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1、第一章 紫外-可見分光光度法,一、普通分光光度法 二、示差分光光度法 三、雙波長分光光度法 四、導數(shù)分光光度法,第四節(jié) 分光光度測定方法,一、普通分光光度法,1.單組分的測定 通常采用 A-C 標準曲線法定量測定。 2.多組分的同時測定 若各組分的吸收曲線互不重疊,則可在各自最大吸收波長處分別進行測定。這本質(zhì)上與單組分測定沒有區(qū)別。 若各組分的吸收曲線互有重疊,則可根據(jù)吸光度的加合性求解聯(lián)立方程組得出各組分的含量。 A1= a1bca b1bcb A2= a2bca b2bcb,二、示差分光光度法(示差法),普通分光光度法一般只適于測定微量組分,當待測組分含量較高時,將產(chǎn)生較大的誤差。需采用示
2、差法。即提高入射光強度,并采用濃度稍低于待測溶液濃度的標準溶液作參比溶液。 設:待測溶液濃度為cx,標準溶液濃度為cs(cs cx)。則: Ax= b cx As = b cs x s =b(cx cs )=bc 測得的吸光度相當于普通法中待測溶液與標準溶液的吸光度之差。,示差分光光度法(示差法),AAx As =b(cx cs )=bc 測得的吸光度相當于普通法中待測溶液與標準溶液的吸光度之差A 。 示差法測得的吸光度與c呈直線關系。由標準曲線上查得相應的c值,則待測溶液濃度cx : cx = cs + c,示差法標尺擴展原理:,普通法: cs的T=10%;cx的T=5% 示差法: cs 做
3、參比,調(diào)T=100% 則: cx的T=50% ;標尺擴展10倍,三、雙波長分光光度法,不需空白溶液作參比;但需要兩個單色器獲得兩束單色光(1和2);以參比波長1處的吸光度A1作為參比,來消除干擾。在分析渾濁或背景吸收較大的復雜試樣時顯示出很大的優(yōu)越性。靈敏度、選擇性、測量精密度等方面都比單波長法有所提高。 A A2 A1 (2 1)b c 兩波長處測得的吸光度差值A與待測組分濃度成正比。1和2分別表示待測組分在1和2處的摩爾吸光系數(shù)。,關鍵問題:,測量波長2和參比波長1的選擇與組合 以兩組分x和y的雙波長法測定為例: 設:x為待測組分,y為干擾組分,二者的吸光度差分別為: Ax和Ay,則該體系
4、的總吸光度差Ax+y為: Ax+y = A x + A y 如何選擇波長1 、2有一定的要求。,選擇波長組合1 、2的基本要求是:,選定的波長1和2處干擾組分應具有相同吸光度,即: Ay = A y2 A y1 = 0 故: Ax+y = A x=(x2x1)bcx 此時:測得的吸光度差A只與待測組分x的濃度呈線性關系,而與干擾組分y無關。若x為干擾組分,則也可用同樣的方法測定y組分。,可采用作圖法選擇符合上述兩個條件的波長組合。,在選定的兩個波長1和2處待測組分的吸光度應具有足夠大的差值。,四、導數(shù)分光光度法,導數(shù)分光光度法在多組分同時測定、渾濁樣品分析、消除背景干擾、加強光譜的精細結(jié)構(gòu)以及
5、復雜光譜的辨析等方面,顯示了很大的優(yōu)越性。 利用吸光度(或透光度)對波長的導數(shù)曲線來進行分析: 0 e-bc 假定入射光強度0 在整個波長范圍內(nèi)保持恒定: dI 0 /d0 則:dI/d0 bc e -bc d/d 0 bc d/d,導數(shù)分光光度法,dI/d 0 bc d/d 一階導數(shù)信號與試樣濃度呈線性關系; 測定靈敏度依賴于摩爾吸光系數(shù)對波長的變化率d/d。吸收曲線的拐點處d/d最大,故其靈敏度最高(見圖)。 同理可以導出其二階和三階導數(shù)光譜(略),請選擇內(nèi)容:,第一節(jié) 基本原理 第二節(jié) 紫外-可見分光光度計 第三節(jié) 顯色與測量條件的選擇 第四節(jié) 分光光度測定方法 第五節(jié) 有機合物紫外光譜
6、解析,結(jié)束,紫外可見分光光度法的特點:, 儀器設備和操作條件比較簡單,費用較少分析速度較快。 靈敏度較高最低檢出濃度可達10-6g.mL-1。 有較好的選擇性一般可在多組分共存的體系中,對某一種物質(zhì)進行測定。 精密度和準確度較高?,F(xiàn)在新型儀器測定,相對誤差可達1%2%之內(nèi)。 用途廣泛。醫(yī)藥、化工、冶金、環(huán)保等。,紫外可見分光光度法的原理:,定性分析主要用:吸收光譜,max和 max。 定量用:Lambert-Beers Principle。 對象:含有雙鍵的化合物。 主要是-躍遷和n -躍遷。,光源,單色器,樣品室,檢測器,顯示,主要由:光源、單色器、比色池、檢測器 四部分組成。 在實驗前要進行波長校正及比色皿選擇(T=98%101%),紫外可見分光光度
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