中國藥典-2015-四部通則-9205 藥品潔凈實驗室微生物監(jiān)測和控制指導(dǎo)原則

1、9205 藥品潔凈實驗室微生物監(jiān)測和控制指導(dǎo)原則 本指導(dǎo)原則是用于指導(dǎo)藥品微生物檢驗用的潔凈室等受控環(huán)境微生物污染情況的監(jiān)測和控制。 藥品潔凈實驗室是指用于藥品無菌或微生物檢驗用的潔凈實驗室、隔離系統(tǒng)及其他受控環(huán)境。藥品潔凈實驗室的潔凈級別按空氣懸浮粒子大小和數(shù)量的不同參考現(xiàn)行“藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范”分為A、B、C、D 4個級別。為維持藥品潔凈實驗室操作環(huán)境的穩(wěn)定性、確保藥品質(zhì)量安全及檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，應(yīng)對藥品潔凈實驗室進(jìn)行微生物監(jiān)測和控制，使受控環(huán)境維持可接受的微生物污染風(fēng)險水平。 本指導(dǎo)原則包括人員要求、初次使用的潔凈實驗室參數(shù)確認(rèn)、微生物監(jiān)測方法、監(jiān)測頻次及監(jiān)測項目、監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)、警戒限和糾

2、偏限、數(shù)據(jù)分析及偏差處理、微生物鑒定和微生物控制。 人員 從事藥品潔凈實驗室微生物監(jiān)測和控制的人員應(yīng)符合現(xiàn)行中國藥典通則中“藥品微生物實驗室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則（通則9203）”的相關(guān)要求。 確認(rèn) 初次使用的潔凈實驗室應(yīng)進(jìn)行參數(shù)確認(rèn)，確認(rèn)參數(shù)包括物理參數(shù)、空氣懸浮粒子和微生物。潔凈實驗室若有超凈工作臺、空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)等關(guān)鍵設(shè)備發(fā)生重大變化時應(yīng)重新進(jìn)行參數(shù)測試。 藥品潔凈實驗室物理參數(shù)的測試應(yīng)當(dāng)在微生物監(jiān)測方案實施之前進(jìn)行，確保操作順暢，保證設(shè)備系統(tǒng)的運行能力和可靠性。主要的物理參數(shù)包括高效空氣過濾器完整性，氣流組織、空氣流速（平均風(fēng)速），換氣次數(shù)、壓差、溫度和相對濕度等，測試應(yīng)在模擬正常檢測條件下進(jìn)

3、行。 各級別潔凈環(huán)境物理參數(shù)建議標(biāo)準(zhǔn)及最長監(jiān)測周期見表1，必要時，各實驗室應(yīng)根據(jù)潔凈實驗室使用用途、檢測藥品的特性等制定適宜的參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)。物理參數(shù)測試方法參照潔凈室施工及驗收規(guī)范的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)中附錄D3高效空氣過濾器現(xiàn)場掃描檢漏方法、附錄E12氣流的檢測、附 錄E1風(fēng)量和風(fēng)速的檢測、附錄E2靜壓差的檢測、附錄E5溫濕度的檢測進(jìn)行。 初次使用的潔凈實驗室其空氣懸浮粒子和微生物的確認(rèn)及監(jiān)測照以下“監(jiān)測”進(jìn)行。 監(jiān)測 藥品潔凈實驗室應(yīng)定期進(jìn)行微生物監(jiān)測，內(nèi)容包括非生物活性的空氣懸浮粒子數(shù)和有生物活性的微生物監(jiān)測，其中微生物監(jiān)測包括環(huán)境浮游菌和沉降菌監(jiān)測，及關(guān)鍵的檢測臺面、人員操作服表面及5指手套等的微

4、生物監(jiān)測。 當(dāng)潔凈區(qū)有超凈工作臺、空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)等關(guān)鍵設(shè)備發(fā)生重大改變時應(yīng)重新進(jìn)行監(jiān)測；當(dāng)微生物監(jiān)測結(jié)果或樣品測定結(jié)果產(chǎn)生偏離，經(jīng)評估潔凈區(qū)可能存在被污染的風(fēng)險時，應(yīng)對潔凈區(qū)進(jìn)行清潔消毒后重新進(jìn)行監(jiān)測。 1. 監(jiān)測方法 藥品潔凈實驗室懸浮粒子的監(jiān)測照醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子的測試方法的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行；沉降菌的監(jiān)測照醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測試方法的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行；浮游菌的監(jiān)測照醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的測試方法的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。 表面微生物測定是對環(huán)境、設(shè)備和人員的表面微生物進(jìn)行監(jiān)測，方法包括接觸碟法和擦拭法。接觸碟法是將充滿規(guī)定的瓊脂培養(yǎng)基的接觸碟對規(guī)則表面或平面進(jìn)行取樣，然后

5、置合適的溫度下培養(yǎng)一定時間并計數(shù)，每碟取樣面積約為 25cm2，微生物計數(shù)結(jié)果以cfu/碟報告；擦拭法是接觸碟法的補(bǔ)充，用于不規(guī)則表面的微生物監(jiān)測，特別是設(shè)備的不規(guī)則表面。擦拭法的擦拭面積應(yīng)采用合適尺寸的無菌模板或標(biāo)尺確定，取樣后，將拭子置合適的緩沖液或培養(yǎng)基中，充分振蕩，然后采用適宜的方法計數(shù)，每個拭子取樣面積為約25cm2，微生物計數(shù)結(jié)果以cfu/拭子報告。接觸碟法和擦拭法采用的培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和時間同浮游菌或沉降菌監(jiān)測。表面菌測定應(yīng)在實驗結(jié)束后進(jìn)行。 環(huán)境浮游菌、沉降菌及表面微生物監(jiān)測用培養(yǎng)基一般采用胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA），必要時可加入適宜的中和劑，當(dāng)監(jiān)測結(jié)果有疑似真菌或考慮季節(jié)

6、因素影響時，可增加沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（SDA）。 在藥品潔凈實驗室監(jiān)控中，監(jiān)測頻次及監(jiān)測項目建議按表2進(jìn)行。 注：每月一次。工作臺面沉降菌的日常監(jiān)測采樣點數(shù)不少于3個，且每個采樣點的平皿數(shù)應(yīng)不少于1個。每季度一次 每半年一次。 如果出現(xiàn)連續(xù)超過糾偏限和警戒限、關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)發(fā)現(xiàn)有污染微生物存在、空氣凈化系統(tǒng)進(jìn)行任何重大的維修、消毒規(guī)程改變、設(shè)備有重大維修或增加、潔凈室（區(qū)）結(jié)構(gòu)或區(qū)域分布有重大變動、引起微生物污染的事故、日常操作記錄反映出傾向性的數(shù)據(jù)時應(yīng)考慮修改監(jiān)測頻次。 2. 監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn) 各潔凈級別空氣懸浮粒子的標(biāo)準(zhǔn)見表3、微生物監(jiān)測的動態(tài)標(biāo)準(zhǔn)見表4。 表3 各潔凈級別空氣懸浮粒子的標(biāo)準(zhǔn) 懸浮粒

7、子最大允許數(shù)/立方米 潔凈度級別 靜態(tài) 動態(tài) 0. 5m 5. 0m 0.5m 5.0m A級 3520 20 3520 20 B級 3520 29 2900 C級 2900 29000 D級 29000 不作規(guī)定 不作規(guī)定 注：表中各數(shù)值均為平均值；單個沉降碟的暴露時間可以少于4小時，同一位置可使用多個沉降碟連續(xù)進(jìn)行監(jiān)測并累積計數(shù)。 3. 警戒限和糾偏限 藥品潔凈實驗室應(yīng)根據(jù)歷史數(shù)據(jù)，結(jié)合不同潔凈區(qū)域的標(biāo)準(zhǔn)，采用適宜的方法，制定適當(dāng)?shù)奈⑸锉O(jiān)測警戒限和糾偏限。限度確定后，應(yīng)定期回顧評價，如歷史數(shù)據(jù)表明環(huán)境有所改善，限度應(yīng)作出相應(yīng)調(diào)整以反映環(huán)境實際質(zhì)量狀況。表5列出了各級別潔凈環(huán)境微生物糾偏限

8、參考值。 注：數(shù)據(jù)表示建議的環(huán)境質(zhì)量水平，也可根據(jù)檢測或分析方法的類型確定微生物糾偏限度標(biāo)準(zhǔn)；可根據(jù)潔凈區(qū)域用途、檢測藥品的特性等需要增加沉降碟數(shù)；A級環(huán)境的樣本，正常情況下應(yīng)無微生物污染。 4. 數(shù)據(jù)分析及偏差處理 數(shù)據(jù)分析 應(yīng)當(dāng)對日常環(huán)境監(jiān)測的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和回顧，通過收集的數(shù)據(jù)和趨勢分析，總結(jié)和評估潔凈實驗室是否受控，評估警戒限和糾偏限是否適合，評估所采取的糾偏措施是否合適。 應(yīng)當(dāng)正確評估微生物污染，不僅僅關(guān)注微生物數(shù)量，更應(yīng)關(guān)注微生物污染檢出的頻率，往往在一個采樣周期內(nèi)同一環(huán)境中多點發(fā)現(xiàn)微生物污染，可能預(yù)示著風(fēng)險增加，應(yīng)仔細(xì)評估。幾個位點同時有污染的現(xiàn)象也可能由不規(guī)范的采樣操作引起，所以

9、在得出環(huán)境可能失控的結(jié)論之前，應(yīng)仔細(xì)回顧采樣操作過程。在污染后的幾天對環(huán)境進(jìn)行重新采樣是沒有意義的，因為采樣過程不具有可重復(fù)性。 偏差處理 當(dāng)微生物監(jiān)測結(jié)果超出糾偏限度時，應(yīng)當(dāng)按照偏差處理規(guī)程進(jìn)行報告、記錄、調(diào)查、處理以及采取糾正措施，并對糾正措施的有效性進(jìn)行評估。 5. 微生物鑒定 建議對受控環(huán)境收集到的微生物進(jìn)行適當(dāng)水平的鑒定，微生物菌群信息有助于預(yù)期常見菌群，并有助于評估清潔或消毒規(guī)程、方法、清潔劑或消毒劑及微生物監(jiān)測方法的有效性，尤其當(dāng)超過監(jiān)測限度時，微生物鑒定信息有助于污染源的調(diào)査。關(guān)鍵區(qū)域分離到的菌落應(yīng)先于非關(guān)鍵區(qū)域進(jìn)行鑒定。微生物鑒定參照微生物鑒定指導(dǎo)原則（通則9204）進(jìn)行。 微生物控制 為了保證藥品潔凈實驗室環(huán)境維持適當(dāng)?shù)乃?，并處于受控狀態(tài)，除保持空調(diào)系統(tǒng)的良好運行狀態(tài)，對設(shè)施進(jìn)行良好維護(hù)外，潔凈室內(nèi)人員應(yīng)嚴(yán)格遵守良好的行為規(guī)范，并定期進(jìn)行環(huán)境監(jiān)控，減少人員干預(yù)比監(jiān)測更有效。其次是通過有效控制人員和物品的移動，適當(dāng)?shù)目刂茰囟群蜐穸取Ｎ⑸锟刂拼胧┻€包括良好的清潔和衛(wèi)生處理，應(yīng)定期對藥品潔凈實驗室進(jìn)行清潔和消毒，應(yīng)當(dāng)監(jiān)測消毒劑和清潔劑的微生物污染狀況，并在規(guī)定的