有機(jī)磷檢測(cè).pptx

1、有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測(cè),洪宇浩 羅祎邇 林劍鋒 張述熙,酶抑制法,原理 酶抑制法是目前最常見的蔬菜中農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法。有機(jī)磷和氨基甲酸酯農(nóng)藥能抑制昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酯酶的活性，造成神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酰膽堿的積累，影響昆蟲正常的神經(jīng)傳導(dǎo)，使其中毒致死。有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)酯酶的抑制率與其濃度稱正相關(guān)。 酶樣與樣品進(jìn)行反應(yīng)，如樣品中沒有農(nóng)藥殘留或殘留量極少，酶的活性不被抑制，可以水解底物；反之，如農(nóng)藥的殘留量比較高，酶的活性被抑制，底物就不被水解或水解速度較慢。 水解產(chǎn)物可以通過光度法或電化學(xué)的方法進(jìn)行檢測(cè)，通過抑制率判斷出樣品中是否含有有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在及其含量的多少。,酶抑制法

2、,酶的選擇 酶抑制法中酶最為關(guān)鍵，酶的種類決定著檢測(cè)的靈敏度。常用的酶有兩種：乙酰膽堿酯酶和丁酰膽堿酯酶。 底物和顯色劑 酶抑制顯色反應(yīng)可以使用的底物和顯色劑很多，大致可分為以下幾種類型： 乙酰膽堿-修百里酚藍(lán)顯色法 乙酸-萘酯-固藍(lán)B鹽顯色法 乙酸羥基吲哚顯色法 乙酸靛酯顯色法,酶抑制法,方法速測(cè)卡紙法 農(nóng)藥速測(cè)卡是55mm*22mm的形紙條，上面貼有直徑15mm的白色、紅色圓形藥片各一片。 2,6-二氯靛酚乙酸酯在白色藥片上膽堿酯酶的催化下能迅速發(fā)生水解反應(yīng)，生成2,6-二氯靛酚（藍(lán)色）和乙酸，反應(yīng)一段時(shí)間后，打開速測(cè)卡，若白色藥片變成藍(lán)色，為陰性，若不變色或顯淺藍(lán)色， 表示有有機(jī)磷、氨基

3、甲酸酯類農(nóng)藥 的存在，其抑制了膽堿酯酶的活性 ，即抑制了水解反應(yīng)。,膽堿酯酶,乙酰膽堿類似物2,6-二氯靛酚乙酸酯,酶抑制法,方法速測(cè)卡紙法(試驗(yàn)步驟) 1、選取有代表性是蔬菜樣品，擦去表面泥土，剪成1cm左右見方的碎片，取5g放入帶蓋瓶中，加入10ml緩沖液振搖50次，靜置2min以上。 2、取一片測(cè)速卡，用白色藥片蘸取提取液，放置10min以上進(jìn)行預(yù)反應(yīng)，有條件時(shí)在37C恒溫箱中反應(yīng)。 3、將速測(cè)卡對(duì)折，用手捏3min或恒溫3min，使紅色藥片與白色藥片疊合發(fā)生反應(yīng)。 4、測(cè)定一個(gè)緩沖液的空白對(duì)照卡。 結(jié)果判定 白色藥片不變色或略有淺藍(lán)色均為陽性結(jié)果（高于檢出限）。白色藥片變?yōu)樘焖{(lán)色或與空

4、白對(duì)照卡相同，為陰性結(jié)果（低于檢出限）。,酶抑制法,方法分析 該方法抗干擾性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)速度快，不需要配制試劑，攜帶方便，檢測(cè)成本低，能夠?qū)崿F(xiàn)在普通農(nóng)戶中廣泛推廣使用，是現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的最佳方法，但此方法存在以下一些嚴(yán)重的缺陷： 該方法只能定性不能定量。它只能顯示樣品中是否有農(nóng)藥，而無法確定其種類和大致含量。 該方法對(duì)大部分農(nóng)藥的檢測(cè)靈敏度低，檢出限遠(yuǎn)高于蔬菜中農(nóng)藥的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，也就是說，該方法對(duì)農(nóng)藥殘量超過限量標(biāo)準(zhǔn)而低于方法檢出限的蔬菜無能為力，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果假陰性。 除了有機(jī)磷和氨基甲酸酯農(nóng)藥外，其它因素如重金屬離子、反應(yīng)溫度、酶的來源及活性等問題也會(huì)影響測(cè)定結(jié)果。因此該方法容易受到干擾而導(dǎo)致

5、誤檢。 測(cè)定蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白等樣品時(shí)，由于其中含有對(duì)酶有影響的植物次生質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽性的檢測(cè)結(jié)果。,氣相色譜法,方法原理 色譜法也叫層析法，是一種高效能的物理 分離技術(shù)，將它用于分析化學(xué)并配合適當(dāng)?shù)臋z 測(cè)手段，就成為了色譜分析法。 在色譜法中存在兩相，一是固定不動(dòng)的， 叫做固定相；另一相則不斷流過固定相表面。當(dāng)流動(dòng)相中攜帶的混合物流經(jīng)固定相時(shí)，混合物中的各組分與股定向發(fā)生相互作用。由于混合物中各組分在性質(zhì)和結(jié)構(gòu)上的差異，與固定相之間產(chǎn)生的作用力大小，強(qiáng)弱不同，隨著流動(dòng)想的移動(dòng)，混合物在兩相間經(jīng)過反復(fù)多次的分配平衡，各組分被固定相保留的時(shí)間不同，從而按一定次序由固定相中先后

6、流出。與適當(dāng)?shù)闹髾z驗(yàn)方法結(jié)合，實(shí)現(xiàn)混合物各組分的分離和檢測(cè)。,氣相色譜法,方法優(yōu)點(diǎn) 高靈敏度：可檢出10-10 克的物質(zhì)，可作超純氣體、高分子單體的痕跡量雜質(zhì)分析和空氣中微量毒物的分析。 高選擇性：可有效地分離性質(zhì)極為相近的各種同分異構(gòu)體和各種同位素。 高效能：可把組分復(fù)雜的樣品分離成單組分。 速度快：一般分析、只需幾分鐘即可完成，有利于指導(dǎo)和控制生產(chǎn)。 應(yīng)用范圍廣：即可分析低含量的氣、液體，亦可分析高含量的氣、液體，可不受組分含量的限制。 所需試樣量少：一般氣體樣用幾毫升，液體樣用幾微升或幾十微升。,氣相色譜法,樣例分析,從右邊的圖便可一對(duì)所測(cè)量的結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，從而確定農(nóng)藥的組成及含量，只

7、得注意的是（a）圖的曲線不平坦，峰比較多，下面的則相對(duì)比較平坦，峰比較少，這是因?yàn)镚C/FPD（b）系統(tǒng)相對(duì)于GC/NPD（a）系統(tǒng)，對(duì)干擾的限制比較多，相對(duì)比較準(zhǔn)確。,氣相色譜法,氣相色譜法,分光光度法,丁酰膽堿酯酶法 以碘化硫代丁酰膽堿為底物，在丁酰膽堿酯酶的作用下底物水解成碘化硫代和丁酸，碘化硫代膽堿和顯色劑二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）產(chǎn)生顯色反應(yīng)，反應(yīng)液呈黃色，用分光光度計(jì)在412nm處測(cè)定吸光度隨時(shí)間的變化值，計(jì)算出抑制率。通過抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機(jī)磷農(nóng)藥的存在。 抑制率（%）=(A0-A) / A0100% 式中 A0對(duì)照溶液3min吸光度的變化值； A樣品溶液3

8、min吸光度的變化值。,分光光度法,實(shí)驗(yàn)步驟 樣品處理 選取有代表性的蔬菜樣品，洗掉表面泥土，剪成1cm左右見方碎片，取樣品1g，放入燒杯或提取瓶中，加入5mL緩沖溶液，振蕩12min，倒出提取液，靜置35min，待用。 對(duì)照溶液測(cè)試 先于試管中加入2.5mL緩沖溶液，再加入0.1mL酶液、0.1mL顯色劑，搖勻后與于37C放置15min以上（每批樣品的控制時(shí)間應(yīng)一致）。加入0.1mL底物搖勻，此時(shí)檢液開始顯色反應(yīng)，應(yīng)立即放入儀器比色池中，記錄反應(yīng)3min的吸光度變化A0 。 樣品溶液測(cè)試 先于試管中加入2.5mL樣品提取液，其他操作與對(duì)照溶液測(cè)試相同，記錄反應(yīng)3min的吸光度變化A0 。,分光光度法,結(jié)果判定與檢出限 當(dāng)蔬菜樣品提取液對(duì)酶的抑制率50%時(shí)，表示蔬菜中有高劑量有機(jī)磷農(nóng)藥存在