高效液相色譜法習(xí)題

第12章高效液相色譜法習(xí)題（一）選擇題單選題1.在高效液相色譜中影響柱效的主要因素是(

)A渦流擴(kuò)散

B分子擴(kuò)散

C傳質(zhì)阻力

D輸液壓力2.在高效液相色譜中，提高柱效能的有效途徑是(

)A提高流動(dòng)相流速

B采用小顆粒固定相C提高柱溫

D采用更靈敏的檢測(cè)器3.高效液相色譜法的分離效果比經(jīng)典液相色譜法高，主要原因是(

)A流動(dòng)相種類(lèi)多

B操作儀器化

C采用高效固定相

D采用高靈敏檢測(cè)器4.在高效液相色譜中，通用型檢測(cè)器是(

)A紫外檢測(cè)器

B熒光檢測(cè)器

C示差折光檢測(cè)器

D電導(dǎo)檢測(cè)器5.HPLC與GC的比較，可忽略縱向擴(kuò)散項(xiàng)，這主要是因?yàn)?

)A

柱前壓力高

B

流速比GC的快C

流動(dòng)相黏度較小

D

柱溫低6．液相色譜定量分析時(shí)，要求混合物中每一個(gè)組分都出峰的是(

)A

外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法

B

內(nèi)標(biāo)法C

面積歸一化法

D

外標(biāo)法7．下述四種方法中最適宜分離異構(gòu)體的是是(

)A

吸附色譜

B

反離子對(duì)色譜

C

親和色譜

D

空間排阻色譜8．在液相色譜中，梯度洗脫適用于分離(

)A異構(gòu)體

B沸點(diǎn)相近，官能團(tuán)相同的化合物

C沸點(diǎn)相差大的試樣

D極性變化范圍寬的試樣9．在HPLC中，范氏方程中對(duì)柱效影響可以忽略不計(jì)的因素是(

)

A

渦流擴(kuò)散

B

縱向擴(kuò)散

C

固定相傳質(zhì)阻力

D

流動(dòng)相傳質(zhì)阻力10．當(dāng)用硅膠為基質(zhì)的填料作固定相時(shí)，流動(dòng)相的pH范圍應(yīng)為(

)

A在中性區(qū)域

B5一8

C1一14

D2一811．高效液相色譜法中，常用的流動(dòng)相有水、乙腈、甲醇、正己烷，其極性大小順序?yàn)?

)

A乙腈>水>甲醇>正己烷

B乙腈>甲醇>水>正己烷

C水>乙腈>甲醇>正己烷

D水>甲醇>乙腈>正己烷12．高效液相色譜法中,使用高壓泵主要是由于(

)

A可加快流速，縮短分析時(shí)間

B高壓可使分離效率顯著提高C采用了細(xì)粒度固定相所致

D采用了填充毛細(xì)管柱13．液相色譜的H-u曲線（

）。

A與氣相色譜的一樣，存在著Hmin

BH隨流動(dòng)相的流速增加而下降

CH隨流動(dòng)相的流速增加而上升

DH受u影響很小14.與氣相色譜相比，在液相色譜中（

）。

A分子擴(kuò)散項(xiàng)很小，可忽略不計(jì)，速率方程式由兩項(xiàng)構(gòu)成

B渦流擴(kuò)散項(xiàng)很小，可忽略不計(jì)，速率方程式由兩項(xiàng)構(gòu)成

C傳質(zhì)阻力項(xiàng)很小，可忽略不計(jì)，速率方程式由兩項(xiàng)構(gòu)成

D速率方程式同樣由三項(xiàng)構(gòu)成，兩者相同15．液相色譜中不影響色譜峰擴(kuò)展的因素是（

）。

A渦流擴(kuò)散項(xiàng)

B分子擴(kuò)散項(xiàng)

C傳質(zhì)擴(kuò)散項(xiàng)

D柱壓效應(yīng)16．在液相色譜中，常用作固定相又可用作鍵合相基體的物質(zhì)是（

）。

A分子篩

B硅膠

C氧化鋁

D活性炭17．樣品中各組分的出柱順序與流動(dòng)相的性質(zhì)無(wú)關(guān)的色譜是（

）。

A離子交換色譜

B環(huán)糊精色譜

C親和色譜

D凝膠色譜18．高效液相色譜法中，對(duì)于極性成分，當(dāng)增大流動(dòng)相的極性，可使其保留值（

）。A不變

B增大

C減小

D不一定19．在反相色譜法中，若以甲醇-水為流動(dòng)相，增加甲醇的比例時(shí)，組分的容量因子k與保留時(shí)間tR的變化為（

）。

Ak與tR增大

Bk與tR減小

Ck與tR不變

Dk增大，tR減小多選題20．下列檢測(cè)器中，不屬于高效液相色譜中的檢測(cè)器是（

）A紫外檢測(cè)器

B氫火焰離子化檢測(cè)器

C熒光檢測(cè)器

D氮磷檢測(cè)器

E示差折光檢測(cè)器21．化學(xué)鍵合固定相具備下列何種特點(diǎn)（

）A固定液不易流失

B選擇性好

C不適用于梯度洗脫

D柱效高

E易和組分形成氫鍵吸附22．高效液相色譜法中，不能用于梯度洗脫實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)器為（

）A紫外檢測(cè)器

B示差折光檢測(cè)器

C熒光檢測(cè)器

D電化學(xué)檢測(cè)器23．梯度洗脫是將兩種或兩上性質(zhì)不同但能互溶的溶劑，按一定的程序連續(xù)改變其配比進(jìn)行洗脫，此方式可改變（

）A流動(dòng)相的極性

B流動(dòng)相的溫度

C被測(cè)組分的分離效果

D流動(dòng)相的流速24．在高效液相色譜法中，選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)注意（

）A對(duì)被分離的組分有適宜的溶解度

B黏度大C與檢測(cè)器匹配

D與固定相不互溶25．評(píng)價(jià)高效液相色譜柱柱效的指標(biāo)是（

）A理論塔板高度

B分配比

C理論塔板數(shù)

D分離度

26．高效液相色譜法的定量指標(biāo)為（

）A相對(duì)保留值

B峰面積

C峰高

D半峰寬27．高效液相色譜中，提高流動(dòng)相的流速可以（

）A減少渦流擴(kuò)散

B降低保留時(shí)間C改變相對(duì)保留值

D增大傳質(zhì)阻力項(xiàng)28．下列因素影響高效液相色譜塔板高度的是（

）A固定相粒度

B流動(dòng)相的流速C色譜柱長(zhǎng)度

D色譜柱直徑29．高效液相色譜法分離不同組分的先決條件是（

）A色譜柱要長(zhǎng)

B流動(dòng)相流速要大C各組分的分配系數(shù)不等

D理論塔板數(shù)要多（二）填空題1．高效液相色譜儀一般由

、

、

、

、

和

等部分組成。2．高效液相色譜中常用的檢測(cè)器主要包括

、

、

、

、

和

等。3．高效液相色譜中的洗脫方式主要包括

和

，其中

類(lèi)似于氣相色譜中的程序升溫，前者連續(xù)改變的是流動(dòng)相的

，而不是溫度。5．高效液相色譜的類(lèi)型主要包括

、

、

、

和

等。6．在液－液分配色譜中，對(duì)于親水固定液采用

流動(dòng)相，即流動(dòng)相的極性

___________（大于或小于）_固定相的極性稱(chēng)為正相分配色譜。7．正相分配色譜適用于分離

化合物、極性

（大或小）的組分先流出、極性

（大或小）的組分的后流出。8．流動(dòng)相常用的脫氣方法有

、

和

。9．高效液相色譜中的高壓泵按工作原理分為

和

兩大類(lèi)。11．離子對(duì)色譜法是把

加人流動(dòng)相中，被分析樣品離子與

生成中性離子對(duì)，從而增加了樣品離子在非極性固定相中的

，使

增加，從而改善分離效果。14．高效液相色譜法中，如果色譜柱超載則會(huì)造成柱效_______，峰形變________。17．在液相色譜中，為改善分離度并調(diào)整出峰時(shí)間，可通過(guò)改變流動(dòng)相

和______的方法達(dá)到。18．在液相色譜中，速率理論方程中的

項(xiàng)很小，可忽略不計(jì)，VanDeemter方程式可寫(xiě)成

。19．通過(guò)化學(xué)反應(yīng)，將

鍵合到

表面，此固定相稱(chēng)為化學(xué)鍵合固定相。21．液相色譜流動(dòng)相應(yīng)使用

（高或低）黏度溶劑，可減小溶質(zhì)的

，有利于提高柱效。22．在液相色譜中，

色譜特別適合于分離異構(gòu)體，

洗脫方式適用于分離極性變化范圍寬的試樣。

23．以O(shè)DS鍵合固定相，以甲醇一水為流動(dòng)相時(shí)的色譜為

色譜（正相或反相）。24．用凝膠為固定相，利用凝膠的

與被分離組分分子

間的相對(duì)大小關(guān)系，而分離、分析的色譜法，稱(chēng)為空間排阻（凝膠）色譜法。凝膠色譜的選擇性只能通過(guò)選擇合適的

來(lái)實(shí)現(xiàn)。25．在正相色譜中，極性的

（強(qiáng)或弱）組分先出峰，極性的

（強(qiáng)或弱）組分后出峰。（三）判斷題1．熒光檢測(cè)器是高效液相色譜法的通用型檢測(cè)器。（

）2．檢測(cè)器性能好壞將對(duì)組分分離產(chǎn)生直接影響。

（

）3．面積歸一化法只能適用于檢測(cè)器對(duì)所有組分均有響應(yīng)的情況。

（

）4．高效液相色譜中常采用程序升溫來(lái)提高分離效果、改善峰形、降低檢測(cè)限。（

）

5．VanDeemter方程用于高效液相色譜時(shí)，Cu項(xiàng)可以忽略不計(jì)。（

）6．在液相色譜中為避免固定相的流失，流動(dòng)相與固定相的極性差別越大越好。（

）7．在反相高效液相色譜中，流動(dòng)相的極性較固定相大。適合于分離極性較性組分。（

）

8．流動(dòng)相的黏度影響高效液相色譜柱柱效，黏度越小，柱效越高。

（

）

9．高效液相色譜法采用梯度洗脫，是為了改變被測(cè)組分的保留值，提高分離度。（

）10．示差折光檢測(cè)器是屬于通用型檢測(cè)器，適于梯度淋洗色譜。（

）11．化學(xué)鍵合固定相具有固定液不易流失，傳質(zhì)速度快，柱效高，熱穩(wěn)定性好，選擇性好等特點(diǎn)，可用梯度洗脫。（

）12．液相色譜的流動(dòng)相又稱(chēng)為淋洗液，改變淋洗液的組成、極性可顯著改變組分分離效果。（

）13．高效液相色譜法中，若采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量時(shí)，選用的內(nèi)標(biāo)物應(yīng)為樣品中不含有的純物質(zhì)。（

）14．高效液相色譜能分離的物質(zhì)都不能用氣相色譜法分離。（

）

15．在液相色譜中，流動(dòng)相的流速大小對(duì)柱效影響不大。（

）16．液相色譜的H-u曲線與氣相色譜的H-u曲線一樣，流速都存在一個(gè)最低點(diǎn)。（

）17．液相色譜的中引起色譜擴(kuò)展的主要原因是縱向擴(kuò)散項(xiàng)。（

）18．正相鍵合色譜的固定相為非（弱）極性固定相，反相色譜的固定相為極性固定相。（

）19．用凝膠色譜分離樣品時(shí)，若分離情況很差，可考慮改變流動(dòng)相的組成以改善分離效果

（

）

20．高效液相色譜中，流動(dòng)相的流速越大，傳質(zhì)阻力項(xiàng)越大，柱效越低。（

）

21．紫外檢測(cè)器因?qū)α鲃?dòng)相溫度和流速非常敏感，所以不能用于梯度洗脫。（

）22．高效液相色譜法中使用的最多的固定相為化學(xué)鍵合固定相，它是用化學(xué)反應(yīng)的方法將固定液的官能團(tuán)鍵合在載體表面上而形成的。

（

）23．化學(xué)鍵合固定相包括非極性、中等極性和極性三類(lèi)，廣泛使用的十八烷基（C18或ODS）鍵合固定相為非極性，用于分離非極性及中等極性的物質(zhì)。（

）24．高效液相色譜所用的流動(dòng)相，一般要經(jīng)過(guò)純化及脫氣處理。（

）25．在反相高效液相色譜法中，流動(dòng)相的極性增強(qiáng)，組分的分配比k及保留時(shí)間tR則會(huì)減少。（

）26．高效液相色譜柱中存在的流動(dòng)相的傳質(zhì)阻力，包括在流動(dòng)的流動(dòng)相及靜態(tài)的流動(dòng)相中的傳質(zhì)阻力。（

）（四）簡(jiǎn)答題1．提高高效液相色譜的柱效的關(guān)鍵在哪里？2．高效液相色譜法中化學(xué)鍵合固定相有哪些優(yōu)點(diǎn)？3．簡(jiǎn)述高效液相色譜儀主要部件及其作用。4．高效液相色譜常用檢測(cè)器有哪幾種，其適用范圍是什么?5．從分離原理、儀器構(gòu)造及應(yīng)用范圍上簡(jiǎn)要比較氣相色譜及液相色譜的異同點(diǎn)。6．液相色譜中影響色譜峰展寬的因素有哪些?與氣相色譜相比較,有哪些主要不同之處?7．液-液分配色譜和液-固分配色譜的分離原理分別是什么？分別適宜分離何種物質(zhì)？8．化學(xué)鍵合相色譜、離子交換色譜、空間排阻色譜的分離機(jī)理分別是什么？分別適合分離何種物質(zhì)？9．什么是正相色譜和反相色譜？10．什么是梯度洗脫？試比較梯度洗脫與氣相色譜中的程序升溫之間的異同點(diǎn)？（五）計(jì)算題

1．用高效液相色譜法分離甲、乙兩組分，測(cè)得甲的保留時(shí)間為4.65min，半峰寬為0.15min；乙的保留時(shí)間為6.60min，半峰寬為0.22min。試計(jì)算該色譜柱對(duì)甲、乙兩組分的理論塔板數(shù)、平均理論塔板數(shù)和兩組分的分離度。

（15376，14400，14888，5.27）2．在25cm長(zhǎng)的柱上分離A、B混合物，A物質(zhì)保留時(shí)間為15.20min，峰底寬1.11min；B物質(zhì)保留時(shí)間為16.63min，峰底寬1.21min；不保留物1.30min流出色譜柱。計(jì)算：（1）A、B兩峰的分離度；（2）平均理論塔板數(shù)及理論塔板高度；（3）分離度如要達(dá)到1.5，柱長(zhǎng)應(yīng)為多少？

（1.23；2999，3022，3011；27.5cm）3．準(zhǔn)確稱(chēng)取樣品0.100g，加入內(nèi)標(biāo)物0.100g，測(cè)得待測(cè)物A及內(nèi)標(biāo)物的峰面積分別為51430，84153。已知待測(cè)物及內(nèi)標(biāo)物的相對(duì)校正因子分別為0.80、1.00。計(jì)算組分A的百分含量。

(48.89%)4．高效液相色譜法測(cè)定某復(fù)方藥M中有效成分A和B的含量，采用內(nèi)標(biāo)對(duì)比法定量。精密稱(chēng)取M片劑的質(zhì)量，求得平均片重m1=0.5012g，然后稱(chēng)取片劑的細(xì)粉m2=0.5010g，加入內(nèi)標(biāo)物S的質(zhì)量(ms)樣品=0.0350g，經(jīng)適當(dāng)處理制備成100mL混合溶液（樣品溶液）。另按藥典中該藥的片劑處方含量，稱(chēng)取對(duì)照品成分A0.2200g，成分B0.1500g，內(nèi)標(biāo)物(ms)對(duì)照=0.0350g。三種純品經(jīng)適當(dāng)處理制備成100mL混合溶液（對(duì)照品溶液）。經(jīng)測(cè)定，對(duì)照品溶液各組分的峰面積均值為：A(154900)、S(171200)、B(692300)；樣品溶液各組分的峰面積均值為：A(178000)、S（202700）、B（820900）。計(jì)算：（1）M片劑中A、B的標(biāo)示量（%）。

(97.1%,100.2%)（2）M片劑中A、B的含量mA、mB

(0.2136g,0.1503g)第二十章高效液相色譜法思考題和習(xí)題簡(jiǎn)述高效液相色譜法和氣相色譜法的主要異同點(diǎn)。相同點(diǎn)：均為高效、高速、高選擇性的色譜方法，兼具分離和分析功能，均可以在線檢測(cè)不同點(diǎn)：

分析對(duì)象及范圍流動(dòng)相的選擇操作條件GC能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點(diǎn)較低的樣品，占有機(jī)物的20%流動(dòng)相為有限的幾種“惰性”氣體，只起運(yùn)載作用，對(duì)組分作用小加溫常壓操作HPLC溶解后能制成溶液的樣品，高沸點(diǎn)、高分子量、難氣化、離子型的穩(wěn)定或不穩(wěn)定化合物，占有機(jī)物的80%流動(dòng)相為液體或各種液體的混合。它除了起運(yùn)載作用外，還可通過(guò)溶劑來(lái)控制和改進(jìn)分離。室溫、高壓下進(jìn)行2．何謂化學(xué)鍵合相？常用的化學(xué)鍵合相有哪幾種類(lèi)型？分別用于哪些液相色譜法中？采用化學(xué)反應(yīng)的方法將固定液鍵合在載體表面上，所形成的填料稱(chēng)為化學(xué)鍵合相。優(yōu)點(diǎn)是使用過(guò)程不流失，化學(xué)性能穩(wěn)定，熱穩(wěn)定性好，適于作梯度淋洗。目前常用的Si-O-Si-C型鍵合相，按極性分為非極性，中等極性與極性三類(lèi)。①非極性鍵合相：常見(jiàn)如ODS鍵合相，既有分配又有吸附作用，用途非常廣泛，用于分析非極性或弱極性化合物；②中等圾性鍵合相：常見(jiàn)的有醚基鍵合相，這種鍵合相可作正相或反相色譜的固定相，視流動(dòng)相的極性而定：③極性鍵合相：常用氨基、氰基鍵合相，用作正相色譜的固定相，氨基鍵合相還是分離糖類(lèi)最常用的固定相。3．什么叫正相色譜？什么叫反相色譜？各適用于分離哪些化合物？正相色譜法：流動(dòng)相極性小于固定相極性的色譜法。用于分離溶于有機(jī)溶劑的極性及中等極性的分子型物質(zhì)，用于含有不同官能團(tuán)物質(zhì)的分離。反相色譜法：流動(dòng)相極性大于固定相極性的色譜法。用于分離非極性至中等極性的分子型化合物。4．簡(jiǎn)述反相鍵合相色譜法的分離機(jī)制。典型的反相鍵合色譜法是用非極性固定相和極性流動(dòng)相組成的色譜體系。固定相，常用十八烷基（ODS或C18）鍵合相；流動(dòng)相常用甲醇-水或乙腈-水。非典型反相色譜系統(tǒng)，用弱極性或中等極性的鍵合相和極性大于固定相的流動(dòng)相組成。反相鍵合相表面具有非極性烷基官能團(tuán)，及未被取代的硅醇基。硅醇基具有吸附性能，剩余硅醇基的多寡，視覆蓋率而定。對(duì)于反相色譜的分離機(jī)制目前，保留機(jī)制還沒(méi)有一致的看法，大致有兩種觀點(diǎn)，一種認(rèn)為屬于分配色譜，另一種認(rèn)為屬于吸附色譜。分配色譜的作用機(jī)制是假設(shè)混合溶劑（水十有機(jī)溶劑）中極性弱的有機(jī)溶劑吸附于非極性烷基配合基表面，組分分子在流動(dòng)相中與被非極性烷基配合基所吸附的液相中進(jìn)行分配。吸附色譜的作用機(jī)制可用疏溶劑理論來(lái)解釋。這種理論把非極性的烷基鍵合相，看作是在硅膠表面上覆蓋了一層鍵合的十八烷基的"分子毛"，這種"分子毛'有強(qiáng)的疏水特性。當(dāng)用水與有機(jī)溶劑所組成的極性溶劑為流動(dòng)相來(lái)分離有機(jī)化合物時(shí)，一方面，非極性組分分子或組分分子的非極性部分，由于疏溶劑作用，將會(huì)從水中被＂擠＂出來(lái)，與固定相上的疏水烷基之間產(chǎn)生締合作用，其結(jié)果使組分分子在固定相得到保留。另一方面，被分離物的極性部分受到極性流動(dòng)相的作用，使它離開(kāi)固定相，減小保留值，此即解締過(guò)程，顯然，這兩種作用力之差，決定了分子在色譜中的保留行為。一般說(shuō)來(lái)，固定相上的烷基配合基或被分離分子中非極性部分的表面積越大，或者流動(dòng)相表面張力及介電常數(shù)越大，則締合作用越強(qiáng)，分配比k'也越大，保留值越大。不難理解，在反相鍵合相色譜中，極性大的組分先流出，極性小的組分后流出。5．離子色譜法、反相離子對(duì)色譜法與離子抑制色譜法的原理及應(yīng)用范圍有何區(qū)別？離子色譜法(IonChromatography)：用離子交換樹(shù)脂為固定相，電解質(zhì)溶液為流動(dòng)相。以電導(dǎo)檢測(cè)器為通用檢測(cè)器。試樣組分在分離柱和抑制柱上的反應(yīng)原理與離子交換色譜法相同。離子色譜法是溶液中陰離子分析的最佳方法，也可用于陽(yáng)離子分析。反相離子對(duì)色譜法(IPC或PIC)：反相色譜中，在極性流動(dòng)相中加入離子對(duì)試劑，使被測(cè)組分與其中的反離子形成中性離子對(duì)，增加k和tR，以改善分離。適用于較強(qiáng)的有機(jī)酸、堿。反相離子抑制色譜：在反相色譜中，通過(guò)加入緩沖溶液調(diào)節(jié)流動(dòng)相pH值，抑制組分解離，增加其k和tR，以達(dá)到改善分離的目的。適用于極弱酸堿物質(zhì)（pH=3~7弱酸；pH=7~8弱堿；兩性化合物）6．親和色譜的分離機(jī)制是什么？有何特點(diǎn)？傳統(tǒng)的觀念認(rèn)為親和色譜是基于配基-配體親和反應(yīng)的原理，利用色譜的差速遷移理論，實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)分子的分離，僅僅是一種組分分離的選擇性過(guò)濾法。然而，這一理論是建立在配基-配體親和作用是均相反應(yīng)和宏觀平衡態(tài)熱力學(xué)的基礎(chǔ)上的。但是，實(shí)際上目標(biāo)分子在兩相間分配系數(shù)過(guò)大，且在固定相上的吸附等溫線多不呈線性。所以，關(guān)于生物大分子在親和色譜中的保留機(jī)制及色譜過(guò)程數(shù)學(xué)模型的研究一直是一個(gè)相對(duì)薄弱的環(huán)節(jié)，有待進(jìn)一步的完善.親和色譜具有較高的專(zhuān)屬性，經(jīng)其分離，純化，濃集后的生物樣品具有較高的純度，大大降低了后續(xù)測(cè)定(如HPLC)時(shí)的背景噪音，進(jìn)而使得后續(xù)測(cè)定具有極高的靈敏度。7．速率理論方程式在HPLC中與在GC中有何異同？如何指導(dǎo)HPLC實(shí)驗(yàn)條件的選擇？解:液相色譜中引起色譜峰擴(kuò)展的主要因素為渦流擴(kuò)散、流動(dòng)的流動(dòng)相傳質(zhì)、滯留的流動(dòng)相傳質(zhì)以及柱外效應(yīng)。在氣相色譜中徑向擴(kuò)散往往比較顯著，而液相色譜中徑向擴(kuò)散的影響較弱，往往可以忽略。另外，在液相色譜中還存在比較顯著的滯留流動(dòng)相傳質(zhì)及柱外效應(yīng)。在高效液相色譜中，對(duì)液液分配色譜，VanDeemter方程的完整表達(dá)形式為由此，HPLC的實(shí)驗(yàn)條件應(yīng)該是：①小粒度、均勻的球形化學(xué)鍵合相；②低粘度流動(dòng)相，流速不宜過(guò)快；③柱溫適當(dāng)。8．試討論影響HPLC分離度的各種因素，如何提高分離度？(1)色譜填充性能液相色譜柱分離性能的優(yōu)劣，是由固定相粒度、柱長(zhǎng)、由柱內(nèi)徑和填充狀況決定的柱壓降這三個(gè)參數(shù)度決定的。這三個(gè)參數(shù)度也決定了樣品組分的保留時(shí)間，保留時(shí)間不僅與色譜過(guò)程的熱力學(xué)因素k有關(guān)，還直接與決定柱效與分離度的柱性能參數(shù)及流動(dòng)相的黏度有關(guān)，這些參數(shù)都是影響色譜分離過(guò)程動(dòng)力學(xué)的重要因素。但在高效液相色譜中，分離柱的制備是一項(xiàng)技術(shù)要求非常高的工作，一般都是購(gòu)買(mǎi)商品柱，很少自行制備。(2)流動(dòng)相及流動(dòng)相的極性液相色譜中，改變淋洗液組成、極性是改善分離的最直接因素。液相色譜不可能通過(guò)增加柱溫來(lái)改善傳質(zhì)。因此大多是恒溫分析。流動(dòng)相選擇在液相色譜中顯得特別重要，流動(dòng)相可顯著改變組分分離狀況。(3)流速流速大于0.5cm/s時(shí)，H～u曲線是一段斜率不大的直線。降低流速，柱效提高不是很大。但在實(shí)際操作中，流量仍是一個(gè)調(diào)整分離度和出峰時(shí)間的重要可選擇參數(shù)。9．試討論反相HPLC的分離條件的選擇。反相HPLC法是以表面非極性載體為固定相，以比固定相極性強(qiáng)的溶劑為流動(dòng)相的—種液相色譜分離模式。反相HPLC色譜中樣品的保留值主要由固定相比表面積、鍵合相種類(lèi)和濃度決定，保留值通常隨鏈長(zhǎng)增長(zhǎng)或鍵合相的疏水性增強(qiáng)而增。溶質(zhì)保留值與固定相表面積成正比，當(dāng)其他條件相同時(shí)，溶質(zhì)在低表面積色譜柱上的保留值短。樣品的保留值也可以通過(guò)改變流動(dòng)相組成或溶劑強(qiáng)度來(lái)調(diào)整，溶劑強(qiáng)度取決于有機(jī)溶劑的性質(zhì)和其在流動(dòng)相中的濃度。10．在正、反相HPLC中流動(dòng)相的強(qiáng)度是否相同？在正相色譜中，由于固定相是極性的，所以溶劑極性越強(qiáng)，洗脫能力也越強(qiáng)，即極性強(qiáng)的溶劑是強(qiáng)溶劑。在反相色譜中，由于固定相是非極性的，所以溶劑的強(qiáng)度隨溶劑的極性降低而增加，即極性弱的溶劑是強(qiáng)溶劑。11．什么叫梯度洗脫？它與GC的程序升溫有何異同？在一個(gè)分析周期內(nèi)，按一定程序不斷改變流動(dòng)相的組成或濃度配比，稱(chēng)為梯度洗提。是改進(jìn)液相色譜分離的重要手段。梯度洗提與氣相色譜中的程序升溫類(lèi)似，但是前者連續(xù)改變的是流動(dòng)相的極性、pH或離子強(qiáng)度，而后者改變的溫度。程序升溫也是改進(jìn)氣相色譜分離的重要手段。12．蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的原理及特點(diǎn)是什么？蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（EvaporativeLight-scatteringDetector）是通用型檢測(cè)器，可以檢測(cè)沒(méi)有紫外吸收的有機(jī)物質(zhì)，如人參皂苷、黃芪甲苷等。一、ELSD原理恒定流速的色譜儀（高效液相、逆流色譜、高效毛細(xì)管電泳等）洗脫液進(jìn)入檢測(cè)器后，首先被高壓氣流霧化，霧化形成的小液滴進(jìn)入蒸發(fā)室(漂移管，drifttube)，流動(dòng)相及低沸點(diǎn)的組分被蒸發(fā)，剩下高沸點(diǎn)組分的小液滴進(jìn)入散射池，光束穿過(guò)散射池時(shí)被散射，散射光被光電管接收形成電信號(hào)，電信號(hào)通過(guò)放大電路、模數(shù)轉(zhuǎn)換電路、計(jì)算機(jī)成為色譜工作站的數(shù)字信號(hào)——色譜圖。二、特點(diǎn)1．洗脫液需要霧化，所以霧化氣流的純度和壓力會(huì)影響檢測(cè)器的信噪比。2．流動(dòng)相要蒸發(fā)掉，所以不能使用不易揮發(fā)的物質(zhì)來(lái)調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值。可以通過(guò)蒸發(fā)溫度的調(diào)節(jié)來(lái)使比被測(cè)物質(zhì)沸點(diǎn)低的組分蒸發(fā)。在不使被測(cè)物質(zhì)蒸發(fā)的前提下，溫度越高，流動(dòng)相蒸發(fā)越完全，色譜圖基線越好、信噪比越高。如果被測(cè)物質(zhì)沸點(diǎn)接近或低于流動(dòng)相的蒸發(fā)溫度，則無(wú)法檢測(cè)；不過(guò)，100%的水做流動(dòng)相，蒸發(fā)室溫度也才設(shè)為150攝氏度，沸點(diǎn)比水低的