高效液相色譜法中文

高效液相色譜法中文第十八章高效液相色譜法（highperformanceliquidchromatography;HPLC）18.1

概論一、定義以液體為流動(dòng)相的色譜法稱之為液相色譜法第2頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

采用普通規(guī)格的固定相及流動(dòng)相，常壓輸送的液相色譜法為經(jīng)典液相色譜法。以經(jīng)典液相色譜法為基礎(chǔ)，引入了氣相色譜的理論與實(shí)驗(yàn)方法，流動(dòng)相改為高壓輸送，采用高效固定相及在線檢測(cè)手段，發(fā)展而成的分離分析方法叫高效液相色譜法。該法具有分離效能高，分析速度快及儀器化等特點(diǎn)，因此稱之為高效液相色譜法。第3頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天HPLC①能制成溶液的樣品②80％的有機(jī)化合物③分子量大的高分子化合物及離子型都能測(cè)定二、高效液相色譜法與氣相色譜法應(yīng)用范圍對(duì)比GC①能汽化的樣品②20％的有機(jī)化合物③揮發(fā)性差和熱不穩(wěn)定的樣品不能測(cè)第4頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法區(qū)別第5頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、HPLC的主要類型18.2高效液相色譜法的主要類型與原理第6頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

以化學(xué)鍵合相為固定相的色譜法稱之為化學(xué)鍵合相色譜法，簡(jiǎn)稱鍵合相色譜法。（bondedphasechromatography，BPC）

二、化學(xué)鍵合相色譜法第7頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

根據(jù)化學(xué)鍵合相與流動(dòng)相極性的相對(duì)強(qiáng)弱，鍵合相色譜法可分為正相(normalphase;NP)和反相(reversedphase;RP)鍵合相色譜法。第8頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天（一）正相鍵合相色譜法

固定相的極性大于流動(dòng)相的極性。

固定相－氨丙基、氰丙基

流動(dòng)相－以正己烷為底劑，加入極性調(diào)節(jié)劑。第9頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

氰基鍵合相：

其分離選擇性與硅膠相似，但極性小于硅膠，所以，流動(dòng)相和其他色譜條件都相同的條件下，同一組分的保留時(shí)間將小于硅膠。許多用硅膠柱分離的課題，可用氰基鍵合相柱完成。

第10頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

氨基鍵合相:與硅膠的性質(zhì)有較大差異，前者為堿性，后者為酸性。在做正相洗脫時(shí)，表現(xiàn)出不同的選擇性。氨基鍵合相色譜柱是分析糖類最主要的色譜柱，也稱為碳水化合物柱。

第11頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天1.分離機(jī)制主要是范德華作用力，誘導(dǎo)作用力或氫鍵作用力。例如：用氨基鍵合相分離極性化合物（如糖類）時(shí)，主要根據(jù)被分離組分分子與鍵合相的氫鍵作用力的強(qiáng)弱差別而分離的。第12頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天2.流動(dòng)相的極性與保留因子的關(guān)系極性強(qiáng)的組分的保留因子k大，后洗脫出柱。流動(dòng)相的極性增強(qiáng)，洗脫能力增加，使組分k減小，tR

減?。环粗?，k增大，tR增大。第13頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

固定相——十八烷基硅烷（C18）、辛烷基（C8）等化學(xué)鍵合相，有時(shí)也用弱極性或中等極性的鍵合相為固定相。流動(dòng)相——以水作為基礎(chǔ)溶劑再加入一定量與水混溶的極性調(diào)整劑，常用甲醇－水、乙腈－水等。（一）反相鍵合相色譜法固定相的極性比流動(dòng)相的極性弱。第14頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天2.流動(dòng)相的極性與保留因子的關(guān)系極性強(qiáng)的組分的保留因子k小，先洗脫出柱。流動(dòng)相的極性增強(qiáng)，洗脫能力減弱，使組分k增大，tR

增大；反之，k減小，tR減小。第15頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天（三）離子對(duì)色譜法（pairedionchromatography,PIC或ionpairchromatography,IPC）正相離子對(duì)色譜法和反相離子對(duì)色譜法第16頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天反相離子對(duì)色譜法(RP-ionpairchromatography)

是把離子對(duì)試劑加入到含水流動(dòng)相中，被分析的組分離子在流動(dòng)相中與離子對(duì)試劑的反離子（或稱對(duì)離子，counterion）生成不荷電的中性離子對(duì)，從而增加溶質(zhì)與非極性固定相的作用，使分配系數(shù)增加，改善分離效果。用于分離可離子化或離子型的化合物。第17頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天1.分離機(jī)制以RPIC分離堿類物質(zhì)為例，用離子對(duì)模式說明分離機(jī)制。

第18頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

RPIC的出柱順序與RHPLC一致。

RPIC是在藥物分析中應(yīng)用很廣，如生物堿、有機(jī)酸、磺胺類藥物，某些抗生素和維生素等。第19頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天（四）離子抑制色譜法（ionsuppressionchromatography,ISC）在反相色譜法中，通過調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值，抑制樣品組分的解離，增加它在固定相中的溶解度，以達(dá)到分離有機(jī)弱酸、弱堿的目的，這種技術(shù)稱為離子抑制色譜法。第20頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天1.適用范圍

3.0≤pKa≤7.0的弱酸

7.0≤pKa≤8.0的弱堿2.影響保留因子的因素除與反相色譜法有相同的影響因素外，主要還受流動(dòng)相的pH值的影響。第21頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

對(duì)于弱酸，當(dāng)流動(dòng)相的pH＜pKa時(shí)，組分以分子形式為主，k值增大，tR增大；

pH＞pKa，組分以離子形式為主，k值變小，tR減小

對(duì)于弱堿，情況相反第22頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、化學(xué)鍵合相色譜法的固定相

按照所鍵合基團(tuán)的極性可將其分為非極性﹑弱極性和極性三類。

（一）鍵合相的種類

18.2HPLC的固定相流動(dòng)相及其選擇第23頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天1．非極性鍵合相如十八烷基（C18）﹑辛烷基（C8）﹑甲基（C1）與苯基等。十八烷基硅烷(octadecylsilane，ODS或C18)鍵合相是最常用的非極性鍵合相。它是由十八烷基硅烷試劑與硅膠表面的硅醇基經(jīng)多步反應(yīng)生成的鍵合相。非極性鍵合相通常用于反相色譜。第24頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

非極性鍵和相的烷基鏈長(zhǎng)對(duì)溶質(zhì)的保留、選擇性和載樣量都有影響。長(zhǎng)鏈烷基可使溶質(zhì)的k增大，分離選擇性改善，使載樣量增加，長(zhǎng)鏈烷基鍵合相的穩(wěn)定性好。短鏈非極性鍵和相的分離速度較快，對(duì)于極性化合物可得到對(duì)稱性較好的色譜峰。第25頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

2．弱極性鍵合固定相

常見的有醚基和二羥基鍵合相。這種鍵合相可作為正相或反相色譜的固定相，視流動(dòng)相的極性而定。這類固定相應(yīng)用較少。第26頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

3．極性鍵合相常用氨基﹑氰基鍵合相，是分別將氨丙硅烷基（≡Si(CH2)3NH2）及氰乙硅烷基(≡Si(CH2)2CN)鍵合在硅膠上制成。它們一般都用作正相色譜的固定相，但有時(shí)也用于反相色譜。第27頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、化學(xué)鍵合相色譜法的流動(dòng)相HPLC對(duì)流動(dòng)相的基本要求：①化學(xué)穩(wěn)定性好，不與固定相發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。②對(duì)試樣有適宜的溶解度。要求使k在1~10范圍內(nèi)，最好在2~5的范圍內(nèi)。③必須與檢測(cè)器相適應(yīng)。例如用紫外檢測(cè)器時(shí)，只能選用截止波長(zhǎng)小于檢測(cè)波長(zhǎng)的溶劑。④純度要高，黏度要小。低黏度流動(dòng)相如甲醇﹑乙睛等可以降低柱壓，提高柱效。第28頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

截止波長(zhǎng):用1cm光徑的吸收池裝溶劑，用空氣為參比，改變照射波長(zhǎng)，當(dāng)吸光度A＝1

時(shí)，此時(shí)的波長(zhǎng)稱為該溶劑的截止波長(zhǎng)。如：水190nm，甲醇205nm，乙腈190nm第29頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天(二)流動(dòng)相對(duì)分離的影響n由固定相及色譜柱填充質(zhì)量決定，α主要受溶劑種類的影響，k受溶劑配比的影響。第30頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

因?yàn)椴煌N類的溶劑，分子間的作用力不同，有可能使被分離的兩個(gè)組分的分配系數(shù)不等，即α≠1。改變流動(dòng)相中各種溶劑的配比，能改變其洗脫能力，組分的k也改變。在正相色譜法中，增加流動(dòng)相中強(qiáng)溶劑的比例，其洗脫能力增強(qiáng)，使k變小。第31頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

流動(dòng)相的極性可用Snyder提出的溶劑極性參數(shù)P′來表示。

Snyder選擇了三種參考物質(zhì)，乙醇（質(zhì)子給予體），二氧六環(huán)（質(zhì)子受體）和硝基甲烷（強(qiáng)偶極體）用來檢驗(yàn)溶劑的質(zhì)子接受能力（Xe），給予質(zhì)子能力（Xd）和偶極作用力（Xn）。（三）溶劑的強(qiáng)度和選擇性1．溶劑的極性和強(qiáng)度

第32頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

Snyder提出的溶劑極性參數(shù)是根據(jù)羅胥那德（Rohrschneider）的溶解度數(shù)據(jù)推導(dǎo)出來的，將羅氏提供的極性分配系數(shù)()以對(duì)數(shù)的形式表示。純?nèi)軇┑臉O性參數(shù)(P')定義為：

P'值越大，則溶劑的極性越大，在正相色譜中的洗脫能力越強(qiáng)。第33頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天表20-1

常用溶劑的極性參數(shù)P'和選擇性參數(shù)溶劑P'XeXdXn溶劑P'XeXdXn正戊烷0.0———乙醇4.30.520.190.29正己烷0.1———醋酸乙酯4.40.340.230.43苯2.70.230.320.45丙酮5.10.350.230.42乙醚2.80.530.130.34甲醇5.10.480.220.31二氯甲烷3.10.290.180.53乙腈5.80.310.270.42正丙醇4.00.530.210.26醋酸6.00.390.310.30四氫呋喃4.00.380.200.42水10.20.370.370.25氯仿4.10.250.410.33第34頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天反相鍵合相色譜法的溶劑強(qiáng)度常用

S表示常用溶劑的S值列于表20-2

在正、反相色譜法中，溶劑的洗脫能力大體相反。例如，在正相洗脫時(shí)，水的洗脫能力最強(qiáng)（P'最大，為10.2），而在反相洗脫時(shí)，水的洗脫能力最弱（S最小，為0）。第35頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

表20-2反相色譜常用溶劑的強(qiáng)度因子（S）水甲醇乙腈丙酮二噁烷乙醇異丙醇四氫呋喃03.03.23.43.53.64.24.5第36頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天2．混合溶劑的強(qiáng)度

用于正相鍵合相色譜法的多元混合溶劑的強(qiáng)度，用極性參數(shù)來表示，其值為各組成溶劑極性參數(shù)的加權(quán)和：——純?nèi)軇﹊的極性參數(shù)

i——該溶劑在混合溶劑中的體積分?jǐn)?shù)。

第37頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

反相色譜法的混合溶劑的強(qiáng)度因子用類似方法計(jì)算：第38頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、分離條件的選擇(一)高效液相色譜法中的速率理論

1．渦流擴(kuò)散

A=2λdp

為了降低渦流擴(kuò)散的影響，HPLC中一般使用3~10μm的小顆粒固定相，目前有2μm以下的固定相。為了填充均勻，減小填充不規(guī)則因子，常采用球形固定相，而且要求粒度均勻（RSD＜5%）。此外，HPLC色譜柱以勻漿高壓填充。第39頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

2．縱向擴(kuò)散

Dm

與流動(dòng)相的黏度（η）成反比，與溫度成正比。在HPLC中，流動(dòng)相是液體，其黏度比氣體黏度大得多（約102倍），而且常在室溫下進(jìn)行操作，因此組分在流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)Dm比氣相色譜的要小得多（為10

5倍左右）。而且HPLC的流速一般都在最佳流速以上，這時(shí)縱向擴(kuò)散項(xiàng)很小，可以忽略。第40頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

第41頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天（1）固定相傳質(zhì)阻抗通常采用化學(xué)鍵合相，它的“固定液”是鍵合在載體表面固定液官能團(tuán)的單分子層，所以，固定液的傳質(zhì)阻抗可以忽略，于是

C=Cm+Csm3．傳質(zhì)阻抗

C=Cm+Csm+Cs第42頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天（2）流動(dòng)相傳質(zhì)阻抗

在一個(gè)流路中處于流路中心的分子和處于流路邊緣的分子與固定相的作用力不同，遷移速率不同，處于流路邊緣的分子與固定相的作用力大于處于流路中心的分子，遷移速率相對(duì)慢于處于流路中心的分子，因而使峰變寬。第43頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天（3）靜態(tài)流動(dòng)相傳質(zhì)阻抗由于固定相是多孔性的，使部分流動(dòng)相滯留在固定相微孔內(nèi)部。靜態(tài)流動(dòng)相傳質(zhì)阻抗是分子進(jìn)入處于固定相較深孔穴內(nèi)的靜止流動(dòng)相中，而晚回到流動(dòng)相而引起峰展寬。

于是HPLC中的VanDeemter

方程式為：

H=A+Cmu+Csmu第44頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）鍵合相色譜法的分離條件1.固定相的選擇（1）正相鍵合相色譜法一般以極性鍵合相為固定相如氰基、氨基鍵合相

第45頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

氨基鍵合相具有較強(qiáng)的氫鍵結(jié)合能力，對(duì)某些基團(tuán)化合物如甾體，強(qiáng)心苷等有較好的分離能力。氨基鍵合相上的氨基能與糖類分子中的羥基產(chǎn)生選擇性相互作用，所以廣泛用于糖類的分析。

氰基鍵合相對(duì)雙鍵異構(gòu)體或含雙鍵數(shù)不等的環(huán)狀化合物的分離有較好的選擇性；第46頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天（2）反相鍵合相色譜法

在反相鍵合相色譜、反相離子抑制色譜及反相離子對(duì)色譜中，常選用非極性鍵合相，非極性鍵合相可用于分離分子型化合物，也可用于分離離子型或可離子化的化合物。

ODS是應(yīng)用最廣泛的非極性固定相。對(duì)于各種類型的化合物都有很強(qiáng)的適應(yīng)能力。短鏈烷基鍵合相能用于極性化合物的分離，苯基鍵合相適用于分離芳香化合物以及多羥基化合物如黃酮苷類等。第47頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天2.流動(dòng)相的選擇

(1)正相色譜法以正己烷為底劑，加入極性調(diào)節(jié)劑

第48頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

例如，正己烷與異丙醚(Ⅰ)組成的二元流動(dòng)相，通過調(diào)節(jié)極性調(diào)節(jié)劑異丙醚的濃度來改變?nèi)軇?qiáng)度Pˊ，使樣品組分的k值在1-10范圍內(nèi)。若溶劑的選擇性不好，可以改用其它組別的強(qiáng)溶劑如氯仿（Ⅷ）或二氯甲烷（Ⅴ），與正己烷組成具有相似Pˊ值的二元流動(dòng)相，若仍難以達(dá)到所需的分離選擇性，還可以使用三元或四元溶劑體系。第49頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天（2）反相色譜法以極性最強(qiáng)的水為基礎(chǔ)溶劑，加入甲醇、乙腈等極性調(diào)節(jié)劑。極性調(diào)節(jié)劑的性質(zhì)以及其與水的混合比例對(duì)溶質(zhì)的保留值和分離選擇性有顯著影響。

但乙腈的溶劑強(qiáng)度高且粘度小，并可滿足在紫外185-205nm處檢測(cè)的要求，因此，綜合來看，乙腈－水系統(tǒng)要優(yōu)于甲醇－水系統(tǒng)。第50頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天（3）反相離子抑制色譜在反相鍵合相色譜法中加入少量的弱酸（常用HAc）、弱堿（氨水）或緩沖鹽（磷酸鹽及醋酸鹽），調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值，以抑制組分分子的自身解離，并改善峰形。在進(jìn)行離子抑制色譜時(shí)，流動(dòng)相的pH需在2-8之間，超出此范圍可能損壞鍵合相。第51頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

在反相離子對(duì)色譜法中，影響試樣組分的保留值和分離選擇性的主要因素有離子對(duì)試劑的性質(zhì)和濃度、流動(dòng)相的pH以及流動(dòng)相中所含有機(jī)溶劑的種類和比例等。（4）反相離子對(duì)色譜法第52頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

（1）離子對(duì)試劑的選擇離子對(duì)試劑所帶的電荷應(yīng)與試樣離子的電荷相反。分析酸類或帶負(fù)電荷的物質(zhì)時(shí)，常用季銨鹽作離子對(duì)試劑；分析堿類或帶正電荷的物質(zhì)時(shí)，常用烷基磺酸鹽（或硫酸鹽）作離子對(duì)試劑。離子對(duì)試劑的濃度一般在3~10mmol/L。第53頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天（2）流動(dòng)相pH的選擇：

由于離子對(duì)的生成依賴于試樣組分的解離程度，當(dāng)試樣組分與離子對(duì)試劑全部離子化時(shí)，最有利于離子對(duì)的形成，組分的

k值最大。因此，調(diào)節(jié)pH可在較大范圍內(nèi)改變?nèi)跛峄蛉鯄A試樣的保留值和分離選擇性。流動(dòng)相在pH2-8范圍內(nèi)。第54頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天（3）有機(jī)溶劑及其濃度的選擇

在反相離子對(duì)色譜法中，甲醇－水或乙腈－水系統(tǒng)是常用的流動(dòng)相，流動(dòng)相中所含有機(jī)溶劑的比例越高，組分的k值越小。一般來說，樣品組分的疏水性及離子對(duì)試劑的疏水性越強(qiáng)，所需有機(jī)溶劑的比例越高。第55頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天(三)洗脫方法1.等度洗脫（isocraticelution）等度洗脫是在同一分析周期內(nèi)流動(dòng)相組成保持恒定。

適用于組分?jǐn)?shù)目較少、性質(zhì)差別不大的試樣分離。第56頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

梯度洗脫是在一個(gè)分析周期內(nèi)程序控制改變流動(dòng)相的組成，如溶劑的極性、離子強(qiáng)度和pH值等。分析組分?jǐn)?shù)目多、性質(zhì)相差較大的復(fù)雜試樣時(shí)須采用梯度洗脫技術(shù)，使所有組分都在適宜條件下獲得分離。2.梯度洗脫（gradientelution）

梯度洗脫能縮短分析時(shí)間，提高分離度，改善峰形，提高檢測(cè)靈敏度；但是可能引起基線漂移和重現(xiàn)性降低。第57頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天18.3高效液相色譜儀HPLC裝置輸液系統(tǒng)分離系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)第58頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天高效液相色譜儀示意圖第59頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、輸液系統(tǒng)(一)高壓輸液泵送液

輸液泵應(yīng)具備如下性能：①流量精度高且穩(wěn)定，其RSD應(yīng)小于0.5%，這對(duì)定性定量準(zhǔn)確性至關(guān)重要；②流量范圍寬，分析型應(yīng)在0.1~10ml/min范圍內(nèi)連續(xù)可調(diào)，制備型應(yīng)能達(dá)到100ml/min；③能在高壓下連續(xù)工作；④液缸容積??；⑤密封性能好，耐腐蝕。第60頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天プランジャー型のポンプで送液の模式図第61頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）梯度洗脫裝置

實(shí)現(xiàn)梯度洗脫的裝置，即高壓梯度和低壓梯度。高壓二元梯度裝置是由兩臺(tái)高壓輸液泵分別將兩種溶劑送入混合室，混合后送入色譜柱，程序控制每臺(tái)泵的輸出量就能獲得各種形式的梯度曲線。低壓梯度裝置是在常壓下通過一比例閥先將各種溶劑按程序混合，然后再用一臺(tái)高壓輸液泵送入色譜柱。第62頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天

梯度洗脫裝置第63頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、分離和進(jìn)樣系統(tǒng)（一）進(jìn)樣器進(jìn)樣閥和自動(dòng)進(jìn)樣裝置兩種一般高效液相色譜分析常用六通進(jìn)樣閥，大數(shù)量試樣的常規(guī)分析往往需要自動(dòng)進(jìn)樣裝置。第64頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天六通閥進(jìn)樣裝置第65頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）色譜柱

1.色譜柱的構(gòu)造按主要用途分為分析型和制備型，常規(guī)分析柱內(nèi)徑2~5mm，柱長(zhǎng)10~30cm；窄徑柱(narrowborecolumn)內(nèi)徑1~2mm，柱長(zhǎng)10~20cm；毛細(xì)管柱內(nèi)徑0.2~0.5mm。實(shí)驗(yàn)室制備柱內(nèi)徑20~40mm，柱長(zhǎng)10~30cm，生產(chǎn)用的制備型色譜柱內(nèi)徑可達(dá)幾十厘米。第66頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天2．色譜柱的性能評(píng)價(jià)

無論自己填裝的色譜柱還是購(gòu)買的商品柱，使用前都要對(duì)其性能進(jìn)行考察，使用期間或放置一段時(shí)間后也要重新檢查。柱性能指標(biāo)包括在一定實(shí)驗(yàn)條件（試樣、流動(dòng)相、流速、溫度）下的柱壓、塔板高度H和板數(shù)n、對(duì)稱因子fs、保留因子k和分離因子α的重復(fù)性或分離度R。第67頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天色譜柱性能考察常用的試樣和流動(dòng)相介紹如下：(1)硅膠柱：苯、萘和聯(lián)苯為試樣；無水己烷或庚烷為流動(dòng)相。(2)烴基鍵合相柱：尿嘧啶(k=0)、硝基苯、萘和芴為試樣；甲醇－水(85:15)或乙腈－水(60:40)為流動(dòng)相；或者用苯、萘和苯磺酸鈉(k=0)為試