含量方法學(xué).doc

含量測(cè)定分析方法驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn)簡(jiǎn)介審評(píng)四部 黃曉龍摘要：本文介紹了在對(duì)含量測(cè)定所用的分析方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證時(shí)，各項(xiàng)指標(biāo)的可接受標(biāo)準(zhǔn)，以利于判斷該分析方法的可行性。 關(guān)鍵詞：含量測(cè)定 分析方法驗(yàn)證 可接收標(biāo)準(zhǔn) 在進(jìn)行質(zhì)量研究的過程中，一項(xiàng)重要的工作就是要對(duì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中所涉及到的分析方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，以保證所用的分析方法確實(shí)能夠用于在研藥品的質(zhì)量控制。為規(guī)范對(duì)各種分析方法的驗(yàn)證要求，我國(guó)已于2005年頒布了分析方法驗(yàn)證的指導(dǎo)原則。該指導(dǎo)原則對(duì)需要驗(yàn)證的分析方法及驗(yàn)證的具體指標(biāo)做了比較詳細(xì)的闡述。但是文中未涉及各具體指標(biāo)在驗(yàn)證時(shí)的可接受標(biāo)準(zhǔn)，國(guó)際上已頒布的指導(dǎo)原則中也未發(fā)現(xiàn)相關(guān)的要求。另一方面，大多數(shù)藥品研發(fā)單位在進(jìn)行質(zhì)量研究時(shí)，已逐步認(rèn)識(shí)到分析方法驗(yàn)證的必要性與重要性，大都也在按照指導(dǎo)原則的要求進(jìn)行分析方法驗(yàn)證，但驗(yàn)證完后卻因沒有一個(gè)明確的可接受標(biāo)準(zhǔn)，而難以判斷該分析方法是否符合要求。本文結(jié)合國(guó)外一些大型藥品研發(fā)企業(yè)在此方面的要求，提出了在對(duì)含量測(cè)定方法進(jìn)行驗(yàn)證時(shí)的可接受標(biāo)準(zhǔn)，供國(guó)內(nèi)的藥品研發(fā)單位在進(jìn)行研究時(shí)參考。 1準(zhǔn)確度 該指標(biāo)主要是通過回收率來反映。驗(yàn)證時(shí)一般要求分別配制濃度為80、100和120的供試品溶液各三份，分別測(cè)定其含量，將實(shí)測(cè)值與理論值比較，計(jì)算回收率。 可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：各濃度下的平均回收率均應(yīng)在98.0%-102.0%之間，9個(gè)回收率數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）應(yīng)不大于2.0%。 2線性 線性一般通過線性回歸方程的形式來表示。具體的驗(yàn)證方法為： 在80至120的濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的供試液，分別測(cè)定其主峰的面積，計(jì)算相應(yīng)的含量。以含量為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸分析。 可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：回歸線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.998，Y軸截距應(yīng)在100響應(yīng)值的2以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。 3精密度 1）重復(fù)性 配制6份相同濃度的供試品溶液，由一個(gè)分析人員在盡可能相同的條件下進(jìn)行測(cè)試，所得6份供試液含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。 2）中間精密度 配制6份相同濃度的供試品溶液，分別由兩個(gè)分析人員使用不同的儀器與試劑進(jìn)行測(cè)試，所得12個(gè)含量數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。 4專屬性 可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：空白對(duì)照應(yīng)無干擾，主成分與各有關(guān)物質(zhì)應(yīng)能完全分離，分離度不得小于2.0。以二極管陣列檢測(cè)器進(jìn)行純度分析時(shí)，主峰的純度因子應(yīng)大于980。 5檢測(cè)限 主峰與噪音峰信號(hào)的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于3。 6定量限 主峰與噪音峰信號(hào)的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于10。另外，配制6份最低定量限濃度的溶液，所測(cè)6份溶液主峰的保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。 7耐用性 分別考察流動(dòng)相比例變化5、流動(dòng)相pH值變化0.2、柱溫變化5、流速相對(duì)值變化20時(shí)，儀器色譜行為的變化，每個(gè)條件下各測(cè)試兩次?？山邮艿臉?biāo)準(zhǔn)為：主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰與雜質(zhì)峰必須達(dá)到基線分離；各條件下的含量數(shù)據(jù)（n=6）的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。 8、系統(tǒng)適應(yīng)性 配制6份相同濃度的供試品溶液進(jìn)行分析，主峰峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，主峰保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰與雜質(zhì)峰必須達(dá)到基線分離，主峰的理論塔板數(shù)應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn)簡(jiǎn)介黃曉龍摘要：本文介紹了在對(duì)有關(guān)物質(zhì)檢查所用的分析方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證時(shí)，各項(xiàng)指標(biāo)的可接受標(biāo)準(zhǔn)，以利于判斷該分析方法的可行性。關(guān)鍵詞：有關(guān)物質(zhì)檢查 分析方法驗(yàn)證 可接收標(biāo)準(zhǔn)藥品中的有關(guān)物質(zhì)泛指在藥品的生產(chǎn)與儲(chǔ)存過程中產(chǎn)生的工藝雜質(zhì)或降解產(chǎn)物。由于這些有關(guān)物質(zhì)的存在會(huì)影響到藥品的純度，進(jìn)而可能會(huì)產(chǎn)生毒副作用，所以有關(guān)物質(zhì)的控制是藥品研發(fā)的一個(gè)重要方面，也是我們?cè)谒幤穼徳u(píng)中一直重點(diǎn)關(guān)注的要點(diǎn)之一。而要對(duì)有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行嚴(yán)格的控制，就離不開專屬性強(qiáng)、靈敏度高的分析方法，這就涉及到分析方法的篩選與驗(yàn)證。從現(xiàn)有的申報(bào)資料看，藥品研發(fā)單位已基本上意識(shí)到分析方法驗(yàn)證的重要性，但是對(duì)驗(yàn)證時(shí)各具體指標(biāo)是否可行尚沒有一個(gè)明確的可接受標(biāo)準(zhǔn)，從而難以對(duì)驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行評(píng)判。為解決這一問題，本文結(jié)合國(guó)外一些大型藥品研發(fā)企業(yè)在此方面的要求，提出了在對(duì)有關(guān)物質(zhì)檢查方法進(jìn)行驗(yàn)證時(shí)的可接受標(biāo)準(zhǔn)，供國(guó)內(nèi)的藥品研發(fā)單位在進(jìn)行研究時(shí)參考。1準(zhǔn)確度該指標(biāo)主要是通過回收率來反映。驗(yàn)證時(shí)一般要求根據(jù)有關(guān)物質(zhì)的定量限與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中該雜質(zhì)的限度分別配制三個(gè)濃度的供試品溶液各三份（例如某雜質(zhì)的限度為0.2%，則可分別配制該雜質(zhì)濃度為0.1、0.2和0.3的雜質(zhì)溶液），分別測(cè)定其含量，將實(shí)測(cè)值與理論值比較，計(jì)算回收率，并計(jì)算9個(gè)回收率數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）。該項(xiàng)目的可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：各濃度下的平均回收率均應(yīng)在80%-120%之間，如雜質(zhì)的濃度為定量限，則該濃度下的平均回收率可放寬至70%-130%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于10%。2線性線性一般通過線性回歸方程的形式來表示。具體的驗(yàn)證方法為：在定量限至一定的濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的供試液，分別測(cè)定該雜質(zhì)峰的面積，計(jì)算相應(yīng)的含量。以含量為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸分析?？山邮艿臉?biāo)準(zhǔn)為：回歸線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.990，Y軸截距應(yīng)在100響應(yīng)值的25以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于10%。3精密度1）重復(fù)性配制6份雜質(zhì)濃度（一般為0.1%）相同的供試品溶液，由一個(gè)分析人員在盡可能相同的條件下進(jìn)行測(cè)試，所得6份供試液含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于15%。2）中間精密度配制6份雜質(zhì)濃度（一般為0.1%）相同的供試品溶液，分別由兩個(gè)分析人員使用不同的儀器與試劑進(jìn)行測(cè)試，所得12個(gè)含量數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于20%。4專屬性可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：空白對(duì)照應(yīng)無干擾，該雜質(zhì)峰與其它峰應(yīng)能完全分離，分離度不得小于2.0。5檢測(cè)限雜質(zhì)峰與噪音峰信號(hào)的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于3。6定量限雜質(zhì)峰與噪音峰信號(hào)的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于10。另外，配制6份最低定量限濃度的溶液，所測(cè)6份溶液雜質(zhì)峰保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于5.0%。7耐用性分別考察流動(dòng)相比例變化5、流動(dòng)相pH值變化0.2、柱溫變化5、檢測(cè)波長(zhǎng)變化5nm、流速相對(duì)值變化20以及采用三根不同批號(hào)的色譜柱進(jìn)行測(cè)定時(shí)，儀器色譜行為的變化，每個(gè)條件下各測(cè)試兩次?？山邮艿臉?biāo)準(zhǔn)為：各雜質(zhì)峰的拖尾因子不得大于2.0，雜質(zhì)峰與其他成分峰必須達(dá)到基線分離；各條件下的雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)（n=6）的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，雜質(zhì)含量的絕對(duì)值在0.1以內(nèi)。8、系統(tǒng)適應(yīng)性配制6份相同濃度的雜質(zhì)溶液進(jìn)行分析，該雜質(zhì)峰峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于1.0%。另外，雜質(zhì)峰的拖尾因子不得大于2.0，理論塔板數(shù)應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。9溶液穩(wěn)定性按照分析方法分別配置對(duì)照品溶液與供試品溶液，平行測(cè)定兩次主成分與雜質(zhì)的含量，然后將上述溶液分別貯存在室溫與冰箱冷藏室（4）中，在1、2、3、5和7天時(shí)分別平行測(cè)定兩次主成分與雜質(zhì)的含量?？山邮艿臉?biāo)準(zhǔn)為：主成分的含量變化的絕對(duì)值應(yīng)不大于2.0%，雜質(zhì)含量的絕對(duì)值在0.1以內(nèi)，并不得出現(xiàn)新的大于報(bào)告限度的雜質(zhì)。FDA關(guān)于仿制藥申請(qǐng)中原料藥雜質(zhì)研究的指導(dǎo)原則（討論稿）介紹審評(píng)七室 史繼峰 摘要：本文主要介紹了FDA關(guān)于仿制藥雜質(zhì)研究的最新指導(dǎo)原則。該指導(dǎo)原則對(duì)1999年版的同名指導(dǎo)原則進(jìn)行了修訂，文中對(duì)仿制藥的雜質(zhì)研究及限度控制進(jìn)行了詳細(xì)闡述。介紹該指導(dǎo)原則，希對(duì)我國(guó)仿制藥研制有一些提示。 關(guān)鍵字：FDA 仿制藥 雜質(zhì)研究 指導(dǎo)原則 仿制藥申請(qǐng)：原料藥雜質(zhì)研究指導(dǎo)原則（討論稿）于2005年1月28日在FDA網(wǎng)站發(fā)布。FDA對(duì)1999年版同名指導(dǎo)原則進(jìn)行修訂是基于以下兩點(diǎn)考慮：其一，為了與2003年ICH修訂的Q3A（R）“新藥原料藥雜質(zhì)研究指導(dǎo)原則” 相一致，對(duì)仿制藥申請(qǐng)（ANDAs）同名指導(dǎo)原則中的“雜質(zhì)列表、可接受的標(biāo)準(zhǔn)及雜質(zhì)的合理控制（限度與方法）內(nèi)容進(jìn)行更新。其二，刪除1999年版指導(dǎo)原則中與Q3A（R）敘述重復(fù)的部分（如雜質(zhì)分類、分析過程及方法等等）。 限于篇幅，本文僅對(duì)其最重要部分“雜質(zhì)的合理控制（QUALIFICATIONS OF IMPURITIES）”（原文第四部分）作介紹。 雜質(zhì)的合理控制（QUALIFICATIONS OF IMPURITIES） A 質(zhì)控限度的考慮 ICH Q3A (R)中推薦的“質(zhì)控限度”是根據(jù)原料藥每日劑量來制訂的。如果所制訂的限度超過該限度值，就必須提供所訂限度的合理性依據(jù)。某些情況下，“質(zhì)控限度”可調(diào)高或降低。比如，當(dāng)有證據(jù)表明某藥物中的雜質(zhì)與副作用相關(guān)，就很有必要降低該雜質(zhì)限度。相反，如果雜質(zhì)與安全性無多大關(guān)聯(lián)，雜質(zhì)限度值可以設(shè)定高一些。FDA會(huì)根據(jù)患者人群、藥物分類及歷史數(shù)據(jù)等因素考慮申請(qǐng)者對(duì)雜質(zhì)限度的調(diào)整。 B 雜質(zhì)限度的研究方法 如果雜質(zhì)水平超過了ICH Q3A(R)中推薦的“質(zhì)控限度”，那么可以參考附錄1中的決策樹來制訂雜質(zhì)的合理限度。一般情況下，與其提供額外的論證資料還不如把雜質(zhì)水平控制在限度值以下更為簡(jiǎn)便。當(dāng)然，利用充足的文獻(xiàn)數(shù)據(jù)和資料也可以為雜質(zhì)限度提供依據(jù)。雜質(zhì)限度研究應(yīng)考慮諸多因素，包括患者人群、每日劑量、給藥途徑和用藥持續(xù)時(shí)間等。雜質(zhì)限度研究可以用含有擬控制雜質(zhì)的原料藥，也可以直接用分離出來的雜質(zhì)進(jìn)行。雜質(zhì)限度研究可以采用下面三種方法。 第一，對(duì)比分析法 ANDA中原料藥的雜質(zhì)可以采用相同的分析方法（如HPLC研究方法），與FDA已批準(zhǔn)的同品種進(jìn)行對(duì)比研究。一般情況下，已批準(zhǔn)同品種應(yīng)選擇對(duì)照藥（RLD）。然而，如果無法獲得RLD藥物，也可以與具有相同給藥途徑的藥物進(jìn)行對(duì)比研究（如片劑與膠囊比較）。建議用具有可比性的樣品（如樣品的留樣時(shí)間要一致）進(jìn)行穩(wěn)定性研究，以獲得有意義的雜質(zhì)對(duì)比研究結(jié)果。 如果原料藥雜質(zhì)水平與FDA已批準(zhǔn)的同品種的雜質(zhì)水平相當(dāng)，那么可以認(rèn)為該雜質(zhì)得到合理控制。 第二，科學(xué)文獻(xiàn)和主要代謝物法 如果已定性雜質(zhì)的水平得到科學(xué)文獻(xiàn)的充分論證，那么該雜質(zhì)的限度就無需進(jìn)一步論證。此外，如果某雜質(zhì)本身也是原料藥在體內(nèi)的主要代謝物，通常也認(rèn)為該雜質(zhì)已得到合理控制。 第三，遺傳毒性研究法 考慮到遺傳毒性試驗(yàn)既費(fèi)時(shí)間又代價(jià)不菲，此法一般是在前兩種方法都無法對(duì)雜質(zhì)合理研究論證才采取的方法。這項(xiàng)研究可以采用含擬控制雜質(zhì)的制劑或原料藥，也可以使用分離得到的雜質(zhì)直接進(jìn)行研究。 總之，雜質(zhì)合理控制的最基本原則就是考慮其安全因素。如果滿足以下一點(diǎn)或幾點(diǎn)要求，某雜質(zhì)基本可認(rèn)為得到合理控制： 當(dāng)實(shí)測(cè)水平和擬接受的雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)沒有超過FDA已批同類藥品的雜質(zhì)水平。 當(dāng)雜質(zhì)本身就是原料藥的主要代謝物。 當(dāng)實(shí)測(cè)水平和擬接受的雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)得到科學(xué)文獻(xiàn)的充分論證。 當(dāng)實(shí)測(cè)水平和擬接受的雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)未超過體內(nèi)遺傳毒性研究的雜質(zhì)水平。 從FDA關(guān)于仿制藥申請(qǐng)的雜質(zhì)研究指導(dǎo)原則可知，我國(guó)對(duì)仿制藥申請(qǐng)的要求正在與國(guó)際先進(jìn)水平接近，但從審評(píng)的情況看，只有少數(shù)申報(bào)單位的研究能達(dá)到要求。譯者盼望本譯文對(duì)仿制藥的研制者有一些啟示，并期望與大家共同討論。對(duì)雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則常見問題的認(rèn)識(shí)審評(píng)四部 黃曉龍 2005年3月18日國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)司正式發(fā)布了2003年開始起草的化學(xué)藥16個(gè)技術(shù)指導(dǎo)原則。為配合這些指導(dǎo)原則的實(shí)施，有必要采用各種方式對(duì)這些指導(dǎo)原則進(jìn)行宣傳，以加深各有關(guān)方面對(duì)指導(dǎo)原則內(nèi)涵的理解。根據(jù)在雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則的起草過程中及發(fā)布后所收集的意見進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)不少同仁對(duì)其中的一些內(nèi)容尚不太理解，作為主要起草人，我想談一些個(gè)人的看法，以供大家在學(xué)習(xí)使用該指導(dǎo)原則時(shí)參考。 1質(zhì)控限度如何使用的問題 在該指導(dǎo)原則中，根據(jù)原料藥與制劑的臨床用藥量的大小分別提出了單個(gè)雜質(zhì)的質(zhì)控限度。但在進(jìn)行質(zhì)量研究與標(biāo)準(zhǔn)制訂時(shí)如何使用這些限度，尚存在一些疑義?，F(xiàn)對(duì)該限度的使用解釋如下：在本指導(dǎo)原則中反復(fù)強(qiáng)調(diào)，在制訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的雜質(zhì)限度時(shí)需首先考慮雜質(zhì)的安全性。而雜質(zhì)的安全性評(píng)價(jià)主要是綜合藥物研發(fā)過程中所進(jìn)行的藥理毒理及臨床研究中的毒副作用與不良反應(yīng)來判斷的。由于上述研究所用的樣品本身會(huì)包含一定種類與數(shù)量的雜質(zhì)，所以如果在這些研究中并未明顯反映出與雜質(zhì)有關(guān)的毒副作用，則可認(rèn)為該雜質(zhì)已經(jīng)通過了安全性的驗(yàn)證。在此前提之下，如果該雜質(zhì)的含量同時(shí)也在正常的制備工藝所允許的限度范圍內(nèi)，那么根據(jù)試驗(yàn)樣品中雜質(zhì)的含量所確定的限度可認(rèn)為是合理的。之所以引入質(zhì)控限度的規(guī)定，主要是為了減少對(duì)雜質(zhì)安全性的驗(yàn)證。如果某一雜質(zhì)的含量低于規(guī)定的質(zhì)控限度，則不必對(duì)該雜質(zhì)的安全性進(jìn)行確認(rèn)，除非已知該雜質(zhì)具有明顯的毒性。 2附件中為何不設(shè)定總雜質(zhì)限度的問題 在指導(dǎo)原則中提出的各種限度都是針對(duì)單個(gè)雜質(zhì)的限度。之所以未規(guī)定總雜質(zhì)的限度，主要是考慮：就每一個(gè)具體的藥品而言，所含雜質(zhì)種類的多寡不一，每個(gè)雜質(zhì)的含量也不盡相同，因此，很難在指導(dǎo)原則中給出一個(gè)統(tǒng)一的總雜質(zhì)限度。盡管指導(dǎo)原則中未規(guī)定總雜質(zhì)的具體限度，但是作為雜質(zhì)控制的一個(gè)重要參數(shù)，指導(dǎo)原則中已明確要求分別制訂每一個(gè)已知雜質(zhì)、未知雜質(zhì)及總雜質(zhì)的限度。 3為何設(shè)定鑒定限度的問題 在國(guó)外相關(guān)