第4節(jié) 分光光度測量方法.ppt

1、第一章 紫外-可見分光光度法,一、普通分光光度法 二、示差分光光度法 三、雙波長分光光度法 四、導(dǎo)數(shù)分光光度法,第四節(jié) 分光光度測定方法,一、普通分光光度法,1.單組分的測定 通常采用 A-C 標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量測定。 2.多組分的同時測定 若各組分的吸收曲線互不重疊，則可在各自最大吸收波長處分別進行測定。這本質(zhì)上與單組分測定沒有區(qū)別。 若各組分的吸收曲線互有重疊，則可根據(jù)吸光度的加合性求解聯(lián)立方程組得出各組分的含量。 A1= a1bca b1bcb A2= a2bca b2bcb,二、示差分光光度法（示差法）,普通分光光度法一般只適于測定微量組分，當(dāng)待測組分含量較高時，將產(chǎn)生較大的誤差。需采用示

2、差法。即提高入射光強度，并采用濃度稍低于待測溶液濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液作參比溶液。 設(shè)：待測溶液濃度為cx，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為cs(cs cx)。則： Ax= b cx As = b cs x s =b(cx cs ）=bc 測得的吸光度相當(dāng)于普通法中待測溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度之差。,示差分光光度法（示差法）,AAx As =b(cx cs ）=bc 測得的吸光度相當(dāng)于普通法中待測溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度之差A(yù) 。 示差法測得的吸光度與c呈直線關(guān)系。由標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的c值，則待測溶液濃度cx ： cx = cs + c,示差法標(biāo)尺擴展原理：,普通法： cs的T=10%；cx的T=5% 示差法： cs 做

3、參比，調(diào)T=100% 則： cx的T=50% ；標(biāo)尺擴展10倍,三、雙波長分光光度法,不需空白溶液作參比；但需要兩個單色器獲得兩束單色光(1和2)；以參比波長1處的吸光度A1作為參比，來消除干擾。在分析渾濁或背景吸收較大的復(fù)雜試樣時顯示出很大的優(yōu)越性。靈敏度、選擇性、測量精密度等方面都比單波長法有所提高。 A A2 A1 (2 1)b c 兩波長處測得的吸光度差值A(chǔ)與待測組分濃度成正比。1和2分別表示待測組分在1和2處的摩爾吸光系數(shù)。,關(guān)鍵問題:,測量波長2和參比波長1的選擇與組合 以兩組分x和y的雙波長法測定為例： 設(shè)：x為待測組分，y為干擾組分，二者的吸光度差分別為: Ax和Ay，則該體系

4、的總吸光度差A(yù)x+y為： Ax+y = A x + A y 如何選擇波長1 、2有一定的要求。,選擇波長組合1 、2的基本要求是：,選定的波長1和2處干擾組分應(yīng)具有相同吸光度，即： Ay = A y2 A y1 = 0 故： Ax+y = A x=(x2x1)bcx 此時：測得的吸光度差A(yù)只與待測組分x的濃度呈線性關(guān)系，而與干擾組分y無關(guān)。若x為干擾組分，則也可用同樣的方法測定y組分。,可采用作圖法選擇符合上述兩個條件的波長組合。,在選定的兩個波長1和2處待測組分的吸光度應(yīng)具有足夠大的差值。,四、導(dǎo)數(shù)分光光度法,導(dǎo)數(shù)分光光度法在多組分同時測定、渾濁樣品分析、消除背景干擾、加強光譜的精細結(jié)構(gòu)以及

5、復(fù)雜光譜的辨析等方面，顯示了很大的優(yōu)越性。 利用吸光度(或透光度)對波長的導(dǎo)數(shù)曲線來進行分析： 0 e-bc 假定入射光強度0 在整個波長范圍內(nèi)保持恒定： dI 0 /d0 則：dI/d0 bc e -bc d/d 0 bc d/d,導(dǎo)數(shù)分光光度法,dI/d 0 bc d/d 一階導(dǎo)數(shù)信號與試樣濃度呈線性關(guān)系； 測定靈敏度依賴于摩爾吸光系數(shù)對波長的變化率d/d。吸收曲線的拐點處d/d最大，故其靈敏度最高(見圖）。 同理可以導(dǎo)出其二階和三階導(dǎo)數(shù)光譜（略）,請選擇內(nèi)容：,第一節(jié) 基本原理 第二節(jié) 紫外-可見分光光度計 第三節(jié) 顯色與測量條件的選擇 第四節(jié) 分光光度測定方法 第五節(jié) 有機合物紫外光譜

6、解析,結(jié)束,紫外可見分光光度法的特點：, 儀器設(shè)備和操作條件比較簡單，費用較少分析速度較快。 靈敏度較高最低檢出濃度可達10-6g.mL-1。 有較好的選擇性一般可在多組分共存的體系中，對某一種物質(zhì)進行測定。 精密度和準(zhǔn)確度較高?，F(xiàn)在新型儀器測定，相對誤差可達1%2%之內(nèi)。 用途廣泛。醫(yī)藥、化工、冶金、環(huán)保等。,紫外可見分光光度法的原理：,定性分析主要用：吸收光譜，max和 max。 定量用：Lambert-Beers Principle。 對象：含有雙鍵的化合物。 主要是-躍遷和n -躍遷。,光源,單色器,樣品室,檢測器,顯示,主要由：光源、單色器、比色池、檢測器 四部分組成。 在實驗前要進行波長校正及比色皿選擇（T=98%101%）,紫外可見分光光度