CAR-T細(xì)胞療法面臨的挑戰(zhàn)與應(yīng)對(duì)策略

CAR-T細(xì)胞療法面臨的挑戰(zhàn)與應(yīng)對(duì)策略北京義翹神州科技股份有限公司目錄CAR-T細(xì)胞治療研究進(jìn)展1綜合性CAR-T細(xì)胞療法開發(fā)解決方案3CAR-T細(xì)胞療法的機(jī)遇與挑戰(zhàn)2義翹神州23CAR-T細(xì)胞治療研究進(jìn)展義翹神州doi:10.1038/nrc.2016.97.CAR-T細(xì)胞治療的流程ChimericAntigenReceptorT-CellImmunotherapy即為CAR-T療法，嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫療法doi:10.1002/cam4.5551.Epub2022Dec30.全球已上市9款CAR-T產(chǎn)品4義翹神州CAR-T細(xì)胞治療研究進(jìn)展全球市場(chǎng)情況全球CAR-T細(xì)胞療法市場(chǎng)的歷史及預(yù)測(cè)市場(chǎng)規(guī)模（2017年至2030年）國內(nèi)市場(chǎng)規(guī)模：據(jù)Frost&Sullivan預(yù)測(cè)，2030年國內(nèi)CAR-T市場(chǎng)將達(dá)到約289億元數(shù)據(jù)來源：Frost&Sullivan預(yù)測(cè)，光大證券研究所自2017年CAR-T產(chǎn)品首次獲批上市以來，全球CAR-T細(xì)胞治療市場(chǎng)迅速擴(kuò)大全球已上市CAR-T產(chǎn)品歷年銷售總額5CAR-T細(xì)胞治療研究進(jìn)展義翹神州6義翹神州1015Studiesfoundfor:CAR-TCELL全球臨床研究情況CAR-T細(xì)胞治療研究進(jìn)展7義翹神州CAR-T細(xì)胞治療研究進(jìn)展doi:10.1186/s13045-023-01492-8.研發(fā)布局情況國內(nèi)實(shí)體瘤靶點(diǎn)臨床階段CAR-T產(chǎn)品8義翹神州CAR-T細(xì)胞治療研究進(jìn)展企業(yè)候選管線靶點(diǎn)適應(yīng)癥臨床進(jìn)展科濟(jì)藥業(yè)CT041Claudin18.2胃癌/食管胃結(jié)合部腺癌2/3期CT011GPC3肝細(xì)胞癌1期原啟生物Ori-C101GPC3肝細(xì)胞癌1期博生吉TAA06B7-H3神經(jīng)母細(xì)胞瘤1期重慶精準(zhǔn)C-4-29CD70腎細(xì)胞癌1期斯丹賽GCC19CART鳥苷酸環(huán)化酶2C結(jié)直腸癌1期（美）重慶精準(zhǔn)C-13-60CEA結(jié)直腸癌、胃癌和食管癌IND通過藍(lán)盾生物L(fēng)D013間皮素卵巢癌IND通過拓新天成TX103（未公開）泛癌種實(shí)體瘤IND通過傳奇生物L(fēng)B2102DLL3小細(xì)胞肺癌IND通過（美）科棋藥業(yè)KQ-L6（未公開）TM4SF1表達(dá)陽性的復(fù)發(fā)/難治性晚期實(shí)體瘤22.9申報(bào)IND凱地醫(yī)療KD-025MLG3DL肝癌、直結(jié)腸癌、膠質(zhì)癌等實(shí)體癌22.12申報(bào)IND上海細(xì)胞治療集團(tuán)--間皮素惡性間皮瘤22.12申報(bào)IND易慕峰IMC002Claudin18.2晚期消化系統(tǒng)腫瘤23.1申報(bào)IND目錄CAR-T細(xì)胞治療研究進(jìn)展1綜合性CAR-T細(xì)胞療法開發(fā)解決方案3CAR-T細(xì)胞療法的機(jī)遇與挑戰(zhàn)2義翹神州910義翹神州CAR-T療法的局限性CAR-T細(xì)胞療法的機(jī)遇與挑戰(zhàn)doi:10.1002/cam4.5551.Epub2022Dec30.11義翹神州doi:10.1038/s41408-021-00469-5.CAR-T細(xì)胞療法的機(jī)遇與挑戰(zhàn)CAR結(jié)構(gòu)的更新迭代12義翹神州doi:10.1186/s40364-022-00417-w.CAR-T細(xì)胞療法的機(jī)遇與挑戰(zhàn)CAR的可優(yōu)化結(jié)構(gòu)胞外結(jié)構(gòu)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)13CAR-T細(xì)胞療法的機(jī)遇與挑戰(zhàn)義翹神州自體CAR-T商業(yè)化中面臨的挑戰(zhàn)個(gè)性化定制導(dǎo)致制備和檢測(cè)的周期長(zhǎng)，無法立即進(jìn)行治療患者T細(xì)胞質(zhì)量不同，制備失敗的風(fēng)險(xiǎn)很大，批間差異和質(zhì)控難度也增加難以大批量制備所需細(xì)胞費(fèi)用高昂，產(chǎn)能利用率和病毒載體安全性以及有效性問題doi:10.1016/j.jconrel.2019.12.047.14義翹神州通用型CAR-T的研究從健康志愿者獲取T細(xì)胞并進(jìn)行基因編輯敲除相關(guān)基因以及轉(zhuǎn)入CAR基因后制成的CAR-T細(xì)胞，最主要的優(yōu)勢(shì)在于不需要從患者體內(nèi)獲取T細(xì)胞進(jìn)行定制，而是可以做到現(xiàn)貨供應(yīng)，可立即用于臨床治療并方便開展多次回輸，節(jié)約時(shí)間和治療花費(fèi)。doi:10.3389/fimmu.2021.640082CAR-T細(xì)胞療法的機(jī)遇與挑戰(zhàn)15義翹神州

doi:10.3389/fimmu.2021.640082異體移植細(xì)胞攻擊宿主細(xì)胞引發(fā)移植物抗宿主?。℅vHD）：敲掉TCR的α或β一條鏈的恒定結(jié)構(gòu)域，消除TCR來避免GVHD宿主抗移植物反應(yīng)（HVG）阻礙異體細(xì)胞在體內(nèi)擴(kuò)增，療效較差：敲除β2-微球蛋白，阻止HLA-I表達(dá)，可以阻止宿主T細(xì)胞將治療用CRA-T細(xì)胞識(shí)別為外來細(xì)胞，以此來避免免疫排斥反應(yīng)基因編輯安全性檢測(cè)的手段：雜質(zhì)殘留，編輯效率提升、脫靶情況預(yù)測(cè)分析通用型CAR-T的限制CAR-T細(xì)胞療法的機(jī)遇與挑戰(zhàn)16義翹神州CAR-T的發(fā)展方向預(yù)期發(fā)現(xiàn)新靶點(diǎn)，或者使用雙靶點(diǎn)：血液疾病、實(shí)體瘤等優(yōu)化CAR結(jié)構(gòu)，增加CAR-T細(xì)胞的存活時(shí)間，提高CAR-T細(xì)胞療效，降低回輸后的不良反應(yīng)阻斷免疫檢查點(diǎn)、共表達(dá)增強(qiáng)細(xì)胞功能的細(xì)胞因子使用多種來源的細(xì)胞制備通用型CAR-T細(xì)胞：健康供者、iPSC誘導(dǎo)等溶瘤病毒、RNA疫苗其他免疫細(xì)胞等聯(lián)合使用目錄CAR-T細(xì)胞治療研究進(jìn)展1綜合性CAR-T細(xì)胞療法開發(fā)解決方案3CAR-T細(xì)胞療法的機(jī)遇與挑戰(zhàn)2義翹神州17助力CAR-T開發(fā)全流程CAR開發(fā)scFv/VHH開發(fā)抗體人源化高通量抗體生產(chǎn)檢測(cè)用細(xì)胞株構(gòu)建T細(xì)胞激活CD3抗體CD28抗體慢病毒包裝293培養(yǎng)基及補(bǔ)料液核酸酶核酸酶殘留檢測(cè)試劑盒細(xì)胞庫檢測(cè)CAR-T細(xì)胞制備擴(kuò)增GMP級(jí)細(xì)胞因子細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒流式抗體靶點(diǎn)蛋白細(xì)胞因子ELISA試劑盒18綜合性CAR-T細(xì)胞療法開發(fā)解決方案義翹神州CAR開發(fā)T細(xì)胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細(xì)胞制備、擴(kuò)增雜交瘤技術(shù)平臺(tái)噬菌體展示技術(shù)平臺(tái)單B細(xì)胞技術(shù)平臺(tái)19義翹神州綜合性CAR-T細(xì)胞療法開發(fā)解決方案20抗體人源化義翹神州鼠源VHH人-鼠嵌合抗體VHH-Fc人源化抗體高親和力抗體人源化親和力成熟抗體人源化服務(wù)流程：抗體序列CDR確認(rèn)抗體建模摸索人源抗體模板關(guān)鍵氨基酸確認(rèn)CDR移植抗體建模比對(duì)回復(fù)突變抗體表達(dá)親和力檢測(cè)綜合性CAR-T細(xì)胞療法開發(fā)解決方案CAR開發(fā)T細(xì)胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細(xì)胞制備、擴(kuò)增CAR開發(fā)T細(xì)胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細(xì)胞制備、擴(kuò)增SPR是制藥行業(yè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，被收錄進(jìn)《2020版中國藥典》BLI是全球增長(zhǎng)最快的非標(biāo)記（label-free）檢測(cè)技術(shù)scFv親和力檢測(cè)21義翹神州綜合性CAR-T細(xì)胞療法開發(fā)解決方案CAR開發(fā)T細(xì)胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細(xì)胞制備、擴(kuò)增EffectofhumanCD28antibodyonstimulatingIL-2secretionofCD4Tcellsco-activatedwithCD3antibody.

AntiCD28antibody：GMP-11524-H001

EffectofHumanCD3antibodyontheproliferationandIFN-gammasecretionofCD4+Tcell.

AntiCD3antibody：GMP-10977-H00122T細(xì)胞激活抗體產(chǎn)品信息靶點(diǎn)貨號(hào)純度（SEC-HPLC）內(nèi)毒素含量（EU/mg）HumanCD3(humanizedOKT3)GMP-10977-H001>95%<0.5HumanCD28GMP-11524-H001>95%<0.5義翹神州綜合性CAR-T細(xì)胞療法開發(fā)解決方案CAR開發(fā)T細(xì)胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細(xì)胞制備、擴(kuò)增慢病毒包裝是CAR-T制備過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)慢病毒滴度是決定CAR轉(zhuǎn)染陽性率的關(guān)鍵因素慢病毒懸浮包裝培養(yǎng)系統(tǒng)組成：培養(yǎng)基：無血清懸浮培養(yǎng)基（Cat：M293TII，M293CD1）轉(zhuǎn)染試劑：陽離子聚合物（Cat：STF02）補(bǔ)料液：培養(yǎng)基添加液（Cat：M293-SUPI）23義翹神州綜合性CAR-T細(xì)胞療法開發(fā)解決方案241.3.2工藝相關(guān)雜質(zhì)生產(chǎn)若使用了腫瘤細(xì)胞系（如Hela細(xì)胞）、致瘤細(xì)胞系，或攜帶有致癌基因、病毒來源序列的細(xì)胞（如HEK293T細(xì)胞），在確保無完整活細(xì)胞殘留的同時(shí)，需對(duì)DNA的殘留量和殘留片段大小進(jìn)行控制，合理擬定標(biāo)準(zhǔn)限度。如有可能，建議盡量將殘留DNA控制在10ng/劑以內(nèi)，DNA殘留片段的大小控制在200bp以下。慢病毒包裝過程中核酸殘留去除至關(guān)重要義翹神州綜合性CAR-T細(xì)胞療法開發(fā)解決方案CAR開發(fā)T細(xì)胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細(xì)胞制備、擴(kuò)增非限制核酸酶DNA/RNA超高的活性應(yīng)用場(chǎng)景廣泛使用量低，不易殘留慢病毒下游工藝微濾澄清0.45μm核酸酶處理超濾濃縮精純層析超濾濃縮除菌0.22μmGMP級(jí)核酸酶（cat：GMP-SSNP01）25義翹神州綜合性CAR-T細(xì)胞療法開發(fā)解決方案CAR開發(fā)T細(xì)胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細(xì)胞制備、擴(kuò)增中文名稱全能核酸酶貨號(hào)GMP-SSNP01CASNo.9025-65-4DMF

NO.35798提供劑型液體（甘油）/液體（無甘油）提供規(guī)格50kU/500kU/5000kU儲(chǔ)存條件-20℃--80℃成分2kU/μl工程細(xì)胞Escherichiacoli(E.coli)存儲(chǔ)液配方20mMTris,20mMNaCl,2mmMgCl2pH:8.0酶單位在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系內(nèi)30分鐘內(nèi)使OD260改變1.0的酶量核酸酶推薦使用條件核酸酶產(chǎn)品信息26義翹神州ConditionOptimal*Effective**Mg2+1-2mM1-10mMpH8.0-9.55.5-9.5Temperature37℃0-50℃Dithiothreitol(DTT)0-200mM>200mMMonovalentcation0-100mM0-400mMConcentration(Na+,etc.)PO43-0mM0-50mMTween200-0.8%0.80%Brij350-0.8%>0.8%綜合性CAR-T細(xì)胞療法開發(fā)解決方案CAR開發(fā)T細(xì)胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細(xì)胞制備、擴(kuò)增不同品牌核酸酶ELISA試劑盒檢測(cè)SuperNuclease含量不同品牌核酸酶ELISA試劑盒變性前后Benzonase?endonuclease核酸酶含量穩(wěn)定性準(zhǔn)確性專屬性KIT-SSNP01

測(cè)定范圍46.87-3000pg/mL

準(zhǔn)確性標(biāo)準(zhǔn)品回收率：80%-120%

精密度CV(<15%)

靈敏度11.72pg/mL可以準(zhǔn)確檢測(cè)出：Supernuclease核酸酶Benzonase?

核酸酶核酸酶殘留檢測(cè)試劑盒27義翹神州綜合性CAR-T細(xì)胞療法開發(fā)解決方案CAR開發(fā)T細(xì)胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細(xì)胞制備、擴(kuò)增生物安全細(xì)胞庫檢測(cè)28義翹神州1.2生產(chǎn)輔助細(xì)胞根據(jù)用途或功能，生產(chǎn)輔助細(xì)胞可能為病毒包裝細(xì)胞、滋養(yǎng)細(xì)胞（Feeder

cells）等，生產(chǎn)輔助細(xì)胞，應(yīng)符合來源和培養(yǎng)傳代歷史清除、安全性風(fēng)險(xiǎn)可控、進(jìn)行細(xì)胞庫分級(jí)管理（如適用）、檢驗(yàn)結(jié)果合格的基因原則。綜合性CAR-T細(xì)胞療法開發(fā)解決方案CAR開發(fā)T細(xì)胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細(xì)胞制備、擴(kuò)增29義翹神州國內(nèi)外對(duì)于細(xì)胞治療藥物中關(guān)鍵原材料的選擇有明確法規(guī)要求藥品級(jí)＞GMP級(jí)＞RUO級(jí)國內(nèi)/外法規(guī)名稱國內(nèi)《細(xì)胞治療產(chǎn)品研究與評(píng)價(jià)指導(dǎo)原則（試行）》-2017年《生物制品生產(chǎn)用原材料及輔料質(zhì)量控制》--中國藥典三部-2020年《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范-細(xì)胞治療產(chǎn)品附錄》-2022年《免疫細(xì)胞治療產(chǎn)品藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》-2022年國外USP<92>用于細(xì)胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)的生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子USP<1043>用于細(xì)胞、基因與組織工程產(chǎn)品的輔助材料/指導(dǎo)性通則EP5.2.12用于細(xì)胞和基因治療藥物產(chǎn)品生產(chǎn)的生物來源的原料ISO/TS20399-1:2018生物技術(shù)-細(xì)胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)過程中的輔料綜合性CAR-T細(xì)胞療法開發(fā)解決方案CAR開發(fā)T細(xì)胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細(xì)胞制備、擴(kuò)增質(zhì)量保證管理體系人員及培訓(xùn)管理體系廠房設(shè)施、設(shè)備管理體系原材料及供應(yīng)商管理體系文件和記錄管理體系所有文件和記錄均經(jīng)過QA審核或批準(zhǔn)GMP級(jí)質(zhì)量管理體系符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》體系符合ISO9001:2015和ISO13485:2016體系FDADMF備案質(zhì)量控制體系符合《中國藥典》2020年版三部通則符合USP<1043>AncillaryMaterialsForCell,Gene,andTissue-engineeredProducts產(chǎn)品安全性檢測(cè)體系細(xì)菌內(nèi)毒素＜5-10EU/mg宿主蛋白殘留檢測(cè)＜0.5μg/mg（500ppm）宿主DNA殘留檢測(cè)＜100pg/mg支原體檢測(cè)無菌檢測(cè)外源病毒檢測(cè)異常毒性檢測(cè)30文件齊全更規(guī)范更安全更穩(wěn)定義翹神州綜合性CAR-T細(xì)胞療法開發(fā)解決方案提供配套的產(chǎn)品手冊(cè)制劑形式：液體有效期原材料分類說明產(chǎn)品原產(chǎn)地說明TSE/BSE聲明穩(wěn)定性數(shù)據(jù)營業(yè)執(zhí)照質(zhì)量管理體系認(rèn)證證書產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告書REACH聲明MSDS…31申報(bào)無憂！義翹神州綜合性CAR-T細(xì)胞療法開發(fā)解決方案32更規(guī)范更安全更穩(wěn)定文件齊全義翹神州提供高品質(zhì)的GMP級(jí)細(xì)胞因子靶點(diǎn)貨號(hào)內(nèi)毒素支原體檢測(cè)無菌檢測(cè)宿主DNA殘留IL-2GMP-11848-HNAE<0.005EU/μgNegativeNOGrowth<100pg/mgIL-7GMP-11821-HNAE<0.01EU/μgNegativeNOGrowth<100pg/mgIL-15GMP-10360-HNAE<0.01EU/μgNegativeNOGrowth<100pg/mgIL-21GMP-10584-HNAE<0.005EU/μgNegativeNOGrowth<100pg/mg義翹神州活細(xì)胞比例細(xì)胞群或亞群比例目的細(xì)胞比例CAR-T細(xì)胞陽性率檢測(cè)JurkatHela33細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品列表產(chǎn)品名稱貨號(hào)AnnexinV-FITC/7-ADD凋亡檢測(cè)試劑盒APK10448-FAnnexinV-PE/7-ADD凋亡檢測(cè)試劑盒APK10448-P與國外品牌對(duì)比，準(zhǔn)確區(qū)分凋亡早、晚期細(xì)胞義翹神州綜合性CAR-T細(xì)胞療法開發(fā)解決方案CAR開發(fā)T細(xì)胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細(xì)胞制備、擴(kuò)增活細(xì)胞比例細(xì)胞群或亞群比例目的細(xì)胞比例使用CD4抗體（Cat：10400-MM08F）和CD8抗體（Cat：10980-MM28-F）通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)人外周血淋巴細(xì)胞表面CD4和CD8分子的表達(dá)。流式抗體檢測(cè)CAR-T細(xì)胞群及亞群比例34義翹神州綜合性CAR-T細(xì)胞療法開發(fā)解決方案CAR-T細(xì)胞陽性率檢測(cè)CAR開發(fā)T細(xì)胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細(xì)胞制備、擴(kuò)增活細(xì)胞比例細(xì)胞群或亞群比例目的細(xì)胞比例靶蛋白預(yù)標(biāo)記熒光素基團(tuán)簡(jiǎn)化檢測(cè)流程，節(jié)約時(shí)間減少非特異熒光標(biāo)記蛋白01分子量小，幾乎不影響蛋白活性鏈霉親和素-生物素高特異結(jié)合高親和力、高靈敏度生物素標(biāo)記蛋白02可用熒光標(biāo)記二抗進(jìn)行檢測(cè)具有高靈敏度可能會(huì)引起非特異非標(biāo)記蛋白03CA