畜禽大腸桿菌對七種常見抗菌藥的敏感性試驗

畜禽大腸桿菌對七種常見抗菌藥的敏感性試驗2023屆動醫(yī)專升本2班董衛(wèi)超論文提要

一、前言二、材料與方法三、結(jié)果四、討論一、前言近期隨著畜禽養(yǎng)殖業(yè)的快速開展，大腸桿菌病已成為危害養(yǎng)殖業(yè)的主要傳染病之一。近年來，由于長期大量抗菌藥物的濫用，造成大腸桿菌耐藥菌株不斷產(chǎn)生，尤其是獸醫(yī)臨床已出現(xiàn)多重耐藥性、超強(qiáng)耐藥的大腸桿菌，即同時對獸醫(yī)臨床常用抗菌藥物：氨基糖苷類、四環(huán)素類、氯霉素類和氟喹諾酮類等產(chǎn)生耐藥性，導(dǎo)致常規(guī)藥物的藥效降低甚至消失，臨床可供選擇藥物的余地越來越少，大腸桿菌病的防治難度日益增加，給養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的損失鑒于畜禽大腸桿菌耐藥性的普遍產(chǎn)生，為了更好的指導(dǎo)臨床用藥及減少耐藥菌株產(chǎn)生，故此，對河南局部地區(qū)的畜禽大桿菌進(jìn)行簡單藥敏分析。二、材料與方法病料：采自河南省內(nèi)的養(yǎng)殖場。培養(yǎng)基：血平板培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯、麥糠凱瓊脂、大腸桿菌顯色培養(yǎng)基等?？咕幬锩Q：阿米卡星、強(qiáng)力霉素、氟苯尼考、恩諾沙星、克林沙星、加替沙星、SMM/TMP(5:1)。儀器：潔凈工作臺、LRH-250-Ⅱ微電腦控制生化培養(yǎng)箱、96孔V型反響板、BS224S型電子天平等。細(xì)菌的別離培養(yǎng)與保存

內(nèi)臟病死動物血平板劃線37℃培養(yǎng)24h接種入新鮮肉湯37℃培養(yǎng)24h肉湯培養(yǎng)基麥康凱劃線培養(yǎng)4℃保存?zhèn)溆锰羧蝹€菌落接種肉湯培養(yǎng)24h疑似大腸桿菌菌液

藥液的配制用電子天平稱取適量的各種藥物無菌配制成濃度為1280μg/mL的藥液5mL。

恩諾沙星

氟苯尼考

克林沙星少許NaOH+無菌蒸餾水少許NaOH+無菌蒸餾水N,N-二甲基甲酰胺+少許乙醇恩諾沙星藥液氟苯尼考藥液克林沙星藥液菌液的配制

吸取5μL保存菌液接種于5mL新鮮肉湯中37℃過夜培養(yǎng)充分混勻，進(jìn)行萬倍稀釋至105CFU/mL

吸取2μL菌液于平皿中同20mL新鮮肉湯最小抑菌濃度的測定第12列中，前4孔為陰性對照，后4孔為陽性對照。123456711812910ABCDEFGH第1列：參加各藥液60μL。從后向前每孔依次參加60μL菌液至第一孔。保鮮膜覆蓋后標(biāo)記菌株，然后置37℃培養(yǎng)18~24h后，觀察結(jié)果。與第一孔藥液吹打混勻后，吸取60μL混合液至第二孔，吹打混勻，以此倍比稀釋至第11孔。微量肉湯稀釋法三、結(jié)果1細(xì)菌的鑒定觀察結(jié)果2畜禽大腸桿菌對不同藥物的MIC值3、畜禽大腸桿菌對各組藥物的耐藥率4、多重耐藥譜統(tǒng)計1細(xì)菌的鑒定觀察結(jié)果觀察所別離的細(xì)菌生長情況，在麥康凱培養(yǎng)基上成桃紅色、扁平、圓形、隆起、光滑、濕潤的菌落，為疑似大腸桿菌。另外在麥康凱培養(yǎng)基上還培養(yǎng)出桃紅色和黃白色透明狀兩種菌落，將這兩種菌落分別接種于大腸桿菌鑒別培養(yǎng)基上做鑒別培養(yǎng)，結(jié)果顯示：在麥康凱培養(yǎng)基上顯示桃紅色的菌落經(jīng)大腸桿菌顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)呈藍(lán)綠色的，可鑒定為大腸桿菌，而在麥康凱培養(yǎng)基上顯示黃白色透明狀的菌落，在大腸桿菌顯色培養(yǎng)基上顯示無色，所以可能是其他菌種。將確定為大腸桿菌的4℃保存?zhèn)溆?，進(jìn)入本試驗。

2、不同藥物對大腸桿菌的MIC值細(xì)菌氟苯尼考多西環(huán)素阿米卡星SMM/TMP(5/1)恩諾沙星加替沙星克林沙星1320160<0.6251604051.252>640160<0.625>6406401053>640160<0.625>640160102.510640160<0.625>64040102.512640160<0.625>6402051.2514640160<0.625>64064052.519160201080102.51.2521640160320>64080101.252264016080>640202.51.252458020801051.25273206401.2564040402.52864080<0.625>6406402010296401601.25>640801053016080<0.625>6402051.2531640801.25>640640202.53364080640>640640202.53464016020>640320102.53、畜禽大腸桿菌對各組藥物的耐藥率MIC值測得結(jié)果1藥物耐藥濃度(μg/mL)耐藥株數(shù)MIC范圍(μg/mL)MIC50(μg/mL)MIC90(μg/mL)耐藥率(%)多西環(huán)素≥161720~640160160100恩諾沙星≥41710~64080640100氟苯尼考≥8165~>640640>64094.1SMM/TMP≥5121480~>640>640>64082.4加替沙星≥8102.5~40102058.8阿米卡星≥643<0.625~6401.2532017.6克林沙星≥811.25~102.555.94、多重耐藥譜統(tǒng)計四、討論1受試菌株對多西環(huán)素、氟苯尼考藥物的耐藥性情況及分析。2受試菌株對喹諾酮類抗菌藥耐藥性的差異。3阿米卡星對不同種屬受試菌株MIC的差異。阿米卡星MIC比照4多重耐藥性及標(biāo)準(zhǔn)用藥。1受試菌株對多西環(huán)素、氟苯尼考藥物的耐藥性情況及分析討論

受試菌株對四環(huán)素類的多西環(huán)素、氯霉素類的氟苯尼考藥物耐藥性較強(qiáng)，耐藥率分別為100%、94.1%。分析其原因可能是由于四環(huán)素類藥物作為保健藥物長期拌料使用而引起的交叉耐藥性，如：土霉素等；氟苯尼考自作為動物專用抗菌藥物以來被長期大量濫而使細(xì)菌對其敏感性逐步降低以致產(chǎn)生大面積耐藥菌株的產(chǎn)生。據(jù)有關(guān)資料稱大多抗菌藥物如β-內(nèi)酰胺類、氯霉素、磷霉素、氨基糖苷類藥物均主要通過大腸桿菌外膜蛋白(OmpF和OmpC，主要是OmpF)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮抗菌作用的，推測對這類抗菌藥物的耐藥機(jī)制可能與大腸桿菌外膜蛋白的變化有關(guān)。畜禽大腸桿菌對各組藥物的耐藥率2受試菌株對喹諾酮類抗菌藥耐藥性的差異

克林沙星、加替沙星、恩諾沙星的耐藥性分別為5.9%、58.8%和100%?？梢姡茉嚧竽c桿菌對同一類藥物的不同種抗生素的耐藥率差異較大。原因可能由于恩諾沙星長期用作動物專用藥物被大量濫用所引起，而克林沙星及加替沙星較少使用。由此推測，耐藥性的產(chǎn)生可能與此種藥物的使用時間及頻率成正相關(guān)。

畜禽大腸桿菌對各組藥物的耐藥率3阿米卡星對不同種屬受試菌株MIC的差異分析表中阿米卡星的MIC值，得知豬源大腸桿菌的MIC值整體較小，其中有10株豬源大腸桿菌的MIC值不大于1.25μg/mL，禽源大腸桿菌對阿米卡星的MIC值整體明顯高于豬源大腸桿菌的MIC值〔除個別的33、34號菌株較高外〕。豬源大腸桿菌對阿米卡星的耐藥率為8.3%，而且對66.7%的豬源大腸桿菌MIC值均<0.625μg/mL，而阿米卡星對禽源大腸桿菌那么不及豬源大腸桿菌敏感。究其原因，可能是由于可能是由于菌源種屬差異及阿米卡星在禽源大腸桿菌病和豬源大腸桿菌病的使用率不同有關(guān)。對于33、34號菌株的個別現(xiàn)象，推測原因，可能是由于曾經(jīng)屢次使用過阿米卡星防治疾病所致。阿米卡星對不同細(xì)菌MIC值比照

4多重耐藥性及標(biāo)準(zhǔn)用藥受試菌株幾乎均存在多重耐藥性這一顯現(xiàn)。其中常見的耐藥組合為：氟苯尼考+多西環(huán)素+SMM/TMP+恩諾沙星，在17株受試菌中占82.35%。由于，動物專屬藥物的長期使用及交叉耐藥性的產(chǎn)生，致使多重耐藥性的產(chǎn)生。也就是說我們臨床聯(lián)合用藥時，這些配伍已經(jīng)對大腸桿菌效果大大減退，因此要盡量選擇其他的組合進(jìn)行聯(lián)合用藥。應(yīng)該標(biāo)準(zhǔn)合理使用抗菌藥物，對養(yǎng)殖場別離細(xì)菌進(jìn)行藥敏試驗，加強(qiáng)耐藥性的流行病學(xué)調(diào)查，采用合理的聯(lián)合用藥、交叉用藥、輪換用藥的方式增加藥物的使用壽命方能取得良好的效果；開發(fā)有效的抑制劑等增效劑，與抗菌藥物聯(lián)合使用提高藥物的敏感性,降低使用劑量，減少耐藥性的產(chǎn)生。多重耐藥譜統(tǒng)計參考文獻(xiàn)[1]Paterson,D.L,L.Mulazimoglu,J.M.Casellas,etal.Epidemiologyofciprofloxacinresistanceanditsrelationshiptoextended-spectrumβ-lactamaseproductioninKlebsiellapneumoniaeisolatescausingbacteremia.Clin.Infect.Dis,2000,30:473~478.[2]陳杖榴主編.獸醫(yī)藥理學(xué)(第三版)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2023,200~210.[3]江明性主編.新編實用藥物學(xué)(第2版)[M].北京:科學(xué)出版社,2005,656~665.[4]馬興樹編著.禽傳染病實驗診斷技術(shù)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005,49~54.[5]伍參榮.病原生物學(xué)(第1版)[M].北京:中國中醫(yī)藥出版社,2007,20~27.[6]MichaelT.MadiganJohnM.MartinkoPaulDunlapDavidP.ClarkThomasD.Brock.BrockBiologyofMicroorganisms[M].PearsonEducation,2023,152.[7]沈富林，王蓓，黃士新.獸藥分析與檢測技術(shù)[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,2023,162.參考文獻(xiàn)[9](美)希契納主編,胡祥璧譯.禽病原體的別離與鑒定[M].天津科學(xué)技術(shù)出版社,1987,1~14.[10]蔡寶祥.家畜傳染病學(xué)(第4版)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2001,46.[11](美)B.W.卡爾尼克主編,高福,劉文軍主譯.禽病學(xué)(第9版)[M].北京:北京農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,1991,126~132.[12]EwersC,JanssenT,WielerLH.AvianpathoqenicEscherichiacoli(APEC).BerlMunchTierarztlWochenschr,2003,116(9-10):381~395.[13]NikaidoH.Preventionofdrugaccesstobacterialtargets:permeabilitybarriersandactiveeff-lux[J].Science,1994,264:382~388.[14]張宇.喹諾酮類抗菌藥的研究進(jìn)展[J].中國新藥雜志,2006,15(16):1345~1348.[15]杜向黨,張素梅,李新生,等.致病性大腸桿菌對頭孢噻呋和氟喹諾酮類藥物的敏感性[J].中國獸醫(yī)志,2007,43(8):73.[16]嵇小琴,呂鶯,李磊.細(xì)菌耐藥機(jī)制研究進(jìn)展[A].世界感染雜志,2007,7(6):511~514.參考文獻(xiàn)[17]陸承平.獸醫(yī)微生物學(xué)(第三版)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2001,215~222.[18]BantarC,VescoE,HeftC,etal.Replacementofbroad-spectrumCephalosporinsbypiperac