蘇木素伊紅染色法開展誘導(dǎo)痰ECP檢測對哮喘患兒的診斷價值

蘇木素伊紅染色法開展誘導(dǎo)痰ECP檢測對哮喘患兒的診斷價值摘要】目的探討誘導(dǎo)痰ECP檢測用于哮喘患兒診斷的臨床價值。方法選取2024年2月至2024年6月在我院呼吸科門診及住院的支氣管哮喘患兒92例，按照臨床癥狀及肺功能情況分為哮喘緩解組、輕度間歇組、中重度組，同期選取入院健康體檢的正常兒童24例作為對照組，各組患兒均行痰液誘導(dǎo)及收集并進(jìn)行含量檢測，同時檢測肺通氣功能，對比分析各組間ECP及肺通氣功能的差異，探討ECP含量與肺通氣功能指標(biāo)的相關(guān)性。結(jié)果哮喘緩解期患兒與對照組ECP水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05），而輕度間歇組、中重度組患兒的ECP水平較哮喘緩解組、對照組顯著升高（p【關(guān)鍵詞】哮喘誘導(dǎo)痰ECP蘇木素伊紅染色

doi:10.3969/j.issn.1671-332X.2024.07.029

哮喘，即慢性持續(xù)性支氣管哮喘，是臨床較為常見的呼吸道慢性炎癥性疾病，尤其對于兒童而言，其臨床多表現(xiàn)為咳嗽、喘息、胸悶等癥狀，嚴(yán)重者往往會導(dǎo)致呼吸困難，從而威脅患者的生命安全［1］。目前，哮喘的發(fā)病率呈上升趨勢，因此，如何快速有效的診斷對于哮喘的治療和預(yù)防具有重要意義。近年來對于哮喘的發(fā)病機制研究逐漸深入，多是由于氣道炎癥的發(fā)生引發(fā)的氣道可逆性阻塞，炎癥細(xì)胞在哮喘的發(fā)生及發(fā)展中起到關(guān)鍵的作用，這其中包括嗜酸性粒細(xì)胞(Eosinoohil，EOS)、肥大細(xì)胞、T細(xì)胞等等，尤其是EOS最具有特征性［2-3］。有研究顯示，哮喘患者的嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白(ECP)水平顯著升高，且與哮喘的發(fā)病程度有關(guān)［4］。本研究選取2024年2月~2024年6月在我院呼吸科門診及住院的支氣管哮喘患兒92例，并同期選取入院健康體檢的正常兒童24例作為對照組，收集誘導(dǎo)痰及行ECP含量及肺通氣功能檢測，對比分析各組間ECP及肺通氣功能的差異，探討ECP含量與肺通氣功能指標(biāo)的相關(guān)性，以期為哮喘的臨床診斷提供理論依據(jù)。

1對象與方法

1.1研究對象

選取2024年2月~2024年6月在我院呼吸科門診及住院的支氣管哮喘患兒92例為研究對象，所有患兒均參照中華醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)分會呼吸學(xué)組制定的《兒童支氣管哮喘防治常規(guī)》［5］中所述診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行確診，哮喘患兒按照臨床癥狀及肺功能情況分為哮喘緩解組、輕度間歇組、中重度組，其中哮喘緩解組患兒45例，男23例，女22例，年齡4~13歲，平均（7.83±2.84）歲；輕度間歇組34例，男19例，女15例，年齡5~13歲，平均年齡（7.76±2.62）歲，患兒近期內(nèi)無感染發(fā)生，于進(jìn)行測定前8h服用β2受體激動劑；中重度組患兒13例，男8例，女5例，年齡4~12歲，平均年齡（7.94±2.87）歲，哮喘發(fā)作期內(nèi)無感染發(fā)生并根據(jù)患兒的實際情況接受使用β2受體激動劑。此外，選取同期入院健康體檢的正常兒童24例作為對照組，男12例，女12例，年齡4~13歲，平均年齡（7.82±2.76）歲，24例兒童均未出現(xiàn)哮喘癥狀且無哮喘病家族史，近1月內(nèi)未發(fā)生肺部感染，同時排除心、肝、腎功能障礙者及患有過敏性疾病及自身免疫性疾病的兒童。經(jīng)兩兩對比，各組間患者的性別、年齡等一般資料的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05），具有可比性。

1.2研究方法

1.2.1痰液誘導(dǎo)對于痰液的誘導(dǎo)和采集，采用霧化吸入高滲鹽水法進(jìn)行。行痰液誘導(dǎo)前進(jìn)行肺功能檢查，包括一秒最大呼氣量（FEV1），以FEV1的下降程度不低于初測值的20%為準(zhǔn)，觀察患兒是否耐受痰誘導(dǎo)過程，對于FEV1為等于或小于初測值的65%時，須先霧化吸入喘樂寧氣霧劑適量，以緩解胸悶、咳嗽等癥狀，對于FEV1下降50%以上時可囑患者霧化吸入4%~5%的高滲鹽水30min，以促進(jìn)患者肺部痰液的排出，無法自行咳出者可使用吸痰器吸出。本研究參照Pin［6］等研究報道的方法進(jìn)行，囑患兒吸入沙丁醇200μg，10min后采用清水漱口并清理鼻腔，后采用5%高滲鹽水進(jìn)行超聲霧化吸入，持續(xù)20min左右，用力咳出痰液置于培養(yǎng)皿內(nèi)，至少采集痰液量為0.6ml，4℃冰箱內(nèi)保存。

1.2.2痰液質(zhì)量控制取收集痰液適量，加入4倍體積0.1%二硫蘇糖醇（DTT），渦旋震蕩以充分混勻，37℃恒溫水浴10min，以裂解糖蛋白纖維絲間的二硫鍵從而溶解痰液，后采用48μm尼龍網(wǎng)過濾，除去黏液和碎片，3000r/min離心10min，分離上清，-80℃冷凍保存?zhèn)溆?，對于?xì)胞沉淀，采用4倍痰液體積的PBS緩沖液重懸，取適量加入新鮮配制的蘇木素-伊紅染色液進(jìn)行染色［7］，光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞活性、細(xì)胞計數(shù)及鱗狀上皮細(xì)胞的百分比，其中以細(xì)胞活性>50%，鱗狀細(xì)胞計數(shù)1.2.3ECP測定對于ECP的測定，采用夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法進(jìn)行，其中，ECPELISA檢測試劑盒試驗操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.4肺通氣功能測定肺通氣功能檢測，采用肺功能測定系統(tǒng)按照美國胸科協(xié)會(ATS)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，檢測前經(jīng)經(jīng)驗豐富的技術(shù)人員進(jìn)行環(huán)境參數(shù)、容量定標(biāo)校準(zhǔn)，記錄各測試人員的腎功能高、體重等臨床資料，并培訓(xùn)相關(guān)檢測需做的規(guī)定動作。測試時囑患兒上身坐直，頭部自然水平，佩戴鼻夾、口器等以包緊口唇，以防漏氣，同時要求患兒保持放松，或松解過緊的腰帶及衣服領(lǐng)口進(jìn)行測試。重復(fù)測量三次，取最佳值，記錄各患兒的用力肺活量(FVC)、一秒鐘用力呼氣量(FEV1)，計算FEV1.0%（第一秒用力肺活量占用力肺活量的百分比）。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均采用spss17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行，其中，ECP表達(dá)水平、肺通氣功能指標(biāo)等計量資料采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間對比行t檢驗；對于ECP表達(dá)水平及肺通氣功能的相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)性分析，均以p2結(jié)果

2.1各組痰液的ECP水平比較

由表1可見，哮喘緩解期患兒雖較對照組ECP水平稍微升高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=，P=），而輕度間歇組、中重度組患兒的ECP水平較哮喘緩解組、對照組顯著升高（p2.2各組患兒肺通氣功能指標(biāo)間比較

對于肺通氣功能指標(biāo)的檢測發(fā)現(xiàn)，對于FCV而言，哮喘緩解組患者與對照組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=0.222，p=0.825），而輕度間歇組及中重度組患兒較哮喘緩解組、對照組顯著降低（p

2.3ECP含量與肺通氣功能指標(biāo)的相關(guān)性分析

對ECP含量與肺通氣功能指標(biāo)行Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，誘導(dǎo)痰液內(nèi)ECP含量與FVC和FEV1.0%呈負(fù)相關(guān)性，r值分別為-0.546、-0.573，p均＜0.01，表明誘導(dǎo)痰ECP含量能夠有效的反映肺通氣功能。

3討論

哮喘多以氣道慢性炎癥、高反應(yīng)性和氣流阻塞為主要臨床特征，炎癥是導(dǎo)致其發(fā)生及發(fā)展的關(guān)鍵因素，多種炎癥細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)都參與哮喘的形成，其中，嗜酸性粒細(xì)胞浸潤最為顯著。嗜酸性粒細(xì)胞經(jīng)活化可分泌ECP，其作為毒性蛋白，可破壞呼吸道上皮組織，使得腺體分泌亢進(jìn)、血漿滲漏，導(dǎo)致組織胺釋放增加，從而導(dǎo)致炎癥發(fā)生［8］。近年來，誘導(dǎo)痰液的相關(guān)指標(biāo)檢測逐漸廣泛應(yīng)用，其作為直接來源于氣道分泌物，對于反映氣道炎癥具有良好的效果，同時作為非侵入性的檢測方法，安全無創(chuàng)，重復(fù)性好，且兒童易于接受［9］。甘明［10］等在對EOS、ECP及IL-13在哮喘發(fā)病機制的作用研究發(fā)現(xiàn)，支氣管哮喘急性期患者的誘導(dǎo)痰液EOS、ECP含量較健康對照組明顯升高（p本研究結(jié)果顯示，哮喘緩解期患兒與對照組ECP水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05），與之前文獻(xiàn)報道［11］結(jié)果一致，可能是由于患兒個體差異的存在所致；輕度間歇組、中重度組患兒的ECP水平較哮喘緩解組、對照組顯著升高（p綜上所述，誘導(dǎo)痰內(nèi)ECP含量檢測能有效反映肺通氣功能，從而判斷哮喘病情的變化，可作為中重度哮喘及病情嚴(yán)重程度評估的臨床指標(biāo)，對于哮喘的臨床診斷和治療指導(dǎo)具有重要意義。

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