華東地區(qū)規(guī)?；i場的回腸炎流行病學調(diào)查(預防獸醫(yī)學報).doc

1、華東地區(qū)規(guī)?；i場的回腸炎流行病學調(diào)查曲向陽1,2 姚火春2* 張璇1 黃濤1 李喜煥1（1. 美國禮來亞洲公司上海代表處，上海， 200020；2.南京農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，江蘇南京， 210095；）中圖分類號：S855.1 文獻標識碼：C 文章編號：摘要：為調(diào)查回腸炎在華東地區(qū)三省一市規(guī)模化豬場的感染狀態(tài)，我們利用商品化的胞內(nèi)勞森氏菌快速檢測試劑盒Lawsonia FirsttestTM對來自21個規(guī)模化豬場的321份糞便樣品進行胞內(nèi)勞森氏菌檢測。結果表明，所檢測的21個規(guī)模化豬場100存在回腸炎感染。而且感染率隨著豬只日齡增長而逐漸升高。4周齡仔豬即存在感染,感染率為9.1%，8周齡（4

2、1.5%）10周齡(67.9%)為主要感染開始期，12周齡(94.3%)14周齡(87.9%)為感染高峰期，所檢測樣品的總體陽性率為59.81%，強陽性率為31.2%，結果表明：華東地區(qū)規(guī)模化豬場普遍存在亞臨床型回腸炎感染。此外，檢測結果受藥物保健方案影響較大。關鍵詞：豬回腸炎；胞內(nèi)勞森氏菌；流行病學調(diào)查；Lawsonia FIRSTtestTM；糞便；Epidemiological survey of Porcine Ileitis on Intensive Swine Farms in East ChinaQU Xiangyang1,2 ,YAO Huochun2*, ZHANG Xuan

3、1, HUANG Tao1,LI Xihuan1 (1. Elanco China,Shanghai 200020,China 2.Veterinary Medicine College of Nanjing Agricultural University,Nanjing,210095,China)Abstract：The epidemiological survey of porcine ileitis on intensive swine farms in East China was carried out by using commercialized Lawsonia intrace

4、llularis test kit(Lawsonia FIRSTtestTM). A total of 321 fecal samples of pigs with different weeks-old were collected for detection of L.intracellularis. The results showed that L.intracellularis infection was 100% on the 21 intensive swine farms. The positive rate of the pig infection was increased

5、 as the pigs growing. The earliest positive samples were detected from 4 week-old piglets with 9.1% positive. Onset of ileitis in pigs on most of the farms was between 8 weeks old with 41.5% positive to 10 weeks old with 67.9% positive. Pigs with the highest positive rat of ileitis were during 12 we

6、eks old (94.3%) to 14 weeks old (87.9%). The total positive percentage of the 321 samples was 59.81% including 31.2% strong positive. The results indicated that pigs were mainly displayed the subclinical signs of ileitis on intensive swine farms in East China. However, the detection results could be

7、 influenced intensively by medication interfering.Key words：Porcine Ileitis; Lawsonia intracellularis ;Epidemiological Investigation；Lawsonia FIRSTtestTM ;Fecal 豬回腸炎又名豬增生性腸炎、豬增生性出血性腸炎, 是由胞內(nèi)勞森氏菌(Lawsonia intracellularis)感染所致的以回腸、盲腸、結腸粘膜呈腺瘤樣增生為主要特征的一種重要豬腸道疾病。該病易感染生長育肥豬、后備母豬，嚴重影響豬只飼料效率與生長速度，對養(yǎng)豬業(yè)的經(jīng)濟效益影響

8、嚴重1。據(jù)Jensen報道，在美國每頭回腸炎感染豬的經(jīng)濟損失至少1.531美元2。依據(jù)臨床癥狀差異，可分為急性型、慢性型與亞臨床型。急性型多發(fā)于新引進的后備母豬及17周齡以上的育肥豬，健康豬群似乎更易感染急性型回腸炎3。常表現(xiàn)為出血性下痢，甚至突然死亡。慢性型與亞臨床型回腸炎無典型臨床癥狀，2周齡20周齡的豬只均易感染4 ，無法依據(jù)臨床癥狀進行診斷。為研究回腸炎在華東三省一市的流行情況，從2009年12月至2011年4月采用Lawsonia FIRSTtest TM回腸炎診斷試劑盒對規(guī)?；i場糞便樣品中的胞內(nèi)勞森氏菌進行了病原學調(diào)查，以期了解回腸炎在該地區(qū)的感染率及感染時間點，為該病的精準化策

9、略性用藥預防或疫苗免疫提供實驗依據(jù)。1 材料與方法1.1 樣品采集從華東三省一市 21個規(guī)?；i場隨機采集特定周齡的新鮮松軟或水泥樣的糞便樣品，各3克。糞便主要來自于4周齡、6周齡、8周齡、10周齡、12周齡、14周齡、后備母豬與經(jīng)產(chǎn)母豬，每階段樣品作23份重復，采樣后立即檢測。1.2 檢測試劑本實驗采用德國Microcoat公司開發(fā)的Lawsonia FIRSTtest TM回腸炎現(xiàn)場診斷試劑盒（免疫磁珠法，美國禮來公司擁有專利權）。其原理與雙抗體夾心ELISA類似。通過對比顏色變化，對胞內(nèi)勞森氏菌的感染狀態(tài)進行半定量檢測。1.3檢測方法依照FIRSTtestTM試劑盒說明書進行，步驟如下。

10、樣品稀釋與沉淀：將1g糞便樣品與5mL樣品稀釋緩沖液在樣品收集管中混合，搖勻后，放在試管架上靜置5min；樣品轉(zhuǎn)移：分別使用不同的移液管吸取0.5mL的上清液至分析管（管內(nèi)含有勞森氏菌多克隆抗體包被的免疫磁珠）中，設立陽性對照組（陽性對照為0.5mL勞森氏菌菌液），搖勻后，將分析管放在試管架上孵育30min；磁珠分離與洗滌：將分析管轉(zhuǎn)移至磁體架上進行磁頭分離，然后洗滌2次；加入抗體過氧化物酶共軛物：分別向分析管中加入0.5mL的抗體過氧化物酶共軛物，搖勻后，將分析管放置在試管架上孵育20min；磁珠分離與洗滌：同步驟；加入TMB顯色：分別向分析管中加入0.5mL的TMB底物顯色液，并設立陰性對

11、照（陰性對照管內(nèi)含有勞森氏菌多克隆抗體包被的免疫磁珠），搖勻后，孵育7分鐘；結果判讀：將分析管放置在磁鐵架上，記錄顏色變化，陽性呈藍色，陰性液體透明。2 結果我們從2010年12月至2012年4月間利用商品化的胞內(nèi)勞森氏菌快速檢測試劑盒（Lawsonia FirsttestTM）對來自華東地區(qū)三省一市21個規(guī)?；i場的321份糞便樣品進行胞內(nèi)勞森氏菌檢測。檢測結果表明：所檢測的21個規(guī)?；i場100存在回腸炎感染，而且感染率隨著豬只日齡增長而逐漸升高。2.1 華東三省一市總體感染狀態(tài) 表1數(shù)據(jù)顯示可知，21個豬場100存在勞森氏菌感染， 321份樣品的總體陽性率為59.8%（192/321），

12、且不同地區(qū)的總體陽性率差異不顯著。從表2可知，不同生長階段的感染率為：4周齡，9.1%；6周齡，28.3%；8周齡，41.5%；10周齡，67.9%；12周齡、14周齡及經(jīng)產(chǎn)母豬均超過85。說明華東地區(qū)大部分豬場從8周齡10周齡開始感染回腸炎，12周齡14周齡達到感染高峰期。感染率隨周齡的增加而升高，且呈高比例持續(xù)性感染狀態(tài)（如:后備母豬與經(jīng)產(chǎn)母豬）。表1 不同省市回腸炎的發(fā)病率Table 1 Prevalence status of Porcine ileitis in different regions of East China地區(qū)Region豬場數(shù)No. of swine farms感

13、染豬場數(shù)No.of positive swine farms樣品陽性數(shù)率Positive No./Total sample No.江蘇Jiangsu66（100%）68/101(67.3%)浙江Zhejiang88(100%)71/120（59.2%）安徽Anhui22(100%)18/30（60.0）上海Shanghai55(100%)35/70（50.0%）總計Total2121(100%)192/321(59.8%)表2 華東地區(qū)不同省市不同階段豬回腸炎的感染狀況Table 2 Positive rate of porcine ileitis at different stages in

14、 pigs 地區(qū)Region4周齡4 weeks old6周齡6 weeks old8周齡8 weeks old10周齡10 weeks old12周齡12 weeks old14周齡14 weeks old后備母豬Gilts經(jīng)產(chǎn)母豬Sows江蘇Jiangsu0.0%(0/12)43.8%(7/16)50.0%(8/16)93.8%(15/16)100.0%(16/16)100.0%(12/12)75.0%3/4100%(9/9)浙江Zhejiang16.7%(2/12)20.0%(4/20)50.0%(10/20)60.0%(12/20)100%(20/20)75.0%(9/12)0/087

15、.5%(14/16)安徽Anhui33.3%(1/3)20.0%(1/5)20.0%(1/5)100.0%(5/5)100.0%(5/5)66.7%(2/3)0/0100%(4/4)上海Shanghai0.0%(0/6)25.0%(3/12)25.0%(3/12)33.3%(4/12)75.0%(9/12)100%(6/6)100%(2/2)100%(8/8)總計 Total9.1%(3/33)28.3%(15/53)41.5%(22/53)67.9%(36/53)94.3%(50/53)87.9%(29/33)83.3%(5/6)94.6%(35/37)從表3可知，所檢樣品的總體強陽性率為3

16、1.2%。強陽性率也隨著周齡的增加而顯著提高，14周齡時高達66.7%。后備母豬與經(jīng)產(chǎn)母豬的強陽性率分別為66.7%與48.6%。表3各生長階段回腸炎感染強陽性率Table3 Strong positive rate of porcine ileitis at different growing stages生長階段Growing stage4周齡4 weeks old6周齡 6 weeks old8周齡 8 weeks old10周齡10 weeks old12周齡12 weeks old14周齡 14 weeks old后備母豬Gilts經(jīng)產(chǎn)母豬Sows匯總Total強陽性率Strong

17、positive rate 0/33(0.0%)8/53(15.1%)13/53(24.5%)18/36(34.0%)17/53(32.1%)22/33(66.7%)4/6(66.7%)18/37(48.6%)31.2%陽性率Positive rate3/33(9.1%) 15/53 (28.3%) 22/53 (41.5%)36/53(67.9%) 50/53 (94.3%)29/33(87.9%) 5/6 (83.3%)35/37(94.59%)59.8%2.2 不同省市間感染的差異性從區(qū)域角度分析（安徽檢測樣本較少，不作比較），浙江、江蘇與上海在感染時間與總體陽性率方面均存在差異（見表2

18、）。從90以上的樣品呈現(xiàn)陽性時的周齡來看，江蘇最早（10周齡），浙江次之（12周齡），上海最晚（14周齡）?？傮w陽性率也顯示，江蘇地區(qū)最高（67.3%）,浙江次之（59.2%）,上海最低（50.0%）。2.3 未經(jīng)有效藥物干預的豬場的回腸炎感染狀態(tài)圖2為上海某未使用對勞森氏菌敏感藥物干預的豬場的感染狀態(tài)。 6周齡前豬群處于陰性狀態(tài)，而8周齡后全群呈陽性或強陽性，特別是種豬群(強陽性)。4周齡4 weeks age6周齡6 weeks age8周齡8 weeks age母豬Sows陰性Negative陽性Positive陽性Positive陰性Negative母豬Sows14周齡14 weeks

19、 age12周齡12 weeks age10周齡10 weeks age圖2 華東地區(qū)某豬場不同周齡豬糞樣中胞內(nèi)勞森氏菌的檢測結果Figure 2 Detection results of Lintracellularis in fecal samples of different week-old pigs from certain swine farm 2.4 用藥方案對感染狀態(tài)的影響表4為浙江8個豬場的各自檢測結果。因各場的飼養(yǎng)管理、生物安全，特別是用藥方案等因素不同，感染時間存在明顯差異。ZJ6在4周齡即存在感染，大部分豬場出現(xiàn)感染的時間在8周齡10周齡（5060），12周齡100感染

20、。ZJ2、ZJ4、ZJ6的用藥方案均對檢測結果產(chǎn)生了階段性的影響（表4）。表4 浙江8個豬場的回腸炎的感染狀況Table4 Infection status of ileitis in 8 swine farms of Zhejiang Province豬場Farms4周齡4 weeks old6周齡6 weeks old8周齡8 weeks old10周齡10 weeks old12周齡12 weeks old14周齡14 weeks old經(jīng)產(chǎn)母豬SowsZJ10/20/21/22/22/2ZJ20/30/32/30/33/33/32/2ZJ30/30/33/32/33/30/32/2ZJ

21、42/21/20/22/22/2ZJ50/30/30/33/33/32/32/2ZJ62/30/32/32/33/33/32/2ZJ72/22/22/22/20/2ZJ80/20/22/22/22/2總計 Total16.7%(2/12)20.0%(4/20)50.0%(10/20)60.0%(12/20)100%(20/20)75.0%(9/12)87.5%(14/16)圖3為兩個豬場使用不同藥物方案對回腸炎干預后的檢測結果。第一個豬場在8周齡10周齡使用泰樂菌素（泰農(nóng)40，美國禮來公司產(chǎn)品）干預，結果呈陰性或弱陽性。而第二個豬場在第9周齡使用金霉素干預后，10周齡樣品暫時呈陰性，但12周齡

22、樣品再次轉(zhuǎn)陽性。藥物Medication陽性 Positive陰性Negative母豬Sows12周齡12 weeks old10周齡10 weeks old8周齡8 weeks old6周齡6 weeks oldTylosin（Tylan 40）泰樂菌素（泰農(nóng)40）6周齡6 weeks old8周齡8 weeks old10周齡10 weeks old12周齡12 weeks old母豬Sows 陰性 陽性 Negative PositiveCTC金霉素圖3不同藥物對檢測結果的影響Figure3 The effect of different medication protocols on

23、testing results3.討論目前回腸炎的主要診斷方法包括利用PCR、免疫過氧化酶法檢測糞便樣品中的勞森氏菌或采用ELISA、IFA等檢測胞內(nèi)勞森菌抗體5。本調(diào)查采用的FIRSTtestTM檢測可在豬場現(xiàn)場快速檢測糞便中是否含有感染劑量的勞森氏菌，適用于規(guī)模化豬場回腸炎感染狀態(tài)與防控效果的自我評估。回腸炎多發(fā)生于生長育肥階段，但各國的開始感染時間存在差異6，故所檢樣品來自于4周齡14周齡保育豬、生長豬、后備母豬及經(jīng)產(chǎn)母豬。本次調(diào)查時未刻意挑選生長育肥階段有頑固性腹瀉的豬場進行檢測。但總體陽性率高達59.8，說明華東地區(qū)規(guī)模化豬場亞臨床型回腸炎感染比例很高。華東地區(qū)規(guī)?；i場100%呈胞

24、內(nèi)勞森氏菌陽性，這與其它國家與地區(qū)的報道基本相似（美國:90.9%7；韓國:1008；丹麥:93.7%9）。Guedes等人10報道：保育豬從7周齡左右開始排菌，13周齡16周齡達到排菌高峰期。本調(diào)查結果與Guedes等的報道基本吻合,但華東地區(qū)部分豬場的感染時間更早些（6周齡的感染率達28.3%）。不同省市回腸炎感染的差異性主要與飼養(yǎng)管理和藥物保健方案有關，比如：上述上海地區(qū)5個豬場在保育后期與生長育肥前期均采用過相關藥物（如泰樂菌素、泰妙菌素、替米考星）對支原體等呼吸道疾病進行干預，同時控制了回腸炎的發(fā)生。樣品強陽性率的分布狀態(tài)說明：14周齡以后的生長育肥豬及后備母豬正在大量排菌，其強感染

25、所造成的經(jīng)濟損耗值得關注。各胎次經(jīng)產(chǎn)母豬的陽性率均很高，說明經(jīng)產(chǎn)母豬排菌具有持續(xù)性，可成為傳染源。保育前期豬的回腸炎感染率比較低（4周齡:9.1%;6周齡:28.3%）的原因可能如下。第一：藥物干預。豬場保育前期常用藥物如泰樂菌素、替米考星、金霉素等對胞內(nèi)勞森氏菌有抑制或殺滅所用。第二：母源抗體的影響。據(jù)Guedes等人10發(fā)現(xiàn)抗體陽性的母豬所產(chǎn)仔豬的母源抗體可持續(xù)至5周齡，可保護哺乳仔豬與保育前期豬免受勞森氏菌感染。隨著母源抗體的消退，加之保育轉(zhuǎn)群應激與衛(wèi)生消毒等生物安全措施不到位等，回腸炎易感性增加。同一豬場同一生長階段不同樣品的檢測結果一致性很高（表4），可說明，第一：本調(diào)查中所使用的F

26、IRSTtestTM回腸炎檢測試劑盒的重復性良好；第二：胞內(nèi)勞森氏菌在豬群中傳播速度快，感染所需病原菌量比較低。據(jù)smith等人報道11，豬只感染回腸炎所需胞內(nèi)勞森氏菌數(shù)量為104106，而每克糞便中含有勞森氏菌7108個。藥物對回腸炎檢測結果影響顯著。故在檢測前應先調(diào)查豬場的用藥狀況、臨床癥狀、生長速度等信息，以便結合檢測結果對豬場的感染狀況作綜合診斷。表4結果顯示：ZJ2與ZJ4均在9周齡10周齡用藥干預，ZJ6在5周齡6周齡用藥干預。但回腸炎在這三個豬場均復發(fā)，這可能與藥物選擇及使用方法有關。在藥物防控方面應注意以下三點：第一：敏感藥物及其藥動學。所選藥物應在腸道上皮細胞內(nèi)有較高藥物濃度

27、12,如泰樂菌素13、替米考星、泰妙菌素等。第二：用藥周期。用藥周期應在14天以上14，最好可達到21天；第三：用藥時間點。在胞內(nèi)勞森氏菌感染高峰期到達之前給藥可取得良好效果15。若給藥時間“太早”，豬群就無法產(chǎn)生針對胞內(nèi)勞森氏菌的主動免疫，就潛在爆發(fā)急性出血性回腸炎的風險14。結合本次病原學調(diào)查結果，我們建議華東地區(qū)規(guī)?；i場在9周齡11周齡或10周齡12周齡添加泰樂菌素（110g/噸 飼料），連續(xù)用藥三周，以后每月脈沖式加藥一周，直到上市前5天。參考文獻1 Smith S H, McOrist S. Development of persistent intestinal infectio

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