版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
免疫比濁法檢測(cè)免疫球蛋白免疫學(xué)系5/8/20241免疫比濁法檢測(cè)免疫球蛋白實(shí)驗(yàn)原理免疫濁度法是可溶性抗原、抗體在液相中特異結(jié)合,產(chǎn)生一定大小的復(fù)合物,形成光的折射或吸收,測(cè)定這種折射或吸收后的透射光或散射光作為計(jì)算單位。5/8/20242免疫比濁法檢測(cè)免疫球蛋白免疫比濁法分類當(dāng)一束光線通過(guò)溶液受到光散射和光吸收兩個(gè)因素的影響而使光的強(qiáng)度減弱透射比濁法:在光源的光路方向(00)測(cè)量透射光強(qiáng)度和被檢測(cè)溶液微粒濃度關(guān)系的方法。散射比濁法:在光源的光路方向(50-960)角的方向上測(cè)量透射光強(qiáng)度和被檢測(cè)溶液中微粒濃度關(guān)系的方法。5/8/20243免疫比濁法檢測(cè)免疫球蛋白
透射比濁法和散射比濁法光路檢測(cè)器A檢測(cè)器B
IC
I0
Iθ
Iθ透射比濁法散射比濁法5/8/20244免疫比濁法檢測(cè)免疫球蛋白(一)基本原理是個(gè)極其簡(jiǎn)單的方法。在抗原過(guò)量情況下,與待測(cè)樣品中相應(yīng)的Ig發(fā)生抗原-抗體反應(yīng),形成可溶性復(fù)合物,使反應(yīng)介質(zhì)的濁度發(fā)生改變。測(cè)量方法利用分光光度計(jì)測(cè)量被吸收的量。讀數(shù)以吸收單位(A)或OD值表示,A值反映了入射光和透射光的比率。待測(cè)物中Ig含量可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出。待測(cè)樣品中的抗原含量與吸光度呈正比,而與透射光呈反比。反應(yīng)在PEG的作用下,加速?gòu)?fù)合物的形成。
免疫透射比濁法5/8/20245免疫比濁法檢測(cè)免疫球蛋白透射比濁法測(cè)定原理光源誘導(dǎo)劑5/8/20246免疫比濁法檢測(cè)免疫球蛋白樣品光電計(jì)濾光片光源透射比濁法測(cè)定原理5/8/20247免疫比濁法檢測(cè)免疫球蛋白透射比濁法的缺陷:(1)溶液中存在的抗原-抗體復(fù)合物分子應(yīng)足夠大,分子太小則阻擋不了光線的通過(guò)。(2)溶液中的抗原-抗體復(fù)合物的數(shù)量要足夠多。如果數(shù)量太小,溶液濁度變化太小,對(duì)光通量影響不大。(3)透射比濁是依據(jù)透射光減弱的原理來(lái)定量的,因此只能測(cè)定抗原-抗體反應(yīng)的第二階段,檢測(cè)仍需抗原-抗體溫育反應(yīng)時(shí)間,檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)。
光通量是每單位時(shí)間到達(dá)、離開(kāi)或通過(guò)曲面的光能數(shù)量
5/8/20248免疫比濁法檢測(cè)免疫球蛋白
原理散射比濁法在入射光的一定角度檢測(cè)粒子發(fā)出的散射光,散射光的強(qiáng)度與IC的含量呈正比。5/8/20249免疫比濁法檢測(cè)免疫球蛋白散射比濁法測(cè)定原理增加散透率:660nm測(cè)定散射光聚集形成
誘導(dǎo)劑5/8/202410免疫比濁法檢測(cè)免疫球蛋白散射光測(cè)定檢測(cè)器(LED)光電計(jì)樣品100%0%時(shí)間散射光強(qiáng)度5/8/202411免疫比濁法檢測(cè)免疫球蛋白
速率散射比濁法
(一)基本原理
—是測(cè)定抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的動(dòng)態(tài)過(guò)程。
—所謂速率,是在單位時(shí)間內(nèi)抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物的速度。將各單位時(shí)間內(nèi)形成復(fù)合物的速率及測(cè)定的散射信號(hào)連接在一起,即是動(dòng)態(tài)的速率比濁分析。
—當(dāng)儀器測(cè)定到某一時(shí)間內(nèi)形成速率下降時(shí),即出現(xiàn)速率峰,該峰值的高低,即代表所測(cè)抗原的量。5/8/202412免疫比濁法檢測(cè)免疫球蛋白CONCENTRATIONRATE在速率峰基礎(chǔ)上完成的標(biāo)準(zhǔn)曲線5/8/202413免疫比濁法檢測(cè)免疫球蛋白方法評(píng)價(jià):
敏感度高快速(不必達(dá)平衡)抗原抗體結(jié)合的動(dòng)態(tài)測(cè)定,理論上測(cè)定不受本底散射信號(hào)的影響可檢測(cè)微量樣品5/8/202414免疫比濁法檢測(cè)免疫球蛋白原理2.終點(diǎn)散射比濁法讓抗原抗體作用一定時(shí)間,使其反應(yīng)達(dá)到平衡后,測(cè)定其IC形成的量。IC的濁度不再受時(shí)間的影響,但反應(yīng)IC聚合產(chǎn)生絮狀沉淀之前,進(jìn)行濁度測(cè)定。5/8/202415免疫比濁法檢測(cè)免疫球蛋白散射比濁法的缺陷(1)因?yàn)槭且淮涡詼y(cè)定光吸收值,沒(méi)有考慮每一個(gè)待測(cè)樣本的吸收和散射效果,可測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確(2)測(cè)定的仍是抗原-抗體反應(yīng)的第二階段,不適合快速檢測(cè)。(3)終點(diǎn)法存在反應(yīng)本底,測(cè)定樣本的含量越低本底比例越大,故在微量測(cè)定時(shí),本底的干擾是影響準(zhǔn)確測(cè)定的重要因素。
5/8/202416免疫比濁法檢測(cè)免疫球蛋白影響免疫比濁測(cè)定的因素1、抗原抗體比例2、抗體的質(zhì)量抗體的特異性、效價(jià)、親和力3、反應(yīng)的溶液4、增濁劑的使用5/8/202417免疫比濁法檢測(cè)免疫球蛋白1、透射比濁操作簡(jiǎn)便,適用于普通的自動(dòng)生化分析儀和普通的分光光度計(jì),幾乎所有的實(shí)驗(yàn)室均能開(kāi)展。不足的是靈敏度和精密度均不夠理想,所需的抗血清量大,檢測(cè)的周期較長(zhǎng)。2、散射比濁的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度、精密度均較高,檢測(cè)快速。其缺點(diǎn)是需特定的分析儀器,試劑價(jià)格高。透射比濁法和散射比濁法優(yōu)缺點(diǎn)比較5/8/202418免疫比濁法檢測(cè)免疫球蛋白免疫濁度法測(cè)定中應(yīng)注意的問(wèn)題
1、偽濁度的影響
偽濁度形成原因很復(fù)雜,主要是抗血清含有非特異性的交叉反應(yīng)性雜抗體成分;增濁劑濃度和反應(yīng)時(shí)間掌握不當(dāng);樣品本身的濁度處理不當(dāng);試劑的污染和變質(zhì);器材尤其是比色杯等不夠清潔等因素。
2、非特異性散射光的影響
免疫濁度法經(jīng)常受內(nèi)源性光散射的干擾,為避免這些非特異性光散射的影響,應(yīng)用透射比濁法時(shí)需保證抗體組分在3%以下,散射比濁法需保證在0.5%以下。
5/8/202419免疫比濁法檢測(cè)免疫球蛋白本實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用聚乙二醇的生理特性
聚乙二醇是中性、無(wú)毒且具有獨(dú)特理化性質(zhì)和良好的生物相溶性的高分子聚合物,聚乙二醇即PEG具有高度的親水性,在水溶液中有較大的水動(dòng)力學(xué)體積,并且沒(méi)有免疫原性。當(dāng)藕聯(lián)到藥物分子或藥物表面時(shí),可以將其優(yōu)良性質(zhì)賦予修飾后的藥物分子,改變它們?cè)谒芤褐械纳锓峙湫袨楹腿芙庑?,在其修飾的藥物周圍產(chǎn)生空間屏障,減少藥物的酶解,避免在腎臟的代謝中很快消除,并使藥物能被免疫系統(tǒng)的細(xì)胞識(shí)別。5/8/202420免疫比濁法檢測(cè)免疫球蛋白材料1.免疫球蛋白試劑A,M,G2.免疫球蛋白試劑A,M,G校準(zhǔn)品,蒸餾水3.微量加樣槍4.
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫(kù)網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 2024-2030年中國(guó)食品包裝紙行業(yè)深度調(diào)研及投資前景預(yù)測(cè)研究報(bào)告
- 2024-2030年中國(guó)順式-3-己烯醇行業(yè)產(chǎn)能銷售規(guī)模與未來(lái)前景供需形勢(shì)報(bào)告
- 2024-2030年中國(guó)非管道風(fēng)機(jī)盤管行業(yè)市場(chǎng)發(fā)展趨勢(shì)與前景展望戰(zhàn)略分析報(bào)告
- 2024-2030年中國(guó)霉氣凈化器行業(yè)發(fā)展趨勢(shì)與投資戰(zhàn)略研究報(bào)告
- 2024-2030年中國(guó)雕刻設(shè)備行業(yè)市場(chǎng)發(fā)展趨勢(shì)與前景展望戰(zhàn)略分析報(bào)告
- 2024-2030年中國(guó)隔離轉(zhuǎn)換器行業(yè)市場(chǎng)運(yùn)營(yíng)模式及未來(lái)發(fā)展動(dòng)向預(yù)測(cè)報(bào)告
- 2024-2030年中國(guó)陶瓷鐵氧體磁鐵行業(yè)市場(chǎng)發(fā)展趨勢(shì)與前景展望戰(zhàn)略分析報(bào)告
- 2024-2030年中國(guó)除銹石英砂未來(lái)發(fā)展預(yù)測(cè)及投資前景分析報(bào)告
- 2024-2030年中國(guó)陳皮行業(yè)銷售渠道與投資策略分析報(bào)告
- 《比較》(教案)-2024-2025學(xué)年一年級(jí)上冊(cè)數(shù)學(xué)西師大版
- 哥弟終端營(yíng)運(yùn)規(guī)范
- 湘少版四年級(jí)英語(yǔ)上冊(cè)教案
- 廣東某鐵路站前工程施工防洪度汛施工方案(附示意圖)
- 實(shí)習(xí)生輸送服務(wù)協(xié)議書
- NYPE46(土產(chǎn)格式)中英對(duì)照版本
- 用Arduino設(shè)計(jì)一個(gè)智能日晷
- 淺談我國(guó)社區(qū)居民參與問(wèn)題
- 醫(yī)療糾紛預(yù)防調(diào)研報(bào)告
- CNG加氣母站項(xiàng)目建設(shè)與運(yùn)營(yíng)管理相關(guān)手續(xù)申報(bào)審批實(shí)施細(xì)則
- 閘門運(yùn)行工考試
- 酒店案例分析
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論