輔劑及相關產品的使用技術學習培訓課件

輔劑及相關產品的使用1、內毒素指示劑用途用于干熱滅活內毒素程

序的驗證相關規(guī)定中國藥典1、加入內毒素的量不小于1000單位;2、內毒素至少下降3個對數(shù)單位;21、內毒素指示劑美國藥典（摘要）1、至少應能回收1000EU的內毒素；2、測定的內毒素濃度在標示內毒素濃度的2倍范圍內；3、指示劑應可以準確指示以3個對數(shù)級的內毒素衰減;4、指示劑應經過檢驗不含干擾試驗的因素;5、指示劑的丟棄處置：250℃除熱原不少于120分鐘。31、內毒素指示劑使用方法1、保留1~2支指示劑作為未經干熱對照品；2、除去指示劑標簽，開啟；3、在鋁箔紙上做好標記，封閉瓶口；4、把指示劑放置在烤箱的不同位置，依據烤箱的大小及冷點分布情況來確定指示劑的數(shù)量，一般放置10~15個點（角落、中間點、冷點）。指示劑應與除熱原物料夾放在一起；45、按滅活內毒素程序進行干烤（滿載）；6、對經滅活程序后的指示劑進行鱟試驗測試；7、各干烤點的數(shù)據分析。51、內毒素指示劑分析方法舉例（凝膠半定量法）內毒素指示劑：標示效價1250EU/支鱟試劑：標示靈敏度（λ）0.125EU/ml6內毒素指示劑使用時要注意查看鱟試劑的批號是否和效價分析報告書的批號一致！7分析方法舉例（凝膠半定量法）未經干熱的指示劑效價確認（按標示效價稀釋至4λ、2λ、λ、λ/2、λ/4）830s1.8ml1.2ml30s12.5EU/ml30s

30s1250EU/ml0.2ml指示劑BET水1.0ml125EU/ml0.2ml1.8ml1.25EU/ml0.2ml1.8ml30s0.8ml0.125EU/ml1.0ml1.0ml0.06EU/ml30s1.0ml1.0ml0.03EU/ml30s1.0ml1.0ml0.25EU/ml30s1.0ml1.0ml10，000倍20，000倍40，000倍5，000倍0.5EU/ml2，500倍混合10分鐘內毒素指示劑加入BET水的量和混合的時間參照效價分析報告書經干熱的指示劑經干熱的指示劑需稀釋至出現(xiàn)陰性結果的濃度9

30sS10.2ml指示劑BET水1.0mlS101.8ml混合10分鐘結果計算及判斷可回收內毒素量10未經干熱的指示劑反應終點倍數(shù)未經干熱指示劑每瓶含量（EU/瓶)稀釋倍數(shù)25005000100002000040000平

行

管

200000.125X20000X1.0=2500100000.125X10000X1.0=1250＋＋－－－＋＋＋＋＋Rc=antilg2lg2500+lg1250=1767.8(EU/瓶)經干熱的指示劑（稀釋倍數(shù)）反應終點倍數(shù)經干熱指示劑每瓶含量（EU/瓶)1（4數(shù)量級驗證）10（3數(shù)量級驗證）平

行

管

<1<0.125X1X1.0=0.125<1<0.125X1X1.0=0.125－－殘余內毒素量Rs<antilg2lg0.125+lg0.125即Rs<0.125(EU/瓶)內毒素衰減lgRd=lgRc-lgRs=lg1767.8-lg0.125=4.15中國藥典要求lgRd≥3－－11問題討論1、我收到的內毒素指示劑怎么是空安瓿，看起來沒有什么東西，是不是發(fā)錯貨？2、為什么要使用指定批號的鱟試劑？可不可以用同靈敏度的鱟試劑替代？3、用剩的指示劑怎么處置？122、稀釋劑I、稀釋劑II用途稀釋劑是一種細菌內毒素檢查輔助劑，用于消除鱟試驗的干擾因素。《中國藥典》細菌內毒素檢查法允許使用輔劑來消除鱟試驗干擾。稀釋劑I含有一定濃度的二價陽離子，用于枸櫞酸鹽類抗凝劑及血液保養(yǎng)液的細菌內毒素檢查稀釋劑II用于調節(jié)樣品的pH值13用法稀釋劑主要用于對樣品的稀釋必須要經過驗證試驗，確認對試驗無干擾后才能用于日常檢查僅用于配套本公司鱟試劑使用，勿用于其它廠家的鱟試劑產品14應用舉例15樣品S0.4mlS51.6ml1.0ml1.0mlSMVDBET水S10稀釋劑用稀釋劑稀釋樣品，以達到消除干擾的目的，必須做干擾驗證試驗3、抗增液用途抗增液是一種細菌內毒素檢查輔助劑，用于阻斷β-葡聚糖的干擾（假陽性）使用方法需要使用抗增液時，用抗增液來代替BET水去復溶鱟試劑即可僅適用配套本公司鱟試劑使用，切勿用于其它廠家的鱟試劑產品16應用舉例材料樣品：人血白蛋白，國產，低溫乙醇工藝，熱原檢查合格，L=1.33EU/ml鱟試劑：0.1ml/支，靈敏度λ=0.125EU/ml抗增液：安度斯產品，0.6ml/支MVD=cL/λ=10倍17干擾驗證試驗18溶液編號CD溶液內容E0.25E0.125E0.06E0.03W平行管溶液編號BA溶液內容S10E0.25S10E0.125S10E0.06S10E0.03S10平行管溶液編號BA溶液內容S10E0.25S10E0.125S10E0.06S10E0.03S10平行管0.1mlBET水復溶0.1ml抗增液復溶＋＋＋＋＋＋＋＋－－－－－－－－－－－－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋用BET水復溶的鱟試劑反應存在干擾，增強用抗增液復溶的鱟試劑反應干擾消除4、內毒素分散劑用途內毒素分散劑是一種細菌內毒素檢查輔助劑,用于分離和分散與藥品、生物制品等供試品結合的內毒素分子。使用方法(1)作干擾試驗驗證供試品對鱟試驗確實有干擾時,才需要使用本品。(2)使用內毒素分散劑稀釋供試品至合適的濃度。(4)對用內毒素分散劑稀釋的供試品溶液作干擾試驗。應至少對3批樣品進行干擾驗證試驗。19注意事項本品只供實驗室使用，不用于人體或動物。本品只適用于使用安度斯公司的鱟試劑進行鱟實驗的樣品制備。不要用該稀釋劑去復溶鱟試劑。本品為無色清澈時才可使用。205、細菌內毒素快速檢測試劑盒用途用于生產過程中，細菌內毒素的限量快速檢測特點使用方便

快速檢測盒內配置與國際使用接軌的單次試驗鱟試劑（TAL）。使用這種單次試驗TAL時，直接加0.2ml樣品復溶試劑兼檢測，不必象使用0.1ml/支TAL那樣要先加0.1ml的水復溶試劑，然后再加0.1ml樣品檢測。21

同一試劑盒有多個靈敏度供選擇

我們在每一批號的快速檢測試劑盒上都標示有至少兩個可供選擇的靈敏度。使用時選擇不同的靈敏度(λ0)對應有不同的反應時間(T0)。如批號為0409082的快速檢測試劑盒，靈敏度標示如下：22λ0T00.25EU/mL20±1分鐘0.125EU/mL25±1分鐘

CSE無需稀釋

我們我們知道，在細菌內毒素檢查過程中，最繁瑣耗時的操作就是稀釋標準內毒素（CSE）?？焖贆z測試劑盒配備了無需稀釋一步到位的CSE，使實驗真正快速方便23配套器具，如虎添翼

在使用快速檢測試劑盒時，如果配合使用湛江安度斯公司提供的可調移液器、采樣瓶、可定時的干式恒溫儀等實驗器具，可真正體會到BET實驗的快速、準確及方便。

24試劑盒組成25名稱規(guī)格數(shù)量鱟試劑TAL0.2ml/支λ：0.125EU/ml/0.25EU/ml8支工作標準內毒素CSE___ng/支；___EU/ng1支BET水2ml/支1支使用方法以λ=0.125EU/ml為例，加