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GB/T40486—2021蜂毒干粉中蜂毒溶血肽含量的測(cè)定高效液相色譜法國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)IGB/T40486—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由中華全國(guó)供銷合作總社提出。本文件由全國(guó)蜂產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)化工作組歸口。本文件起草單位:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所、中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所。1GB/T40486—2021蜂毒干粉中蜂毒溶血肽含量的測(cè)定高效液相色譜法本文件規(guī)定了蜂毒干粉中蜂毒溶血肽含量測(cè)定的高效液相色譜分析方法。本文件適用于蜂毒干粉中蜂毒溶血肽含量的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4原理蜂毒溶血肽是蜂毒的主要生物活性物質(zhì),試樣中的蜂毒溶血肽易溶于水,紫外最大吸收波長(zhǎng)為5試劑和材料水為符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。蜂毒溶血肽(melittin,CAS:20449-79-0)純度≥97%。5.3.1蜂毒溶血肽標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(10mg/mL):準(zhǔn)確稱取蜂毒溶血肽標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)100mg于10mL容量瓶5.3.2蜂毒溶血肽標(biāo)準(zhǔn)工作液:分別量取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,用水稀釋成質(zhì)量濃度為20μg/mL、2GB/T40486—20217試樣的制備與保存7.2試樣的保存—20℃儲(chǔ)存?zhèn)溆?。流?dòng)相:A相為0.1%三氟乙酸-水溶液,B相為0.08%三氟乙酸-乙腈溶液,梯度洗脫條件見(jiàn)附的保留時(shí)間定性,以色譜峰面積積分值定量。標(biāo)準(zhǔn)工作液及試樣液中待測(cè)物質(zhì)的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢3GB/T40486—2021測(cè)的線性范圍內(nèi),超過(guò)線性范圍時(shí),應(yīng)根據(jù)測(cè)定濃度進(jìn)行適當(dāng)倍數(shù)稀釋后再進(jìn)行分析。蜂毒溶血肽標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和蜂毒干粉液相色譜圖見(jiàn)附錄B的圖B.1和圖B.2。8.2.3結(jié)果計(jì)算和表述試樣中蜂毒溶血肽的含量X,以質(zhì)量分?jǐn)?shù)毫克每克(mg/g)表示,按式(1)計(jì)算: (1)式中:p——試樣液中對(duì)應(yīng)的蜂毒溶血肽的質(zhì)量濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);測(cè)定結(jié)果用重復(fù)性條件下兩次獨(dú)立測(cè)定后的算術(shù)平均值表示,保留三位有效數(shù)字。9檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度9.1靈敏度本方法檢測(cè)限為15mg/g,定量限為50mg/g。9.2準(zhǔn)確度本方法在50mg/g~600mg/g添加濃度范圍內(nèi),其回收率范圍為85.1%~108.4%。9.3精密度本方法的批內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差≤10%,批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差≤15%。4GB/T40486—2021(資料性)液相色譜梯度洗脫條件液相色譜梯度洗脫條件見(jiàn)表A.1。表A.1液相色譜梯度洗脫條件時(shí)間/minA/%B/%075吸光度GB/T40486—2021吸光度(資料性)蜂毒溶血肽標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和蜂毒干粉樣品液相色譜圖蜂毒溶血肽標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜圖見(jiàn)圖B.1。700-500-400300-200-10007.10保留時(shí)間/min蜂毒干粉樣品液相色譜圖見(jiàn)圖B.2。7.10蜂毒溶血肽6004002000
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