金銀花-連翹藥對配伍前后及配伍比例對藥動學行為的影響

金銀花-連翹藥對配伍前后及配伍比例對藥動學行為的影響

金銀花和連翹是清熱解毒的首選。第一種藥物是簡要的祛瘀藥，第二種藥物是滲透病原體。這兩種藥物配合使用，具有解表、清熱解毒的功效。金銀花-連翹為臨床上常用藥對,在121種中成藥處方中含有該藥對,金銀花與連翹的常用配伍比為1∶1,1∶2。金銀花、連翹配伍具有明顯的協(xié)同增效作用,研究報道金銀花-連翹(1∶1)配伍的解熱、抗炎作用優(yōu)于配比1∶2,而藥效往往與化學成分組成及含量呈相關(guān)性。綠原酸、連翹苷、連翹酯苷A為金銀花-連翹藥對中主要化學成分,故本實驗考察金銀花-連翹配伍前后、配伍比例對綠原酸、連翹苷、連翹酯苷A溶出的影響,同時比較不同配伍比例對綠原酸在大鼠體內(nèi)藥代動力學行為的影響。1藥物、試劑和儀器Agilent1100系列高效液相色譜儀(美國Agilent公司),HC-2066型離心機(安徽中科中佳),WH-3微型漩渦混合儀(上海滬西分析儀器廠有限公司)。金銀花、連翹(均購自河南新密仁厚國仁館,經(jīng)作者林以寧鑒定,分別為忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾或帶初開的花,木犀科植物連翹Forsythiasuspense(Thunb.)Vahl的干燥果實),綠原酸對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號110753-200413,純度>99%),連翹苷、連翹酯苷A對照品(上海融禾醫(yī)藥科技有限公司,批號分別為101022,101107),原兒茶醛對照品(阿達瑪斯試劑有限公司,純度99%),甲醇、乙腈為色譜純,其他試劑均為分析純。健康SD大鼠,清潔級,雄性,體重200～250g,購自南京市江寧區(qū)青龍山動物繁殖廠,許可證編號SCXK(浙)2008-0033。2方法和結(jié)果2.1提取、制備2.1.1金銀花-連翹提取物1.1取金銀花粉末、連翹粉末各50g,加10倍量水溫浸30min,煎煮2次,每次1.5h,合并煎液,濾過,濃縮,冷凍干燥,即得。2.1.2金銀花-連翹提取物1.2稱取金銀花粉末25g,連翹粉末50g,按2.1.1項下方法制備,即得。2.1.3金銀花、連翹提取物分別稱取金銀花、連翹粉末各50g,分別按2.1.1項下方法制備,即得。2.2有效樣品含量的測量2.2.1加樣回收、測定分別取綠原酸、連翹苷、連翹脂苷A對照品適量,精密稱定,置棕色量瓶中,加50%甲醇制成3種成分質(zhì)量濃度均為0.5g·L-1的溶液,即得。2.2.2供試品溶液的制備分別取金銀花、連翹、金銀花-連翹(1∶1)、金銀花-連翹(1∶2)提取物各0.20g,精密稱定,置于25mL量瓶中,加50%甲醇25mL超聲使溶解,定容至刻度,經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過,適度稀釋,即得金銀花、連翹、金銀花-連翹(1∶1)、金銀花-連翹(1∶2)供試品溶液。2.2.3檢測波長和溫度HederaC18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm,江蘇漢邦科技有限公司),流動相甲醇(A)-0.01%磷酸(B)梯度洗脫(0～30min,22%～35%A;30～40min,35%～45%A;40～50min,45%～70%A;50～60min,70%A),流速1.0mL·min-1,檢測波長280nm,柱溫35℃,進樣量20μL,見圖1。HederaC18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm,江蘇漢邦科技有限公司),流動相乙腈-0.01%磷酸(18∶82),流速1.0mL·min-1,檢測波長330nm,柱溫30℃,進樣量20μL,見圖2。2.2.4不同配比金銀花-麻黃共味劑對酯苷a含量測定的影響分別測定各供試品溶液中綠原酸、連翹苷、連翹酯苷A含量,有效成分的溶出量分別按金銀花、連翹藥材投藥50g的煎出量表示。結(jié)果表明金銀花、連翹單煎液不影響連翹苷、綠原酸的含量測定,金銀花單煎液不影響連翹酯苷A含量的測定。綠原酸在金銀花-連翹(1∶1,1∶2)共煎液中溶出量分別是單煎液(787.57mg)的1.42,1.62倍,隨連翹配伍比例增加,綠原酸煎出量呈增加趨勢。連翹苷在金銀花-連翹(1∶1,1∶2)共煎液中溶出量分別是單煎液(29.27mg)的1.54,1.35倍,隨金銀花配伍比重增加,連翹苷溶出增加。但連翹脂苷A的溶出量隨金銀花配伍比例增加而降低,在金銀花-連翹(1∶1,1∶2)共煎液中的溶出量分別是單煎液(453.21mg)的0.63,0.80倍。2.3大鼠體內(nèi)藥物的動態(tài)分析2.3.1不同給藥劑量的血清學檢測大鼠隨機分為2組,每組6只,試驗前禁食12h,可自由飲水。分別灌胃給予金銀花-連翹(1∶1,1∶2)提取物溶液,給藥劑量按綠原酸計均為60mg·kg-1,分別于給藥后0,0.25,0.5,0.75,1,1.5,2,3,4,6,9,12h經(jīng)眼眶后靜脈叢取血,于肝素化試管中,3500r·min-1離心5min,于-20℃冰箱保存待測。2.3.2hplc分析取血漿100μL,加20mg·L-1原兒茶醛內(nèi)標溶液20μL,渦旋30s混勻,加1%甲酸乙腈溶液400μL,渦旋1min混勻,3500r·min-1離心5min,取上清液至另一潔凈試管中,揮干溶劑,殘渣用100μL流動相溶解,渦旋混合1min,12000r·min-1離心10min,取上清液進行HPLC分析。2.3.3in-1檢測條件流動相乙腈-0.2%磷酸(15∶85),流速1.0mL·min-1,檢測波長324nm,柱溫35℃,進樣量30μL。綠原酸在0.0625～5.0mg·L-1線性關(guān)系良好(r=0.9998),最低定量限0.0625mg·L-1。2.3.4藥動學參數(shù)t檢驗分別計算給藥組大鼠在不同時間點的綠原酸平均血藥濃度,繪制平均血藥濃度-時間曲線,采用DAS2.1.1軟件、非房室模型對血藥濃度-時間數(shù)據(jù)進行處理,求出主要藥動學參數(shù),其中Cmax和Tmax為實測值,對主要藥動學參數(shù)進行t檢驗統(tǒng)計分析。金銀花-連翹(1∶1)與金銀花-連翹(1∶2)提取物的綠原酸藥動學參數(shù)、平均血藥濃度-時間曲線分別見表1和圖3,結(jié)果表明金銀花-連翹(1∶1)給藥組的藥動學參數(shù)與1∶2給藥組無顯著差異,說明在同等給藥劑量下,金銀花-連翹不同配比的共煎液灌胃給予大鼠后,綠原酸在大鼠體內(nèi)的藥動學參數(shù)無顯著性差異。3藥動學和藥效學金銀花、連翹為相須藥對,金銀花與連翹配伍較單味用藥效果好,兩藥配伍后綠原酸和連翹苷的煎出量均有提高,且金銀花-連翹不同配伍比例對綠原酸藥動學的影響未見差異。前期試驗發(fā)現(xiàn)綠原酸AUC與給藥劑量呈正相關(guān),本試驗中金銀花-連翹共煎液中綠原酸的煎出量高于金銀花,推測配伍后由于提高了綠原酸的煎出量,故相應(yīng)提高了綠原