化妝品微生物標準檢驗方法總則及注解

1、.化妝品微生物標準檢驗方法總則及注解中華人民共和國國家標準化妝品微生物標準檢驗方法 udc 668：576 .85.07總則 (gb7918.187)standard methods of microbiological examination for cosmetics general rules1 樣品的采集及注意事項1.1 所采集的樣品，應(yīng)具有代表性，一般視每批化妝品數(shù)量大小，隨機抽取相應(yīng)數(shù)量的包裝單位。檢驗時，應(yīng)分別從兩個包裝單位以上的樣品中共取10g或10ml。包裝量小的樣品，取樣量可酌減。1.2 供檢樣品，應(yīng)嚴格保持原有的包裝狀態(tài)。容器不應(yīng)有破裂，在檢驗前不得啟開，以防再污染。1.

2、3 接到樣品后，應(yīng)立即登記，編寫檢驗序號，并按檢驗要求盡快檢驗。如不能及時檢驗，樣品應(yīng)放不室溫陰涼干燥處，不要冷藏或冷凍。1.4 若只有一個樣品而同時需做多種分析，如細菌、毒理、化學(xué)等，則宜先取出部分樣品作細菌檢驗，再將剩余樣品作其他分析。精品.1.5 在檢驗過程中，從開封到全部檢驗操作結(jié)束，均須防止微生物的再污染和擴散，所用器皿及材料均應(yīng)事先滅菌，全部操作應(yīng)在無菌室內(nèi)進行?；蛟谙鄳?yīng)條件下，按無菌操作規(guī)定進行。1.6 如檢出烘大腸菌群或其他致病菌，自報告發(fā)出起該菌種及被檢樣品應(yīng)保存一個月備查。2 供檢樣品的制備2.1 培養(yǎng)基和試劑2.1.1 生理鹽水氯化鈉 8.5g蒸餾水 1000ml溶解后，

3、分裝到加玻璃珠的錐形瓶內(nèi)，每瓶90ml，121(15 1b)20min高滅菌。2.1.2 scdlp液體培養(yǎng)基成分： 酪蛋白胨 17g大豆蛋白胨 3g氯化鈉 5g磷酸氫二鉀 2.5g精品.葡萄糖 2.5g卵磷脂 1g吐溫80 7g蒸餾水 1000ml 制法：將上述成分混合后，加熱溶解，凋ph為7.27.3分裝，121(15 1b)20min高壓滅菌。注意振蕩，使沉淀于底層的吐溫80充分混合，冷卻至25左右使用。注：如無酪蛋白胨和大豆蛋白胨，也可用日本多胨代替。2.1.3 滅菌液體石蠟。2.1.4 滅菌吐溫80。2.2 儀器2.2.1 天平。2.2.2 滅菌錐形瓶：內(nèi)含玻璃珠及90ml稀釋液。2

4、.2.3 滅菌刻度吸管：10ml、5ml。2.2.4 水浴箱。2.2.5 滅菌研缽及滅菌研棒。精品.2.2.6 均質(zhì)器。2.3 不同類型樣品的檢樣制備2.3.1 液體樣品2.3.1.1 水溶性的液體樣品，可量取10ml加到90ml滅菌生理鹽水中，如樣品少于10ml。仍按10倍稀釋法進行。如為5ml則加45ml滅菌生理鹽水，混勻后，制成1:10稀釋液。2.3.1.2 油性液體。取樣品10ml，先可加5ml滅菌液體石蠟混勻，再加10ml滅菌的吐溫80，在4044水浴中振蕩混合10min，加入滅菌的生理鹽水75ml(在4044水浴中預(yù)溫)，在4044水浴中乳化，制成1:10的懸液。2.3.2 膏、霜

5、、乳劑半固體狀樣品2.3.2.1 親水性的樣品，稱取10g，加到滅菌的帶玻璃珠加有90ml滅菌生理鹽水的錐形瓶中，充分振蕩混勻，放32水浴靜置15min。用其上清液作為1:10的稀釋液。2.3.2.2 疏水性的樣品，稱取10g，放到滅菌的研缽中，加10ml滅菌液體石蠟，研磨成粘稠狀，再加10ml滅菌吐溫80，研磨待溶解后，加70ml滅菌生理鹽水，在4044水浴中充分混合，制成1:10稀釋液。精品.2.3.2.3 固體樣品，稱取10g，加到滅菌的生理鹽水稀釋瓶中，振蕩混勻，使其分散混懸后，放3032水浴中，15min后取出，充分振蕩混合，再放到3032水浴中靜置15min，取上清液作為1:10的

6、稀釋液。如有均質(zhì)器，上述水溶性膏、霜、粉劑等，可稱10g樣品加90ml滅菌生理鹽水，均質(zhì)12min；疏水性膏、霜及眉筆、口紅等，稱10g樣品加90mlscdlp液體培養(yǎng)基，或1g樣品加1ml滅菌液體石蠟、1ml滅菌吐溫80、7ml滅菌生理鹽水，均質(zhì)35min。附加說明：本標準由中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院環(huán)境衛(wèi)生監(jiān)測所歸口。本標準由“化妝品微生物標準檢驗方法”起草小組起草。本標準主要起草人周淑玉。本標準由中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院環(huán)境衛(wèi)生監(jiān)測所負責(zé)解釋。注解：（1）在化妝品中通常都加入防腐劑，使化妝品能較長時間使用而不腐敗變質(zhì)，因此在進行化妝品衛(wèi)生細菌學(xué)檢驗時，必須消除化妝品中的防腐劑，使長期處于瀕死狀態(tài)或半損

7、傷狀態(tài)的細菌被檢出，從而得出正確的檢驗結(jié)果。scdlp培養(yǎng)基中的卵磷脂和吐溫80是中和防腐劑的。消除防腐劑抑菌作用的方法，常用的有以下幾種：精品.稀釋法：用稀釋液和培養(yǎng)基將樣品稀釋到一定濃度，使其抑菌成分的濃度減少到無抑菌作用的程度，再進行檢驗。按規(guī)定正常取樣制成1:10的稀釋液，可加大稀釋液量如1:20或1:40，也可加大培養(yǎng)基的用量或減少供試液的用量。通常是將10ml供試液加到90ml增菌液中，如改為5ml供試液加到l00ml增菌液中，可以達到稀釋抑菌成分濃度的作用，此方法對于加防腐劑量少的化妝品可適用，操作簡便易行，無論加何種防腐劑均可用。離心沉淀：將1:10供試液先用低速（500r/m

8、in）離心沉淀5min，使不溶物沉于管底，再吸出上清液用高速（300or/min）離心沉淀30min，使絕大部分的待檢菌沉降于管底，取出用以培養(yǎng)檢驗，可排除大量抑菌成分的干擾。但此法只適用于完全溶解或絕大部分溶解的化妝品。操作時應(yīng)嚴格按無菌操作。薄膜過濾法：利用微孔濾膜將供試液過濾，過濾后用稀釋液沖洗后再培養(yǎng)，本法手續(xù)較繁瑣，適用范圍仍受到一定限制。中和法：在供試液或培養(yǎng)基中加入中和劑，以中和防腐劑的抑菌效果。防腐劑種類不同所用的中和劑亦不同。下表為一些防腐劑的常用中和劑。表 1 常用防腐劑的中和劑防腐劑中和劑對羥基苯甲酸酯類（尼泊金酯）布郎諾醇（bronopol）（2-溴-2-硝基-1。3-丙二醇吐溫-80鹽酸半光氨酸精品.苯甲酸洗必泰甲醛六氯酚吐溫-80吐溫80+卵磷酯胺離子吐溫-80在標準檢驗方法中采用中和法來消除其防腐劑的抑菌作用。所用中和劑為吐溫-80和卵磷酯。這是考慮到化妝品應(yīng)用最多的防腐劑是尼泊金酯類，隨著化妝品工業(yè)的迅猛發(fā)展，防腐劑使用的種類也越來越多，如何選用中和劑，有待進一步探討。（2）化妝品供試液制備方法將各包裝的樣本外表消毒后送入操作室，在開蓋前將瓶內(nèi)樣品振搖混勻。消毒外蓋，擰開外蓋，再消毒內(nèi)蓋，并打開。不同劑型的采樣方法：液體化妝品：一般是透明或半透明液狀，如化妝水、頭油、花露水，冷燙液和部分洗發(fā)香波等，用吸管反復(fù)吸