（高清版）WST 413-2024 血清肌酐參考測(cè)量程序 同位素稀釋液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

ICS11.020CCSC50WSWS/T413—2024代替WS/T413-2013Referencemeasurementprocedureforserumcre—IsotopedilutionliquidchromatographytandemmassspectrometryIWS/T413—2024本標(biāo)準(zhǔn)為推薦性標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)代替WS/T413—2013《血清肌酐參考程序同位素稀釋液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》，與WS/T413—2013相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動(dòng)外，主要技術(shù)變化如下：——增加了“參考物質(zhì)”、“有證參考物質(zhì)”“基質(zhì)效應(yīng)”的定義（見(jiàn)3.3、3.4、3.5）；——更改了“互換性”的定義（見(jiàn)3.6，2013年版的3.3——增加了試劑的CAS編號(hào)（見(jiàn)5）；——更改了儀器技術(shù)參數(shù)的要求（見(jiàn)6，2013年版的6）；——增加“分析可靠性”相關(guān)內(nèi)容并調(diào)整條款的順序（見(jiàn)11——增加了“質(zhì)量保證”的要求（見(jiàn)16）；——增加了附錄A.1，列出了典型質(zhì)譜條件參數(shù)（見(jiàn)附錄A.1）。本標(biāo)準(zhǔn)由國(guó)家衛(wèi)生健康標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)專(zhuān)業(yè)委員會(huì)負(fù)責(zé)技術(shù)審查和技術(shù)咨詢(xún)，由國(guó)家衛(wèi)生健康委醫(yī)療管理服務(wù)指導(dǎo)中心負(fù)責(zé)協(xié)調(diào)性和格式審查，由國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)醫(yī)政司負(fù)責(zé)業(yè)務(wù)管理、法規(guī)司負(fù)責(zé)統(tǒng)籌管理。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：北京醫(yī)院/國(guó)家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院、民航總醫(yī)院、首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京同仁醫(yī)院、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院、西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院、鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張傳寶、張?zhí)鞁?、陳文祥、趙海建、邱玲、王學(xué)晶、劉向祎、李敏、王曉琴、郭書(shū)忍。本標(biāo)準(zhǔn)于2013年首次發(fā)布，本次為第一次修訂。1WS/T413—2024血清肌酐參考測(cè)量程序同位素稀釋液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了血清肌酐參考測(cè)量程序同位素稀釋液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法的技術(shù)要點(diǎn)和質(zhì)量要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于開(kāi)展血清肌酐參考測(cè)量的實(shí)驗(yàn)室。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本標(biāo)準(zhǔn)必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T19702體外診斷醫(yī)療器械生物源性樣品中量的測(cè)量參考測(cè)量程序的表述和內(nèi)容的要求GB/T33087儀器分析用高純水規(guī)格和試驗(yàn)方法JJF1135化學(xué)分析測(cè)量不確定度評(píng)定3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3.1參考測(cè)量程序referencemeasurementprocedure被接受作為提供適合下列預(yù)期用途得測(cè)量結(jié)果得測(cè)量程序，預(yù)期用途包括評(píng)價(jià)測(cè)量同類(lèi)量的其他測(cè)量程序測(cè)得量值的測(cè)量正確度、校準(zhǔn)或參考物質(zhì)賦值。注2：在ISO術(shù)語(yǔ)中，正確度與偏倚、系統(tǒng)效應(yīng)和系統(tǒng)誤差有關(guān)，精密度與[來(lái)源：改編自ISO/IEC導(dǎo)則99-2007，定義2.7]3.2計(jì)量學(xué)溯源性traceability通過(guò)文件規(guī)定的不間斷的校準(zhǔn)鏈將測(cè)量結(jié)果與參照對(duì)象聯(lián)系起來(lái)的特性，校準(zhǔn)鏈中的每項(xiàng)校準(zhǔn)均會(huì)引入測(cè)量不確定度。[來(lái)源：ISO/IEC指南99:2007,定義2.4.1]3.3參考物質(zhì)referencematerial一種或多種指定特性足夠均勻和穩(wěn)定，已被證明適合在測(cè)量過(guò)程中或名義特性檢驗(yàn)中預(yù)期應(yīng)用的物質(zhì)。注：預(yù)期應(yīng)用包括校準(zhǔn)、給其他物質(zhì)定值或用[來(lái)源：GB/T29791.1—2013，定義3.58]3.4有證參考物質(zhì)certifiedreferencematerial附有由權(quán)威機(jī)構(gòu)發(fā)布的文件，提供使用有效程序獲得具不確定度和溯源性的一個(gè)或多個(gè)特性量值的參考物質(zhì)。2WS/T413—2024[來(lái)源：改編自ISO/IEC導(dǎo)則99-2007，定義5.14]3.5基質(zhì)效應(yīng)matrixeffect除待測(cè)物以外樣品特性對(duì)按特定測(cè)量程序測(cè)定待測(cè)物及其量值的影響。[來(lái)源：CLSIEP14-A3，1.4.2]3.6互換性commutability參考物質(zhì)的屬性，指按兩種給定測(cè)量程序?qū)Υ宋镔|(zhì)的指定量所獲測(cè)量結(jié)果的關(guān)系與對(duì)其它指定物質(zhì)所獲測(cè)量結(jié)果關(guān)系的一致程度。注1：所述參考物質(zhì)通常為校準(zhǔn)物，其它指定注3：臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域參考物質(zhì)的互通性，通常指用不同測(cè)量過(guò)程測(cè)量該物質(zhì)時(shí)，各測(cè)量過(guò)程測(cè)量結(jié)果之間的數(shù)字關(guān)系，與用這些測(cè)量過(guò)程測(cè)量實(shí)際臨床樣品時(shí)測(cè)量結(jié)果的數(shù)字關(guān)系的一致程度，即該物質(zhì)理化性質(zhì)與實(shí)際臨床[來(lái)源：GB/T29791.1—2013，補(bǔ)充定義和分析術(shù)語(yǔ)A.3.9]4測(cè)量原理和方法本標(biāo)準(zhǔn)建立的血清肌酐參考測(cè)量程序以同位素稀釋質(zhì)譜法為測(cè)量原理，以穩(wěn)定同位素標(biāo)記的肌酐為內(nèi)標(biāo)添加至血清中，內(nèi)標(biāo)與血清均勻混合后用無(wú)水乙醇沉淀蛋白質(zhì)，三氯甲烷凈化上清液，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分離和測(cè)量血清肌酐和內(nèi)標(biāo)特異的母離子和子離子，根據(jù)肌酐和內(nèi)標(biāo)峰面積比計(jì)算血清肌酐濃度。5試劑5.1水（H2O）：除非有特別說(shuō)明，應(yīng)使用GB/T33087定義的儀器分析用高純水。5.2無(wú)水乙醇（CH3CH2OH）：CAS64-17-5，色譜純。5.3三氯甲烷（CHCl3）：CAS67-66-3，色譜純。5.4乙酸銨（CH3COONH4）：CAS631-61-8，純度≥99％。5.5疊氮鈉（NaN3CAS26628-22-8，分析純。6儀器6.1液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)應(yīng)滿(mǎn)足以下要求：a）高效液相色譜儀或超高效液相色譜儀；b）三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源（ESI），各項(xiàng)參數(shù)指標(biāo)符合正常工作的要求（見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第8.1.1條）。6.2液相色譜柱液相色譜柱應(yīng)滿(mǎn)足以下要求：a)具有極性官能團(tuán)嵌入或端基封尾的C18鍵合色譜柱，在含水量高的流動(dòng)相中具有良好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性；b)規(guī)格為內(nèi)徑2.0mm～2.1mm，粒徑3μm～5μm，柱長(zhǎng)150mm。c)實(shí)驗(yàn)室也可使用其他規(guī)格的色譜柱，使用前應(yīng)進(jìn)行參考測(cè)量程序的確認(rèn)（見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第13章證明所用色譜柱滿(mǎn)足參考測(cè)量程序分析可靠性的要求（見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第11章）。3WS/T413—2024（＜），6.3天平十萬(wàn)分之一天平（最小分度0.01mg每年至少進(jìn)行一次校準(zhǔn)，具有校準(zhǔn)報(bào)告。6.4離心機(jī)水平轉(zhuǎn)頭離心機(jī)。離心力應(yīng)不小于1500g。6.5旋渦式混合器適用于安瓿、試管等的旋渦式混合裝置。6.6加熱吹干裝置（氮吹儀）將氮?dú)獯等胪ㄟ^(guò)干熱方式加熱樣品的表面進(jìn)行樣品濃縮的裝置，不宜使用水浴加熱。。6.7微量移液器經(jīng)校準(zhǔn)合格的微量可調(diào)移液器兩支，規(guī)格分別為100μL～1000μL和20μL～200μL。6.8血液混勻器適用于安瓿、密封瓶等的血液混勻裝置。6.9安瓿或試管規(guī)格5mL。試管應(yīng)配有聚四氟乙烯密封塞。安瓿應(yīng)配有融封裝置。6.10密度計(jì)用于測(cè)量血清密度。7樣品7.1通則本參考測(cè)量程序適用于新鮮、冰凍或凍干血清樣品的肌酐濃度測(cè)量。應(yīng)將樣品視具有潛在生物傳染性樣，按照國(guó)家生物安全法及相關(guān)法律法規(guī)采取防護(hù)措施，對(duì)廢物進(jìn)行妥善處理。7.2樣品取樣量樣品取樣量應(yīng)根據(jù)肌酐的濃度確定，一般用量為0.1mL～0.4mL（見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第8.3.1條和第8.3.4條）。為保證取樣量的準(zhǔn)確性和操作可行性，最小取樣量不應(yīng)低于0.1mL。7.3樣品的保存新鮮血清樣本若不立即測(cè)量，應(yīng)冰凍保存。-70℃以下，可保存1年以上，-20℃保存，不可超過(guò)3個(gè)月。冰凍血清樣本使用前應(yīng)置2℃~8℃0.5h后在室溫下融解，充分混勻后使用。凍干樣品應(yīng)按照說(shuō)明書(shū)描述的使用期限和條件保存，臨用前按照說(shuō)明書(shū)復(fù)溶，充分混勻后使用。8測(cè)量系統(tǒng)和分析樣品的準(zhǔn)備8.1液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)的準(zhǔn)備8.1.1質(zhì)譜系統(tǒng)準(zhǔn)備測(cè)量前應(yīng)對(duì)質(zhì)譜系統(tǒng)進(jìn)行性能檢查，包括：a)最近3個(gè)月內(nèi)進(jìn)行過(guò)校準(zhǔn)，符合制造商聲明的正常工作的要求；b)裝配電噴霧離子源，運(yùn)行正常；c)真空度達(dá)到正常工作要求的范圍。輔助氣體純度和流量符合制造商聲明的正常工作的要求。4WS/T413—20248.1.2液相系統(tǒng)準(zhǔn)備測(cè)量前應(yīng)對(duì)液相系統(tǒng)進(jìn)行準(zhǔn)備，包括：a)流動(dòng)相準(zhǔn)備：純水，乙酸銨水溶液（5mmol/L，pH=5.5）；b)色譜柱的平衡：用流動(dòng)相（見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第9.2條）沖洗色譜柱約30～40倍柱床體積，直至色譜柱達(dá)到平衡。8.2校準(zhǔn)溶液的制備8.2.1一級(jí)有證參考物質(zhì)應(yīng)使用國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)溯源聯(lián)合委員會(huì)（JCTLM)）認(rèn)定并收錄或權(quán)威參考物質(zhì)研究機(jī)構(gòu)研制的一級(jí)有證參考物質(zhì)（純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）為血清肌酐檢測(cè)參考測(cè)量程序的校準(zhǔn)物。一級(jí)有證參考物質(zhì)的使用、保存及使用期限應(yīng)符合研制機(jī)構(gòu)提供的證書(shū)。8.2.2穩(wěn)定同位素標(biāo)記內(nèi)標(biāo)應(yīng)使用穩(wěn)定同位素標(biāo)記的化合物為血清肌酐檢測(cè)參考測(cè)量程序的內(nèi)標(biāo)。標(biāo)記的穩(wěn)定同位素個(gè)數(shù)應(yīng)不低于3個(gè)，標(biāo)記同位素豐度≥95％。內(nèi)標(biāo)的使用、保存及使用期限應(yīng)符合制造商提供的產(chǎn)品證書(shū)或使用說(shuō)明書(shū)。8.2.3校準(zhǔn)溶液的配制本法使用包括法（BracketingMethod）校準(zhǔn)。用重量法制備肌酐一級(jí)有證參考物質(zhì)（見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第8.2.1條）的水溶液為校準(zhǔn)溶液，添加0.1％疊氮鈉為防腐劑。配制濃度約為0.10mg/g的校準(zhǔn)溶液用于肌酐濃度大于200μmol/L樣品的測(cè)量（簡(jiǎn)稱(chēng)為校準(zhǔn)溶液1）；配制濃度約為0.01mg/g的校準(zhǔn)溶液用于肌酐濃度小于200μmol/L樣品的測(cè)量（簡(jiǎn)稱(chēng)為校準(zhǔn)溶液2）。記錄稱(chēng)量過(guò)程，準(zhǔn)確計(jì)算所配制校準(zhǔn)溶液的濃度。校準(zhǔn)溶液應(yīng)于-70℃以下保存。用重量法制備肌酐同位素標(biāo)記內(nèi)標(biāo)（見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第8.2.2條）的水溶液為內(nèi)標(biāo)溶液，添加0.1％疊氮鈉為防腐劑。配制濃度約為0.10mg/g的內(nèi)標(biāo)溶液用于肌酐濃度大于200μmol/L樣品的測(cè)量（簡(jiǎn)稱(chēng)為內(nèi)標(biāo)溶液1）；配制濃度約為0.01mg/g的內(nèi)標(biāo)溶液用于肌酐濃度小于200μmol/L樣品的測(cè)量（簡(jiǎn)稱(chēng)為內(nèi)標(biāo)溶液2）。記錄稱(chēng)量過(guò)程，準(zhǔn)確計(jì)算所配制內(nèi)標(biāo)溶液的濃度。內(nèi)標(biāo)溶液應(yīng)于-70℃以下保存。8.2.4校準(zhǔn)溶液和內(nèi)標(biāo)溶液的混合用重量法將校準(zhǔn)溶液與其對(duì)應(yīng)濃度的內(nèi)標(biāo)溶液按照一定比例混合，制成高低兩個(gè)濃度點(diǎn)（見(jiàn)表1）。要求其中一個(gè)濃度點(diǎn)（簡(jiǎn)稱(chēng)為低標(biāo)，其中用于肌酐濃度大于200μmol/L樣品測(cè)量的記為低標(biāo)1，用于肌酐濃度小于200μmol/L樣品測(cè)量的記為低標(biāo)2）所含肌酐校準(zhǔn)物質(zhì)與內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量比控制在0.9～1之間，另一個(gè)濃度點(diǎn)（簡(jiǎn)稱(chēng)為高標(biāo)，其中用于肌酐濃度大于200μmol/L樣品測(cè)量的記為高標(biāo)1，用于肌酐濃度小于200μmol/L樣品測(cè)量的記為高標(biāo)2）所含肌酐校準(zhǔn)物質(zhì)與內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量比控制在1～1.1之間。記錄所取校準(zhǔn)溶液與內(nèi)標(biāo)溶液的準(zhǔn)確質(zhì)量，計(jì)算各濃度點(diǎn)中肌酐校準(zhǔn)物與內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量比?；旌闲?zhǔn)溶液宜在臨用前配制，未用完的剩余溶液不宜留存再使用。），表1校準(zhǔn)溶液的配制8.3分析樣品的處理8.3.1常規(guī)方法測(cè)量肌酐濃度5WS/T413—2024分析前使用常規(guī)方法（如堿性苦味酸法、酶法等）初步測(cè)量樣品中肌酐濃度，用于預(yù)估樣品取樣量（見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第8.3.4條）。8.3.2測(cè)量血清密度分析前使用密度計(jì)等方法準(zhǔn)確測(cè)量血清樣品的密度，所得結(jié)果應(yīng)保留4位有效數(shù)字。8.3.3樣品前處理流程圖樣品前處理流程見(jiàn)圖1。圖1樣品的處理流程圖8.3.4分析樣品與內(nèi)標(biāo)的混合用微量移液器取約0.1mL內(nèi)標(biāo)溶液，稱(chēng)重得其精確質(zhì)量。根據(jù)初步測(cè)量的肌酐濃度，計(jì)算樣品取樣量，使所取樣品中肌酐與所取內(nèi)標(biāo)溶液中內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量比約為1：1。根據(jù)計(jì)算結(jié)果，用微量移液器取所需體積（一般為0.1mL～0.4mL）的樣品，稱(chēng)重得其準(zhǔn)確質(zhì)量。使用旋渦式混合器將樣品與內(nèi)標(biāo)充分混合。肌酐濃度大于200μmol/L的樣品使用濃度約為0.10mg/g的內(nèi)標(biāo)溶液，肌酐濃度小于200μmol/L的樣品使用濃度約為0.01mg/g的內(nèi)標(biāo)溶液。加入適量水，使其終體積約為0.5mL，輕輕混勻，室溫下放置1h平衡。8.3.5去除蛋白加入2mL無(wú)水乙醇，渦旋振蕩5min，以不小于1500g離心力離心5min。取1.8mL上清液至安瓿或試管中，60℃氮?dú)饬飨麓蹈伞?.3.6提取凈化吹干后所得殘?jiān)苡?.6mL水中，加入0.6mL三氯甲烷，渦旋振蕩5min，以不小于1500g離心力離心5min。將水相移至2mL色譜分析樣品瓶中進(jìn)行液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析。9液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)（LC-MS/MS）測(cè)量9.1LC-MS/MS使用前檢查測(cè)量前檢查L(zhǎng)C-MS/MS，使其符合本標(biāo)準(zhǔn)第8.1條的要求。9.2液相色譜測(cè)量條件6WS/T413—2024流動(dòng)相為5mmol/L乙酸銨（pH=5.5，100％水相），流速為0.2mL/min。肌酐濃度小于200μmol/L樣品的進(jìn)樣體積為10μL，肌酐濃度大于200μmol/L，樣品的進(jìn)樣體積為1μL。注：可根據(jù)所用儀器的性能、樣品的濃度和稀釋倍數(shù)選擇其他適宜的進(jìn)樣體積。9.3串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)量條件9.3.1數(shù)據(jù)采集模式使用電噴霧電離源（ESI）正離子模式和多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式分析。監(jiān)測(cè)的母離子為[M+H]，子離子為母離子失去一個(gè)羰基后的碎片離子，即監(jiān)測(cè)肌酐m/z114→86和同位素內(nèi)標(biāo)相應(yīng)的離子。選用不同的同位素內(nèi)標(biāo)，所監(jiān)測(cè)的內(nèi)標(biāo)離子將有所不同，應(yīng)根據(jù)其標(biāo)記同位素的數(shù)量和位置確定。），9.3.2輔助氣體、離子源條件參數(shù)的設(shè)置調(diào)整輔助氣體、離子源條件等參數(shù)的設(shè)置，使肌酐和內(nèi)標(biāo)色譜峰的信噪比達(dá)到最佳。9.4分析過(guò)程9.4.1分析系列每個(gè)樣品與其對(duì)應(yīng)濃度水平的校準(zhǔn)溶液（即低標(biāo)和高標(biāo)）同一批測(cè)量，其中肌酐濃度大于200μmol/L的樣品使用低標(biāo)1和高標(biāo)1，肌酐濃度小于200μmol/L的樣品使用低標(biāo)2和高標(biāo)2，按照樣品正序、逆序、正序的次序?qū)⒚總€(gè)樣品至少重復(fù)測(cè)量3次。9.4.2原始數(shù)據(jù)的有效性檢查3次重復(fù)測(cè)量所得肌酐和內(nèi)標(biāo)的峰面積比的變異系數(shù)宜≤1％。10數(shù)據(jù)處理10.1原始數(shù)據(jù)符合本標(biāo)準(zhǔn)第9.4條要求的3次重復(fù)測(cè)量結(jié)果的均值為樣品測(cè)量的原始數(shù)據(jù)。10.2測(cè)量結(jié)果的計(jì)算使用包括法計(jì)算血清肌酐濃度，計(jì)算公式如下：式中：C——血清中肌酐的濃度，單位為微摩爾每升(μmol/LISam——樣品中肌酐與內(nèi)標(biāo)的峰面積比（測(cè)量值ILow——低標(biāo)中肌酐與內(nèi)標(biāo)的峰面積比（測(cè)量值IHi——高標(biāo)中肌酐與內(nèi)標(biāo)的峰面積比（測(cè)量值WLow——低標(biāo)中肌酐與內(nèi)標(biāo)的含量比；WHi——高標(biāo)中肌酐與內(nèi)標(biāo)的含量比；QIS——血清樣品中內(nèi)標(biāo)的含量，單位為微克(μgMSer——血清樣品的質(zhì)量，單位為克（gDs——血清的密度；PStd——校準(zhǔn)品的認(rèn)定純度（由有證參考物質(zhì)的證書(shū)提供113——肌酐的相對(duì)分子質(zhì)量。10.3換算公式7WS/T413—2024推薦以國(guó)際單位微摩爾每升(μmol/L）表示血清肌酐的測(cè)量結(jié)果。也可根據(jù)臨床應(yīng)用需要，使用微克每毫升（mg/dL）為單位表示，換算公式為：μmol/L×0.0113=mg/dL。11分析可靠性11.1分析影響量本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的血清肌酐參考測(cè)量程序不受樣品溶血、高血脂、高膽紅素、高尿素等因素的影響。11.2基質(zhì)效應(yīng)基質(zhì)效應(yīng)不應(yīng)對(duì)測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確度產(chǎn)生影響。宜通過(guò)提取添加試驗(yàn)評(píng)估（質(zhì)譜）基質(zhì)效應(yīng)對(duì)參考測(cè)量程序的影響。注：提取添加試驗(yàn)的設(shè)計(jì)和實(shí)施過(guò)程見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)[3]。11.3回收測(cè)量將一級(jí)有證參考物質(zhì)（見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第8.2.1條）定量地添加至待測(cè)血清中，混合均勻。用測(cè)量程序測(cè)量添加前后的肌酐濃度。計(jì)算方法的加樣回收率。加樣回收率宜在（100±2范圍內(nèi)。11.4測(cè)量精密度應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行重復(fù)性測(cè)量，評(píng)估參考測(cè)量程序的精密度，包括批內(nèi)試驗(yàn)和批間試驗(yàn)。測(cè)量結(jié)果的批內(nèi)和批間不精密度均應(yīng)≤2％。推薦的精密度試驗(yàn)方案如下：a）準(zhǔn)備足量的用于精密度試驗(yàn)的樣品，包含至少三個(gè)濃度水平，覆蓋測(cè)量范圍的高、中、低水平；b）精密度試驗(yàn)應(yīng)至少進(jìn)行5個(gè)獨(dú)立的分析批的重復(fù)測(cè)量；c）每個(gè)分析批應(yīng)分別在獨(dú)立的工作日進(jìn)行，每批每個(gè)濃度水平測(cè)量3份平行樣品，每份樣品應(yīng)進(jìn)行獨(dú)立的內(nèi)標(biāo)混合和樣品前處理程序；d）根據(jù)每個(gè)分析批批內(nèi)和各分析批批間的數(shù)據(jù)，計(jì)算批內(nèi)和批間變異系數(shù)。注2：可根據(jù)需要按照其他合理方案增減樣品的濃度水平、平行樣品11.5檢出限本測(cè)量程序的檢出限與LC-MS/MS系統(tǒng)的性能有關(guān)。應(yīng)保證參考測(cè)量程序的檢出限滿(mǎn)足預(yù)期用途的要11.6測(cè)量下限和上限本測(cè)量程序以包括法為定量方法，其測(cè)量下限和上限與樣品取樣量（見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第7.2條）有關(guān)。應(yīng)保證參考測(cè)量程序的測(cè)量下限和上限滿(mǎn)足預(yù)期用途的要求。11.7測(cè)量有證參考物質(zhì)測(cè)量國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)溯源聯(lián)合委員會(huì)（JCTLM）認(rèn)定并收錄或權(quán)威參考物質(zhì)研究機(jī)構(gòu)研制的血清肌酐有證參考物質(zhì)，所得結(jié)果應(yīng)在參考物質(zhì)（認(rèn)定值±不確定度）的范圍之間。不應(yīng)將同一種有證參考物質(zhì)同時(shí)用于校準(zhǔn)和正確度驗(yàn)證。示例：國(guó)家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心有證參考物質(zhì)GBW09174c、GBW09175c和GBW09176c，中國(guó)計(jì)量科學(xué)有證參考物質(zhì)GBW09170和GBW0917111.8實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)應(yīng)有計(jì)劃地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)，測(cè)量結(jié)果應(yīng)滿(mǎn)足所參加實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)活動(dòng)規(guī)定的要求。示例：參加由國(guó)際臨床化學(xué)和檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)聯(lián)合會(huì)（IFCC）和德國(guó)），12測(cè)量不確定度8WS/T413—202412.1測(cè)量不確定度來(lái)源分析本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的參考測(cè)量程序以同位素稀釋質(zhì)譜法為測(cè)量原理，以包括法為校準(zhǔn)方法。使用重量法配制和混合校準(zhǔn)溶液、內(nèi)標(biāo)溶液和樣品。本測(cè)量程序的A類(lèi)不確定度主要來(lái)源為樣品的重復(fù)測(cè)量，B類(lèi)不確定主要來(lái)源為校準(zhǔn)物的純度、校準(zhǔn)溶液和內(nèi)標(biāo)的配制、校準(zhǔn)溶液和內(nèi)標(biāo)溶液的混合、樣品與內(nèi)標(biāo)溶液的混合和血清密度的測(cè)量。12.2測(cè)量不確定度的計(jì)算根據(jù)JJF1135和本標(biāo)準(zhǔn)第12.1條中不確定度主要來(lái)源計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)不確定度（uC）。以包含因子k為2，計(jì)算擴(kuò)展不確定度（U）與相對(duì)擴(kuò)展不確定（Urel）。應(yīng)保證參考測(cè)量程序的測(cè)量不確定度應(yīng)符合其預(yù)期用途的要求，Urel宜≤2％。13特殊事項(xiàng)當(dāng)樣品肌酐濃度大于850μmol/L時(shí)，所需取樣量低于0.1mL，不滿(mǎn)足本標(biāo)準(zhǔn)最小取樣量的要求?？蛇m當(dāng)增加樣品取樣量以到達(dá)最小取樣量要求，同時(shí)增加內(nèi)標(biāo)溶液的加入量，使該樣品中所含肌酐與內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量比仍保持約為1：1。LC-/MS/MS分析前將樣品用流動(dòng)相進(jìn)行適當(dāng)?shù)叵♂專(zhuān)蛊浔３峙c其他樣品一致的濃度水平。內(nèi)標(biāo)溶液，稱(chēng)重得其精確質(zhì)量，混勻。按照本標(biāo)準(zhǔn)第8.3條進(jìn)行樣品前處理，LC/MS/M14參考測(cè)量程序的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按照本標(biāo)準(zhǔn)和GB/T19702的要求對(duì)所運(yùn)行的參考測(cè)量程序進(jìn)行確認(rèn)以表明其符合預(yù)期用途并制定標(biāo)準(zhǔn)操作程序。確認(rèn)應(yīng)盡可能充分以滿(mǎn)足血清肌酐參考測(cè)量和量值溯源的需求。用于確認(rèn)的技術(shù)應(yīng)包括但不限于：a）對(duì)測(cè)量程序的分析影響量（見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第11.1條）、基質(zhì)效應(yīng)（見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第11.2條）、回收（見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第11.3條），測(cè)量精密度（見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第11.4條）、檢出限（見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第11.5條）、定量下限和上限（見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第11.6條）等影響結(jié)果因素的系統(tǒng)評(píng)估；b）與其他血清肌酐參考測(cè)量程序獲得結(jié)果的比對(duì)；c）使用參考物質(zhì)進(jìn)行的性能確認(rèn)（見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第11.7條）d）實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)（見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第11.8條）；e）基于對(duì)方法基礎(chǔ)理論的科學(xué)理解和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行的測(cè)量不確定度的評(píng)估（見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第12章）。15報(bào)告測(cè)量報(bào)告應(yīng)包括但不限于如下分析信息：a）樣品的類(lèi)型、來(lái)源和保存條件，凍干樣品應(yīng)同時(shí)報(bào)告復(fù)溶的過(guò)程；b）所用參考測(cè)量程序的名稱(chēng)和原理；c）所用參考測(cè)量程序的計(jì)量學(xué)溯源性，包括一級(jí)有證參考物質(zhì)的來(lái)源、名稱(chēng)和認(rèn)定值，校準(zhǔn)溶液的制備方法，用于校準(zhǔn)溶液配制及樣品與內(nèi)標(biāo)混合的天平的校準(zhǔn)信息等；d）血清肌酐濃度的測(cè)量結(jié)果和單位，數(shù)值應(yīng)保留4位有效數(shù)字；e）測(cè)量不確定度的表述；f）適用時(shí)，報(bào)告用于正確度驗(yàn)證的有證參考物質(zhì)的來(lái)源、名稱(chēng)和認(rèn)定值。g）適用時(shí)，注明用本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的參考測(cè)量程序測(cè)定質(zhì)控品和校準(zhǔn)品等制備物的肌酐濃度，其結(jié)果不能直接用于肌酐常規(guī)測(cè)定方法的校準(zhǔn)，需考察制備物的互通性對(duì)肌酐常規(guī)測(cè)定方法的影響。16質(zhì)量保證16.1室內(nèi)質(zhì)量控制9WS/T413—2024實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定室內(nèi)質(zhì)量控制的程序、規(guī)則和文件記錄的要求。應(yīng)保證每次參考測(cè)量的分析過(guò)程至少進(jìn)行一次室內(nèi)質(zhì)量控制程序并保存相關(guān)記錄。所測(cè)量的室內(nèi)質(zhì)控品應(yīng)根據(jù)樣品濃度范圍至少選擇2個(gè)代表性濃度水平，與樣品在相同條件下進(jìn)行前處理和LC-MS/MS的測(cè)量。16.2實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)（見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第11.8條）的程序、規(guī)則和文件記錄的要求。當(dāng)實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)的結(jié)果為不滿(mǎn)意時(shí)，應(yīng)采取相應(yīng)的糾正措施，驗(yàn)證措施的有效性，并保存相關(guān)記錄。WS/T413—2024典型質(zhì)譜條件參數(shù)A.1典型離子源條件參數(shù)表A.1典型離子源條件參數(shù)根據(jù)所用儀器不同，離子源條件參數(shù)有所不同。參數(shù)設(shè)置以最優(yōu)化A.2典型肌酐一級(jí)和二級(jí)質(zhì)譜全掃描圖圖A.1肌酐一級(jí)質(zhì)譜全掃描圖WS/T413—2024圖A.2肌酐二級(jí)質(zhì)譜全掃描圖WS/T413—2024參考文獻(xiàn)[1]張?zhí)鞁?，趙海艦，張傳寶，等.同位素稀釋液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)量血清肌酐.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，32(5):509-514.[2]StokesP,ConnorG.Developmentofaliquidchromatography-massspectrometrymethodforthehigh-accuracydeterminationofcreatinineinserum.JChromatogrBAna