GB 5009.154-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中維生素B6的測(cè)定

016    前  言本標(biāo)準(zhǔn)代替003食品中維生素010食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中維生素本標(biāo)準(zhǔn)與003相比,主要變化如下:標(biāo)準(zhǔn)名稱(chēng)修改為“食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中維生素增加了高效液相色譜法。0161    食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中維生素圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中維生素標(biāo)準(zhǔn)第一法為高效液相色譜法,適用于添加了維生素二法為微生物法,適用于各類(lèi)食品中維生素一法 高效液相色譜法2 原理試樣經(jīng)提取等前處理后,經(jīng)效液相色譜標(biāo)法定量測(cè)定維生素哆醇、吡哆醛、吡哆胺)的含量。3 試劑和材料除非另有說(shuō)明,本方法所用試劑均為分析純,水為6682規(guī)定的一級(jí)水。烷磺酸鈉(乙酸(乙胺(色譜純。醇(色譜純。酸(氧化鈉(粉酶:酶活力酸溶液():量取45水稀釋并定容至100 鹽酸溶液():吸取9水稀釋并定容至1000 氫氧化鈉溶液():稱(chēng)取2050卻后,用水定容至100 氫氧化鈉溶液():50卻后,用水定容至100酸吡哆醇(8純度98%,0162    的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。酸吡哆醛(5純度99%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。鹽酸吡哆胺(24純度99%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。哆醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1mg/鹽酸溶液溶解后定容到50避光保存,有效期1個(gè)月。哆醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1mg/鹽酸溶液溶解后定容到50避光保存,有效期1個(gè)月。哆胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1mg/鹽酸溶液溶解后定容到50避光保存,有效期1個(gè)月。生素0g/分別準(zhǔn)確吸取吡哆醇、吡哆醛、鹽酸溶液稀釋并定容至50用前配制。生素100水定容。用前配制。注:標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液在使用前需要進(jìn)行濃度校正,校正方法參照附錄A。4 效液相色譜儀:帶熒光檢測(cè)器。平:.3 旋混合器。聲波振蕩器。光光度計(jì)。溫培養(yǎng)箱,或性能相當(dāng)者。5 淀粉的試樣a) 固體試樣:稱(chēng)取混合均勻的固體試樣約5g(于150入約2550的水,混勻。勻后向錐形瓶中充氮,蓋上瓶塞,置5060培養(yǎng)箱內(nèi)約30出冷卻至室溫。b) 液體試樣:稱(chēng)取混合均勻的液體試樣約20g(150勻。勻后向錐形瓶中充氮,蓋上瓶塞,置5060培養(yǎng)箱內(nèi)約30出冷卻至室溫。含淀粉的試樣a) 固體試樣:稱(chēng)取混合均勻的固體試樣約5g(于1500163    50的水,混勻。靜置50卻至室溫。b) 液體試樣:稱(chēng)取混合均勻的液體試樣約20g(150置50 待測(cè)液的制備用鹽酸溶液,置約1上述錐形瓶放入超聲波振蕩器中,超聲振蕩約10試樣溶液轉(zhuǎn)移至50水沖洗錐形瓶。洗液合并于50水定容至50取50面放入漏斗和濾紙,把定容后的試樣溶液倒入其中,自然過(guò)濾。試管收集,轉(zhuǎn)移1:操作過(guò)程應(yīng)避免強(qiáng)光照射。器參考條件儀器參考條件列出如下:a) 色譜柱:長(zhǎng)150填料粒徑5m,或相當(dāng)者;b) 流動(dòng)相:甲醇50水溶解并定容到1000c) 流速:1mL/d) 柱溫:30;e) 檢測(cè)波長(zhǎng):激發(fā)波長(zhǎng)293射波長(zhǎng)395nm;f) 進(jìn)樣體積:10L。準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作將維生素定各組分的峰面積,以相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。樣溶液的測(cè)定將試樣溶液注入高效液相色譜儀中,得到各組分相應(yīng)的峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得到待測(cè)試樣溶液中維生素 分析結(jié)果的表述試樣中維生素)計(jì)算:001000(1)式中:試樣中維生素位為毫克每百克(00g);根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算得到的試樣中維生素位為微克每毫升(g/V試樣溶液的最終定容體積,單位為毫升(m試樣質(zhì)量,單位為克(g);100換算為100克樣品中含量的換算系數(shù);1000將濃度單位g/0164    試樣中維生素)計(jì)算:X=醛胺(2)式中:X  試樣中維生素吡哆醇計(jì))的含量,單位為毫克每百克(00g);試樣中吡哆醇的含量,單位為毫克每百克(00g);試樣中吡哆醛的含量,單位為毫克每百克(00g);吡哆醛的含量換算成吡哆醇的系數(shù);試樣中吡哆胺的含量,單位為毫克每百克(00g);吡哆胺的含量換算成吡哆醇的系數(shù)。結(jié)果保留三位有效數(shù)字。7 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的15%。8 法檢出限為:00g,00g,00g;方法定量限為:00g,00g,00g。第二法 微生物法9 原理食品中某一種細(xì)菌的生長(zhǎng)必須要有某一種維生素的存在,卡爾斯伯(母菌在有維生素一定條作下維生素比濁法測(cè)定該菌在試樣液中生長(zhǎng)的渾濁度,與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)相比較得出試樣中維生素0 試劑和材料除非另有說(shuō)明,本方法所用試劑均為分析純,水為6682規(guī)定的二級(jí)水。培養(yǎng)基可使用符合測(cè)試要求的商品化的培養(yǎng)基。酸(酸(氧化鈉(哆醇得含維生素脂(n?；c(甲酚綠(0165    酸溶液():水稀釋并定容至1000酸溶液():于2000水稀釋至1000酸溶液():于20008水稀釋至1000氧化鈉溶液(10):稱(chēng)取4040卻后,用水定容至100氧化鈉溶液():移取10氫氧化鈉溶液1水定容至100理鹽水(9g/L):稱(chēng)取9水溶解后定容至1000121下高壓滅菌15卻后備用。甲酚綠溶液():氫氧化鈉溶液研磨,加少許水繼續(xù)研磨,直至完全溶解,用水稀釋到250養(yǎng)基(培養(yǎng)基組分與配制方法參見(jiàn)附錄C)哆醇哆醇芽浸粉瓊脂培養(yǎng)基。準(zhǔn)品鹽酸吡哆醇(8純度99%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。哆醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(100g/準(zhǔn)確稱(chēng)取122的鹽酸溶液溶解并定容至10004下避光保存,有效期1個(gè)月。哆醇標(biāo)準(zhǔn)中間液(1g/準(zhǔn)確吸取1水稀釋并定容至100哆醇標(biāo)準(zhǔn)工作液(50ng/準(zhǔn)確吸取5水定容至1001 柵分光光度計(jì)。平:熱恒溫培養(yǎng)箱,或性能相當(dāng)者。壓釜,或性能相當(dāng)者。旋混合器。心機(jī)。凈工作臺(tái),或性能相當(dāng)者。0166    12 分析步驟注:預(yù)包埋了菌種的商業(yè)化維生素檢測(cè)原理相同,檢測(cè)效果相當(dāng),實(shí)際使用時(shí)按試劑盒中的操作指南進(jìn)行操作。種的制備及保存(避光處理)種復(fù)壯:卡爾斯伯酵母(080菌種或等效菌種凍干品,幾滴復(fù)溶的菌液分別接種2支裝有1030水浴振蕩培養(yǎng)20h24h。儲(chǔ)備菌種制備:將菌種復(fù)壯培養(yǎng)液劃線(xiàn)接種于代培養(yǎng)基)斜面上,于30培養(yǎng)20h24h,于28冰箱內(nèi)保存,此菌種為第一代月儲(chǔ)備菌種;以后每月將上一代的月儲(chǔ)備菌種劃線(xiàn)接種于代培養(yǎng)基)斜面,于30培養(yǎng)20h24h,于28冰箱內(nèi)保存,有效期一個(gè)月,此菌種為當(dāng)月儲(chǔ)備菌種。儲(chǔ)備菌種制備:每周從當(dāng)月儲(chǔ)備菌種接種于代培養(yǎng)基)斜面,于30培養(yǎng)20h24h,于28冰箱內(nèi)保存,有效期7d。保存數(shù)星期以上的菌種,不能立即用作制備接種液之用,一定要在使用前每天移種一次,連續(xù)2d3d,方可使用,否則生長(zhǎng)不好。種菌懸液制備:在維生素周儲(chǔ)備菌種轉(zhuǎn)接于10子培養(yǎng)液)中,可同時(shí)制備2管,于30振蕩培養(yǎng)20h24h,得到測(cè)定用的種子培養(yǎng)液,從月儲(chǔ)備菌種到種子培養(yǎng)液總代數(shù)不超過(guò)5代。將該種子培養(yǎng)液于3000r/去上清液;用10心,傾去上清液,用生理鹽水重復(fù)洗滌2次;再加10離心管置于渦旋混勻器上充分混合,使菌種成為混懸液,將此菌懸液倒入已消毒的注射器內(nèi),立即使用。0g(中維生素入100硫酸溶液。放入高壓釜121下水解5h,取出冷卻,溴甲酚綠做指示劑(指示劑由黃將錐形瓶?jī)?nèi)的溶液轉(zhuǎn)移到100蒸餾水定容至100紙過(guò)濾,保存濾液于冰箱內(nèi)備用(有效期不超過(guò)36h)。注:整個(gè)試樣處理過(guò)程需要注意避光操作。準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備:6勻,加棉塞。樣管的制備:棉塞塞住試管,將制備好的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和試樣測(cè)定管放入高壓釜121下高壓滅菌10至室溫備用。種和培養(yǎng):每管種一滴接種液,于30溫箱中培養(yǎng)18h22h。定將培養(yǎng)后的標(biāo)準(zhǔn)管和試樣管從恒溫箱中取出后,用分光光度計(jì)于550標(biāo)準(zhǔn)管的零管調(diào)零,測(cè)定各管的吸光度值。以標(biāo)準(zhǔn)管維生素光度值為縱坐標(biāo),繪制維生素試樣管得到的吸光度值,在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查到試樣管維生素0167    13 分析結(jié)果的表述試樣提取液中維生素)計(jì)算:=1+2+33(3)式中: 試樣提取液中維生素位為納克每毫升(ng/i各試樣測(cè)定管中維生素位為納克每毫升(ng/試樣中維生素)計(jì)算:X=V100m106(4)式中:X 試樣中維生素吡哆醇計(jì))的含量,單位為毫克每百克(00g);試樣提取液中維生素位為納克每毫升(ng/V試樣提取液的定容體積與稀釋體積總和,單位為毫升(m試樣質(zhì)量,單位為克(g);100106折算成每100算結(jié)果保留到小數(shù)點(diǎn)后兩位。14 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的15%。15 00g。0168    附 錄 哆醛、吡哆胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,鹽酸溶液定容到100為標(biāo)準(zhǔn)校正液。鹽酸溶液作為對(duì)照溶液。收值的測(cè)定用1對(duì)照溶液為空白對(duì)照,測(cè)定各標(biāo)準(zhǔn)校正溶液的吸收值。準(zhǔn)溶液的濃度計(jì)算各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的質(zhì)量濃度按式(算:i=(中:i 維生素哆醇、吡哆醛、吡哆胺)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的質(zhì)量濃度,單位為微克每毫升(g/維生素哆醇、吡哆醛、吡哆胺)標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試液在各自最大吸收波長(zhǎng)維生素哆醇、吡哆醛、吡哆胺)標(biāo)準(zhǔn)品的分子量(i維生素哆醇、吡哆醛、吡哆胺)鹽酸溶液中的吸收系數(shù)(V稀釋因子;無(wú)維生素哆醇、吡哆醛、吡哆胺)的對(duì)照溶液的換算因子(生素)0169    附 錄 01610   附 錄 哆醇餾水1000解于10021滅菌15用。解于100熱煮沸使瓊脂融化,混合均勻后分裝于試管中,每管1021滅菌15成斜面?zhèn)溆?。解?000熱煮沸使瓊脂融化,混合均勻后分裝于試管中,每