的布氏桿菌培養(yǎng)物的所有操作或者相關(guān)動物實驗，建議分別采用BSL-3級水平和動物ABSL-3級水平的操作技術(shù)、防擴散設(shè)備和設(shè)施破傷風(fēng)桿菌實驗室危害：意外的胃腸道外接種和攝入破傷風(fēng)毒素是實驗室人員的主要危害推薦的預(yù)防措施：采用BSL-2級水平的操作技術(shù)、方擴散設(shè)備和設(shè)施；實驗室感染較低，但每隔10年注射一次白喉-破傷風(fēng)毒素；結(jié)核分枝桿菌實驗室危害：操作結(jié)核分枝桿菌的實驗室人員結(jié)核病的發(fā)病率比其它人群高3倍；自然或?qū)嶒炇腋腥镜姆侨遂`長類動物是一個重要的傳染源；實驗室的豚鼠或小鼠不能通過咳嗽傳染，但是動物垃圾會成為感染性氣溶膠的來源。結(jié)核菌可存在于痰液、胃灌洗液、腦脊液、尿液和許多損傷的組織；暴露在感染性氣溶膠中是最主要的危害！預(yù)防措施：不產(chǎn)生氣溶膠的樣本，采用BSL-2級水平產(chǎn)生氣溶膠的實驗，必須在一級或二級生物安全柜使用實驗性或自然感染的非人靈長類動物進行研究，采用ABSL-3級水平豚鼠或小鼠的動物研究可以采用ABSL-2水平對以前皮膚試驗對陰性的實驗室人員用純蛋白衍化物再進行皮膚試驗，可作為疾病監(jiān)督的秩序；卡介苗可以作為疫苗使用，但在美國未被用于實驗室人員。沙門氏菌文獻證明，沙門氏菌可造成實驗人員感染；主要的帶菌宿主包括多種家養(yǎng)和野生動物，例如鳥類、哺乳類和爬行類動物等，它們都是實驗室人員的傳染源實驗室危害:可以存在于糞便、血液、尿液以及食物、飼料和環(huán)境中攝入或胃腸道外接種是主要的實驗室危害自然或?qū)嶒灨腥緞游飳嶒炇胰藛T、動物飼養(yǎng)員以及其他動物有潛在的傳染預(yù)防措施:病原體的臨床樣本及培養(yǎng)物的工作，采用BSL-2級水平；操作實驗性或自然感染動物的工作，采用ABSL-2級水平第三節(jié)真菌病原體皮炎芽生菌有報道稱，在實驗室有胃腸道感染的病例;在吸入分生孢子后，發(fā)生過肺部感染,其中一例發(fā)展成肺炎，一例發(fā)生骨質(zhì)溶解病變;對于操作標(biāo)本和樣本，建議采用BSL-2和ABSL-2級水平的操作技術(shù)和設(shè)施.粗球孢子菌實驗室危害：據(jù)報道，有一研究機構(gòu)出現(xiàn)了31例相關(guān)性感染，有28例（90%）出現(xiàn)了臨床癥狀，而通常超過一半的感染應(yīng)該是無癥狀的；節(jié)分生孢子極小，易擴散，并滯留在肺深部；厚壁球孢子則體積大而危險性降低；吸入來自環(huán)境或者臨床樣本或霉菌型培養(yǎng)物的節(jié)分生孢子是一種嚴(yán)重的實驗室危害；預(yù)防措施：對于操作和處理臨床樣本，采用BSL-2級水平的操作技術(shù)和設(shè)施對于實驗性動物，采用ABSL-2級水平對于產(chǎn)孢子性培養(yǎng)物，采用BSL-3級水平的操作莢膜組織胞漿菌實驗室危害：產(chǎn)孢子的霉菌型培養(yǎng)物和取自該病流行區(qū)土壤樣本中的真菌具有感染性；存在于受感染動物的組織或體液中的酵母型真菌，在經(jīng)胃腸道外接種后，也可引起局部感染預(yù)防措施：對于操作和處理臨床樣本，采用BSL-2和ABSL-2級水平的操作技術(shù)和設(shè)施；對于增殖和操作已經(jīng)鑒定為莢膜組織胞漿菌的培養(yǎng)物以及感染性的分生孢子樣本，采用BSL-3級水平的操作第四節(jié)寄生蟲人類血液和組織寄生原蟲實驗室危害：瘧原蟲、錐蟲、利什曼原蟲的實驗室感染都有相關(guān)報道。主要通過攝入、經(jīng)傷口和微小破損侵入、意外接種和中間媒介傳播；操作利什曼原蟲、克氏錐蟲或含有血鞭毛蟲的組織勻漿或血液時，含有這種生物的氣溶膠或飛沫中是潛在的危害；免疫功能抑制的個體避免操作。預(yù)防措施：對于傳染期的工作，采取BSL-2級水平；防止與受感染的中間媒介的接觸；操作含有血鞭毛蟲的組織勻漿或血液，采取基本的防擴散設(shè)施（如生物安全柜）或個人保護設(shè)置（如面罩）有皮膚直接接觸處于傳染期的寄生蟲，戴上手套。人類寄生吸蟲實驗室危害：處于傳染期的血吸蟲（尾蚴）和片形吸蟲（囊蚴），可分別存在于實驗室用于養(yǎng)中間宿主蝸牛的水池和水生植物中，接觸會感染；解剖或壓碎，也可導(dǎo)致皮膚和黏膜暴露在含有尾蚴的飛沫中。預(yù)防措施:實驗室操作，應(yīng)該采取BSL-2水平；直接接觸污染的水或植物，應(yīng)該戴上手套；當(dāng)在可能污染的水源周圍工作時，應(yīng)該穿上長袖或其他保護性工作服.第五節(jié)朊病毒朊病毒是缺乏核酸的蛋白質(zhì)感染顆粒，主要由一種正常的細(xì)胞蛋白的異常異構(gòu)型組成，其蛋白被標(biāo)明為PrPSc；在哺乳類動物中的朊病毒可引起羊瘙癢病以及其他有關(guān)的人類和動物的神經(jīng)變性疾病。朊病毒的生物安全水平：人類的朊病毒以及那些在類人猿和猴子中繁殖的朊病毒要在BSL-2級和BSL-3級水平操作；其他動物的朊病毒需在BSL-2中進行。人類朊病毒是不傳染或不通過接觸傳染的，但是某些情況下具有傳染性：例如：1、新幾內(nèi)亞，食人習(xí)俗引起庫魯病；2、服用被朊病毒污染的生長激素引起醫(yī)療性的CJD；；3、移植被朊病毒污染的硬腦膜。第六節(jié)病毒乙型肝炎最常發(fā)生的實驗室相關(guān)性感染之一，相關(guān)工作的實驗室人員屬于高危人群。實驗室危害：乙肝感染者的血液及其血液制品、尿液、精液、腦脊液及唾液中均可能含有乙型肝炎病毒；實驗中最常見的感染方式是病毒通過注射、黏膜接觸及皮膚傷口進入人體。預(yù)防措施：處理傳染性或可疑的體液和組織標(biāo)本時，實驗設(shè)施及操作應(yīng)符合BSL-2級標(biāo)準(zhǔn)；如果出現(xiàn)病毒的液體飛濺物或氣溶膠時，應(yīng)遵循BSL-3級；研究相關(guān)性感染的靈長類動物，應(yīng)該符合ABSL-2級；推薦實驗室工作人員接種乙肝疫苗。SARS冠狀病毒嚴(yán)重急性呼吸綜合癥（SARS），其傳染途徑主要通過近距離飛沫、接觸患者呼吸道分泌物及密切接觸傳播。人群普遍易感，醫(yī)護人員是此病的高危人群，死亡率約為6.5%。樣品采集：所有樣品采集應(yīng)貼上標(biāo)簽、包括編號和采集日期；臨床資料和接觸史應(yīng)與實驗室檢查結(jié)合，以便更好地了解病毒的釋放和傳播周期。樣品轉(zhuǎn)運：1、標(biāo)本必須經(jīng)過三層包裝2、液體容量不能超過500ml,必須防漏3、固體容量不能超過500g,必須防散落預(yù)防措施：1、血液和尿液樣品、未經(jīng)處理的樣品應(yīng)該在BSL-2以上的實驗室中進行；2、任何有可能產(chǎn)生氣溶膠的過程應(yīng)該在生物安全柜中進行；3、SARS的細(xì)胞培養(yǎng)以及標(biāo)本培養(yǎng)的初步操作應(yīng)該在BSL-3的實驗室中進行；4、SARS標(biāo)本接種動物以獲得病原體，為鑒定假定的SARS病原體的任何動物接種第七章其他安全設(shè)備注射針頭如何消除或減少傷害不要重新給針頭戴護套或截斷枕頭;使用針頭鎖定型注射器以避免枕頭和注射器的分離;使用針頭和注射器為一體的一次性注射器注射液抽液時要盡可能減少形成氣泡避免用注射器來混合感染性液體,避免用力過大豎直向上將注射器中過量的液體和氣泡排到經(jīng)適當(dāng)消毒劑浸濕的脫脂棉或有棉花的小瓶操作感染性物質(zhì)時應(yīng)該再生物安全柜進行在對動物進行接種時要進行固定使用后要進行高壓滅菌并確保進行了妥善處理!!離心機防止氣溶膠噴濺，使用可封閉的容器；每個轉(zhuǎn)子均有運轉(zhuǎn)時間記錄，并應(yīng)制定預(yù)防性維修保養(yǎng)措施以減少發(fā)生機械故障的危險;安裝轉(zhuǎn)子應(yīng)該正確，做到平衡.水浴鍋確保定期清潔和消毒,避免微生物的生長!不用疊氮化鈉作抑菌劑,因為疊氮化鈉與有些金屬形成爆炸性混合物.超聲處理器容易產(chǎn)生氣溶膠，損傷聽力，清潔劑外濺導(dǎo)致化學(xué)傷害。因此要:在密封單元中打開儀器，確保隔離以免受次諧波影響，戴上手套避免清潔劑的傷害。勻漿器在打開勻漿器以前先等候30min以使氣溶膠沉積,冷卻以使氣溶膠凝聚;使用手動研磨器,管外用可吸收材料包裹;使用專門設(shè)計可以避免在轉(zhuǎn)子軸承和O型墊圈處泄漏的儀器型號。干燥器烘箱人離實驗室，烘箱等干燥器必須關(guān)閉，避免溫度過高而發(fā)生火災(zāi)或者爆炸事故。儀器設(shè)備相關(guān)事故的原因分類事故事故原因減少或消除災(zāi)害設(shè)計或建造有缺陷培養(yǎng)箱有電火花、電休克沒有溫度過高斷路裝置沒用提供可靠的接地符合國家標(biāo)準(zhǔn)使用不當(dāng)離心事故轉(zhuǎn)軸上的離心桶沒有平衡培訓(xùn)和監(jiān)督工作人員厭氧培養(yǎng)箱不正確使用氣體不正確配用家用保溫瓶爆炸液氮運輸不當(dāng)使用專門設(shè)計的儀器設(shè)備家用型冰箱爆炸危險性化學(xué)品沒有儲存在防火/防暴容器中低熔點溶劑和提取物僅儲存在具有火花/爆炸保護作用的冰箱或安全柜中缺乏正確的維護火焰光度計產(chǎn)生的火焰維護過程中各組件的重新組裝不正確培訓(xùn)和監(jiān)督工作人員一些實驗室常用的個人防護裝置實驗服、隔離衣、塑料圍裙：防水、罩在日常服裝外，避免污染衣服；不得穿離實驗室區(qū)域，應(yīng)在實驗室所在機構(gòu)進行洗燙工作。護目鏡、安全眼睛和面罩：避免實驗物品飛濺對眼睛和面部造成的危害；實驗室佩戴隱性眼鏡必須戴上護目鏡保護不得戴離實驗室區(qū)域呼吸防護裝置：為了達到理想的防護效果，應(yīng)對呼吸器作個體適合性測試；應(yīng)按照作業(yè)指導(dǎo)書及培訓(xùn)的要求使用不得戴離實驗室區(qū)域手套：進行實驗時，手可能會被污染，而且容易受“銳器”所傷?。∵x擇手套時，應(yīng)符合舒服、合適、靈活、握牢、耐磨、耐扎和耐撕的要求。一般性工作，以及處理感染性物質(zhì)、血液和體液時，廣泛使用一次性乳膠、乙烯樹脂等材料的手術(shù)用手套；尸體解剖等可能接觸尖銳器械的情況下，應(yīng)該戴不繡鋼網(wǎng)孔手套使用過的一次性手套應(yīng)與實驗室的感染性廢棄物一起丟棄，手套不得戴離實驗室區(qū)域?。?！鞋：鞋應(yīng)舒適，鞋底防滑；推薦使用皮制或合成材料的不滲液體的鞋在BSL-3和BSL-4實驗室要求使用專用鞋，如防靜電工作鞋等第八章重組DNA技術(shù)和生物安全下列情況需要較高的生物安全水平：1、來源于病原生物體的DNA序列的表達可能增加GMO的毒性2、插入的DNA序列性質(zhì)不確定，例如在制備病原微生物基因組DNA庫的過程中3、基因產(chǎn)物具有潛在的藥理學(xué)活性4、毒素的基因產(chǎn)物編碼生物表達載體由宿主細(xì)胞和載體組成，必須有效、安全地使用；工程大腸桿菌是非致病菌，不能在健康人和動物的消化道中持久克隆;當(dāng)克隆的DNA來自病原微生物時，特別是克隆編碼毒素一類的蛋白時，需要較高的生物安全說水平。病毒載體可以用于將基因有效地轉(zhuǎn)移到其他細(xì)胞；但是這類病毒載體的貯存液中可能污染了可復(fù)制病毒而存在生物安全。插入基因所直接引起的危害：1、毒素2、細(xì)胞因子3、激素4、基因表達調(diào)節(jié)劑5、毒力因子或增強子6、致瘤基因序列7、抗生素耐藥性8、變態(tài)反應(yīng)原與受體/宿主有關(guān)的危害：1、宿主的易感性2、宿主菌株的致病性，包括毒力、感染性和毒素產(chǎn)物3、宿主范圍的變化4、接受免疫狀況5、暴露后果攜帶外源性遺傳信息的動物（轉(zhuǎn)基因動物）應(yīng)當(dāng)在適合外源性基因產(chǎn)物特性的防護水平下進行操作??！表達了能夠耐受除草劑或抵抗昆蟲能力的轉(zhuǎn)基因植物還飽受爭議；爭議焦點主要是這類植物作為食物的安全性。對于轉(zhuǎn)基因食品，可以通過危害評估確定它們轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品所需的生物安全水平，并進行相關(guān)要求操作。樣品容器：樣品容器可以是玻璃的，但最好使用塑料制品；正確地使用蓋子或塞子蓋好后應(yīng)無泄漏在容器外部不能有殘留物容器上應(yīng)當(dāng)正確地粘貼標(biāo)簽以便于識別樣品的要求或說明書得放防水的袋子里樣品在設(shè)施內(nèi)的傳遞為了避免意外泄露或溢出,應(yīng)將容器固定在架子上使其直立;或者將其放置于盒子等二級容器;如果是密封的最好有個墊圈,定期的清除架子或者是二級容器的污染樣品接收:需要接收大量樣品的實驗室應(yīng)當(dāng)安排專門的房間