SAMPLE PREPARATION TECHNOLOGY全文-大學課件-在線文檔

樣品前處理技術CCITI2一、概述樣品狀況：成分復雜、組分濃度遠小于樣品成分濃度樣品處理目的：將待測組分從樣品中分離，達到儀器能檢測的狀態(tài)樣品處理原理：F1

—

F2

=

ΔF（A）

（A）

（A）F1

—

F2

=

ΔF（B）

（B）

（B）樣品前處理技術CCITI4一、概述ΔF

=

ΔF（A）/ΔF（B）影響ΔF的因素主要是組分的物理化學性質（分子性質、離子特征、分子大小和空間位阻等）以及所采用的樣品處

理方法。一般需要多個方法組合才能達到目的。樣品轉移方法：L-L萃取，L-S萃取L-S法包括經典萃取方法和固相萃取方法（SPE）樣品前處理技術CCITI5一、概述樣品處理研究狀況：理論不完整，許多情況是經驗和零星理論或局部理論的結合。樣品處理方法之間的關系：互相聯(lián)系、共同組成一個分析方法的整體。樣品處理的工作量：占整個分析工作的70%或更多。樣品前處理技術CCITI6二、樣品采集、制備和儲存樣品的代表性：根據不同把組織、采取足夠的量進行縮分，并且一般對一批產品多個體采樣后混合；包裝材料：塑料或玻璃，要求對組分不產生吸附，不發(fā)生化學反應。其他處理過程：勻化、縮分、過篩、離心、過濾、防腐、抑制降解。不同的樣品具有不同的要求。樣品前處理技術CCITI7三、樣品提取提?。╡xtraction）是采用物理的或化學的手段破壞待測組分與樣品成分間的結合力，將待測組分從樣品中釋放出來并轉移到易于分析的溶液狀態(tài)。空穴（溶劑穴）理論（cavities）W=W22

+W11

+W12W，溶質從樣品基質解離進入溶劑穴形成溶液所需的能量；W22

,溶質從基質解離所需能量；W11

,溶液中產生空穴所需能量；W22

,溶質與溶劑分子相互作用所釋放的能量。樣品前處理技術CCITI8三、樣品提取提取溶劑：極性：官能團:

-COOH

>

Ar-OH

>

-OH

>

-NHCOR

>-NH2

>

-SH

>

-CHO

>

-CO-

>

-COOR

>

-N

(CH3)2

>-NO2

>

-X

>

-OR

>

-CH=CH

>

CH2化合物:

醇>酮>

酚>芳香胺>酯，不完全鹵代烴>醚>不飽和烴>全鹵代烴>飽和烴樣品前處理技術CCITI9三、樣品提取提取溶劑選擇原則：“相似相溶”原理具體要求:

對組分溶解度大，對干擾雜質溶解度小，與樣品基質相容性好（能有效釋放藥物，具有脫蛋白和脂肪的能力）沸點適中，粘度小，毒性低，價廉等常用溶劑:

水、甲醇、丙酮、乙腈、正己烷、氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醚等樣品前處理技術三、樣品提取CCITI10組分轉移的影響因素：G=DF（ΔC/ΔX）t其中，G為擴散的物質的量，D為組分擴散系數，F(xiàn)為接觸面積，ΔC為兩相界面的濃度差，ΔX為擴散距離，t為擴散時間多次提取原理：Xn

=

[

KW/(KW

+

L)n

X0其中，K為固體樣品待測物A的擴散系數，X0為固體樣品中原有A的絕對量，Xn為用等體積溶劑提取n次后固體樣品中剩余A的絕對量，W為固體樣品的體積，L為每次提取所用溶劑體積樣品前處理技術CCITI11三、樣品提取超聲波輔助提取(sonication-assisted

extraction,SAE)1967年由Johnson提出空化作用使分子運動加快，提供能量加快溶解和脫附一般為密閉容器操作中，將容器放入超聲水浴，數秒后拿出，再放入，如此反復數次即可特點是時間短，效率高，可自動化，但耗費溶劑多樣品前處理技術CCITI12三、樣品提取超臨界流體萃取(supercritical

fluid

extraction,SFE):19世紀已經有技術，20世紀80年代開始用于分析根據溶劑具有的超臨界流體性質進行萃取（二氧化碳、氨、甲烷、水等）需要特殊儀器特點是速度快，效率高，選擇性強，易于凈化樣品前處理技術CCITI13三、樣品提取強化溶劑萃取(accelerated-solvent

extraction,ASE):由SFE衍生，采用高溫（50-200）高壓溶劑作流體高溫可以提高溶劑溶解能力，減弱組分與基質的結合，降低溶劑粘度，高壓可提高擴散系數和傳質速度需要特殊儀器，有11、22、33

mL三種規(guī)格樣品管特點是速度快，效率高，節(jié)省溶劑，易于自動化樣品前處理技術CCITI14三、樣品提取微波輔助萃取(microwave-assisted

extraction,MAE):1986年由Ganzler首次報道高溫可以提高溶劑溶解能力，減弱組分與基質的結合，降低溶劑粘度，高壓可提高擴散系數和傳質速度需要特殊儀器，有11、22、33

mL三種規(guī)格樣品管特點是速度快，效率高，節(jié)省溶劑，易于自動化四、樣品凈化CCITI15L-L分配原理：化學平衡下的分配定律提取效率：根據分配系數可以計算等體積或不等體積的效率影響因素：溶劑的“相似相容”原理、少量多次原則；pH對具有一定酸堿性的化合物的分配系數的調節(jié)；離子對試劑的作用鹽的作用四、樣品凈化CCITI16固相萃取特點：淋洗操作與凈化機制與傳統(tǒng)色譜無本質差異預先制備好與HPLC固定相相似，分離效率高，處理樣品比容量大批量生產，重復性好固定相量少，節(jié)省時間和溶劑易于自動化四、樣品凈化CCITI17凝膠色譜GPC原理：根據分子直徑大小或分子量的大小進行分離固定相 三維網狀多孔結構，不帶電荷大分子量分子隨流動相沿凝膠顆粒間的空隙移動，遷移路徑短，先流出色譜柱小分子量分子可擴散進入凝膠顆粒內部遷移路徑長，后流出色譜柱達到分離和凈化的目的商品：Sephadex LH-20特點：可分離大分子和脂肪，自動化程度強四、樣品凈化CCITI18免疫親和色譜原理：根據抗體對某種或某類化合物的選擇性吸附能力，達到對該種或類化合物的富集和凈化的目的固定相：惰性基質上連接特定的抗體特點：選擇性強，凈化效果好，固定相制備難度大，價格相對昂貴商品：多種針對各種藥物的固定相或吸附劑四、樣品凈化CCITI19分子印記技術原理：利用待測物作為模板分子，采用高分子合成手段，制備具有選擇性吸附待測物的功能

高分子材料（塑料抗體），作為固定相進行樣品的凈化。固定相：具有免疫吸附材料的高選擇性和常規(guī)材料理化穩(wěn)定性的固定相特點：選擇性強，重復性好，固定相可大規(guī)模生產商品：多種針對各種藥物的固定相或吸附劑目的提高檢測靈敏度改善色譜分離提高物理化學穩(wěn)定性輔助分離結構近似化合物輔助定性20五、氣相色譜分析衍生化-OH

+

TMS-O-Si(CH3)3-SH

+

TMS-S-Si(CH3)3-COOH

+

TMS-COO-Si(CH3)3-NH2

+

TMS-N-[Si(CH3)3]2,

NH-Si(CH3)3=NH

+

TMS=N-Si(CH3)3硅烷化21五、氣相色譜分析衍生化?；疪NCOR’22ROCOR’RNH2

+

O(CO-R’)2ROH

+